Способ автолиза дрожжевой биомассы

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ т 1 (») 554854

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 16.12.75 (21) 2300374/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.04.77. Бюллетень № 15 (45) Дата опубликования описания 24.0577 (51) М. Кл 2À233 1/18

Государственный иомнтет

Совета Министров СССР оо делам изооретений н открытий (БЗ) УДК 664872(088 8) (72) Авторы изобретения В, М. Беликов, Т. Л. Бабаян, С. Г, Харатьян, В. К. Латов и А. В. Князькова

Ордена Левина институт элементоорганических соединений АН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ АВТОЛИЗА ДРОЖЖЕВОЙ БИОМАССЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа получения автолизата дрожжевой биомассы как биологически ценного вещества, представляющего богатый источник для выделения аминокислот, пептидов, витаминов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов, нуклеозидов, ферментов, ферментных препаратов и т,д.

Известен способ получения биологически активных веществ, содержащихся в дрожжевых клетках, предусматривающий получение активных веществ, например ферментных препаратов — цитохрома "с", рибонуклеазы, рибонуклеиновой кислоты, эргостерина — источника витамина Д, путем разрушения дрожжевых клеток этилацетатом, отделения твердой фазы от жидкой одним из известных способов, высаливания растворимых веществ из твердой фазы раствором сульфата аммония, разделения жидкой фазы фильтрацией на белковый осадок и фильтрат.

Известен также способ приготовления биологически активных дрожжевых автолизатов, согласНо которому автолиз проводят в солянокислой среде при рН около 1,0.

Наиболее близким аналогом по своей технической сущности является способ автолиза дрожжевой биомассы, предусматривающий нагревание ее в присутствии плазмолизатора и консерванта, в качестве которых используется смесь этилаце тата и карбоновои кислоты.

5 Недостатками перечисленных способов являются длительность процесса автолиза и интенсивность окраски автолизатов в результате реакции Майяра, что приводит к образованию гуминов при взаимодействии моносахаридов и аминокислот.

10 Целью изобретения является сокращение длительности процесса, что значительно повысит выход продукта с единицы производственной площалн, снизит энергетические затраты. Кроме того, это может привести к сохранению в автолизате таких

15 ценных продуктов, как аминокислоты, витамины, нуклеиновые кислоты и т.д.

Это достигается тем, что в автолизируемую смесь вводят затравку в виде предварительно полученного автолизата в количестве 11,5 — 50 % от объе20 ма массы;

Пример 1. Получение затравки, В стерильно чистый лабораторный ферментер емкостью 3 л вносят 290 г свежих пекарских дрожжей с содержанием сухих веществ 25%, 70 мл дистиллированной воды, 4,5 мл этилацетата (плазмолизатор) и 1,25 мл концен554854

10 трированнойпропионовойкислоты (консервант),что составляет соответственно 1,16 и 0,48% от объема реакционной массы.

Процесс ведут при непрерывном перемешивании с постоянной температурой в ферментере 50 С в течение 5 час. Получают 300мл автолизата затравки.

Автолиз. В ферментер помещают затравку, 960 г дрожжей, а также 15 мл этилацетата и 5 мл концентрированной пропионовой кислоты и перемешивают 6 час при 50 С. Увеличение времени автолиза при данном способе нецелесообразно, так как приводит к уменьшению выхода аминокислот.

300 мл полученного автолизата (что составляет

23об.% от реакционной массы), оставляют в качестве затравки для автолиза следующей партии субстрата, а остальное количество подвергают дальнейшим операциям.

Анализ продукта (автолизата). Полученный автолизат подвергают центрифугированию. В надосадочной жидкости определяют содержание аминного азота по модифицированному методу P. Филдса с тринитробензолсульфокислотой, а из определенной навески жидкого автолиза (15 г) выделяют свободные аминокислоты и низшие пептиды. По этим показателям судят о скорости процесса автолиза.

Аминокислотную смесь выделяют на ионообменных смолах путем пропускания 15 r автолизата через колонку, наполненую анионитом ИА-1р в ОН форме, а затем собранный раствор аминокислот и

4 пептидов адсорбируют на смолу КУ2Х8 в H+— форме.

Десорбцию аминокислот и пептидов проводят

1 — 1,5 ейным раствором аммиака, после чего элюат выпаривают досуха до полного удаления аммиака, Пр и м е р 2. Все операции аналогичны примеру 1, однако, продолжительность автолиза для затравки 10 час.

Пример 3, Все операции аналогичны примеру 1, но время затравочного автолиза 16 час.

Пр имер 4. Отличается от примера 2 тем, что вместо суспензии затравочного автолиза используют такой же объем центрифугированного автолизата, освобожденного от клеточных мембран.

Пример 5. Отличается от примера1 тем, что количество затравочной суспензии увеличено в 2 раза (46 об.%) .

П р имер 6. Аналогичен примеру 1, но количество затравочной суспензии взято вдвое меньше (11,5%).

Пр имер 7. Аналогичен примеру2, но количество этилацетата и пропионовой кислоты берут соответственно 0,35 и 0,1 об.%.

Пример 8. Аналогичен примеру 1, но в качестве консерванта используют 0,48 об.% ледяной уксусной кислоты.

П р и ме р 9. Отличается от примера1 тем, что вместо системы плазмолизатор — консервант используют 1 об. % толуола.

В таблице показано влияние добавки затравочного автолизата на скорость автолиза дрожжей.

554854 г,», г ОЬОоаОО r- ОС ЧГЧ00<ЧО ООe-. м м О м ° м м О> »

ООО< ааоЕ

СЧО ОООСОО СЧЮ 3 !-Ф ою, - t o о ч с!

-"о "о » l /

С О Оо О о о о о о с а а

00 Î m O О м / о о

1О 00 а Ф м м м З с3 м о\ 5Г) Ф с а с

РЗФ

00 3 о о" ф о (« о о «/

< 4 00 м «» б Ф аж

„, о a о а а! I

° Ф ! I о о с> чъ с - о сп о о а

10 Cg Г) 01 ю n> t oоо о

О О ф с 4 О Ом

О 00 м

С0 С <

e -сто

Г (- О мооо Г « аСЧООO

R с™и m сч

Г« Г .» осчв сч м„О

° м м «Г Ъг г

00 CV 1О ч о м

00 00 О » г

O0 Ch О о а сч

Г Г с,»

СЧ С 4 С 4 м (\Д> оо о оо

an m eq н

, б>

ы 5

Я оо

К !4 о

Ц о н

554854

Составитель М. Ларина

Техред М. Левицкая

Редактор А. Бер

Корректор А. Алатырев

Заказ 373/2 ð 602 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП " Патент ", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ автолиза дромокевой биомассы путем нагревания ее в присутствии плазмолизатора и консерванта, о тл ича ющий ся тем, что, сцелью сокращения длительности процесса и увеличения выхода аминокислот, в автолизируемую смесь вводят затравку в виде предварительно полученного автолизата в количестве 11,5 — 50% от объема массы.