Способ получения дидезоксинуклеозидфосфатов

 

ОПИСАНИЕ <>6!7452

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

РеспублиК (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено,12.07.76 (21) 2385944/23-04 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30.07.78. Бюллетень № 28 (45) Дата опубликования описания 03.07.78 (51};i(. Кл С 07 Н 19/06

Государственный комитет

Совета й1иннстров СССР (53} УДК 547,963.07 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

М. М. Кабачник, E. В. Сняткова, 3. С. Новикова и И. Ф. Луценко

Московский ордена Ленина и ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ДИДЕЗОКСИ НУКЛ ЕОЗ ИДФОСФАТОВ

Оба метода осложняются тем, что.в результате реакции образуется соляная кислота, ко10 торую необходимо удалять пз реакционной смеси, используя органические основания. Образующийся при этом хлоргндрат основания затрудняет выделение конечного продукта, снижая выход последнего.

Первая пруппа методов — применение арнлсульфохлоридоз, основала н а взаимодействии соотзетстзу1ощих .защищеннь1х нуклеотидов и

:чуклеозидов в присутствии,,например, триизопропилбензолсульфохлорида, при комнатной температуре, в .среде абсолютного пиридина з течение 2 — 3 ч.

Недостатком этого метода является большое число побочных продуктов, связанных с применением конденсирующего агента.

Выход конечного, продукта,не превышает

70% 1) .

В последнее время для синтеза дидезоксинуклеозидфосфатов применяют так называемый триэфирный способ синтеза, заключающийся в использовании хлорокиси фосфора или замешенных дихлорангидридов фосфорной кислоты в .качестве фосфорилирующего агента при взаимодействии с соответствующими за20

НО

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения дидезоксинуклеозидфоефатов, важных промежуточных продуктов при синтезе физиологически активных веществ.

Известны способы получения дидезохсинуклеозидфосфатов, большинство из которых связано с применением конденсирующих агептоз, таких как замещенные сульфохлориды и карбодиимидь!. щищенными дезоксинуклеозидами. Реакция проходит при 0 С, в среде абсолютного пиридина, в течение 1 2 ч. Выход динуклеозидфосфатов в случае применения хлорокиси .фос5 фора колеблется от 15 до 52% (2), а в случае фенилдихлорфосфата 55 — 60% (3).

Цель предлагаемого изобретения — увеличение выхода дидезоксинуклеозидфосфатов и значительное упрощение технологического процесса за счет использования нового фосфорилирующего агента. Согласно изобретению описывается способ получения дпдезоксинуклеозидфосфатов обшей формулы 1

®О где N — тимин или аденинрадикал;

617452 тритилдезокситимидина растворяют в 2 — 3 ял абсолютного диоксана, добавляют раствор

R — CH; ОСаН;, -ос= сн,.

1 4Hg ос,н-, I

0,1 яяоль сн г(ос=сн,) в абсолютном диок. з, = г о

В-Р (ОС =СН )

II

О OEK 11

Соединения II — IV (приведены в таблице) получены в аналогичных ч словиях.

Соотношение нуклезиды нуклеотид после ферментативного гидролиза

ФДЭ змеиного яда

Ю с

Й в системах

Дидсзоксппуклсозидфосфат формулы 1 о х

CO

ddTTI TT} 1— Снз

С1.ф томон

0,34 0,42

1: 0,99

0,38

4Тр T5 — томон

0,34 0,44 (1

0,32 0,43

1: 0,98

0,36

83 д ТрРЛ = СН.

J

Сиз М вЂ” адюон

1: 0,92

8() 0,30 г1ТрТВ = OC,í;

Ос н5 Ъ-тимон

0,34 (0,40

1: 0,96

0,44

П р,и м е ч а н и е. Система А: изопропа нол — аммиак — вода 7:1:2; B: бутанол Уксусная кислота — вода 5:2:3; С: этанол — 1М ацетат аммония 7:3.

Литературные данные: Система А: К 0,34; В: R«,32.

® ®

Но К

Формула изобретения заключающийся в том, что защищенный соответствующий дезоксинуклеозид подвергают взаимодействию с фосфорилирующим атентом общей формулы 11

15 в среде абсолютного диоксана и в присутствии следов пиридина с последующим снятием защитных групп.

Реакцию проводят при комнатной температуре в течение 1 — 2 ч в среде абсолютного 2О диоксана. В результате реакции в качестве побочного продукта образуется этилацетат, который не взаимодействует с исходным нуклеозидом и пе дает никаких побочных продуктов. О бразовгн ". 3 — 5 природной межнук- 25 леотидной связи достигается за счет различной реакционной способности двух а-алкоксивиниловых групп фосфорилирующего агента.

Выход динуклеозидфосфата 80 — 85%. Строение полученных веществ подтверждено хрома- 30 тографическими данными. Наличие 3 —.-5 природной ме кнуклеотидной связи в синтезированных динуклеозидфосфатах подтверждается ферментативным гидролизом фосфодиэстеразой змеиного яда, 35

Пример. 51 мг (0,1 млоль) монометоксиСпособ получения дидезоксинуклеозидфосфатов общей формулы сане и 1 — 2 капли абсолютного пиридина и перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем в реакционную смесь добавляют 24 мг (0,1 миоль) дезокситимидина в 5 ял абсолютного .диоксана. Смесь перемешивают 1,5 ч при комнатной температуре.

Диоксан упаривают, остаток обрабатывают

2%-ным раствором трифторуксусной кислоты в абсолютном бензоле для удаления монометокситритильной защиты. Остаток трифторуксусной кислоты удаляют многократным у1париванием с метанолом на роторном испарителе. Остаток разбавляют водой и хроматографируют. Выход дидезоксинуклеозидфосфата после элюции соответствующих веществ с vpoматограммы водой 82%.

Для получения соединения II при использовании ди-(а-алкоксивинил)-изопропенилфосфата. изопропенильная группа удаляется действием 0,01 н. раствора фосфорной кислоты при комнатной температуре в течение 5 чин.

Хроматографические данные и данные ферментативного гидролиза полученных динуклеозидфосфатов приведены в таблице.

617452

-oc=- сн,, сн, R p(oc =сн,}

2 2 о ое н

Составитель Г, Коннова

Техред О. Тюрина

Корректор В. Гутман

Редактор Л. Герасимова

Заказ 439/712 Изд. № 536 Тираж 568 Подписное

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент> где N — тимин или аденинрадикал; взаимодействием защищенных соответствующих дезоксинуклеозидов с фосфорилирующим агентом, с последующим снятием защитных групп, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и |повышения выхода целевого продукта, в качестве фосфорилирующего агента используют соединение общей формулы где R имеет приведенные выше значения, и процесс ведут в среде абсолютного диоксана в присутствии следов пиридина.

5 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. R. Lohrmann, Н. G. Khorana J. Am. Chem.

Soc. Использование 2,4,6-триизопропилбен1О зенсульфонил хлорида для синтеза внутри нуклеотидных связей. 88, 829, 1966.

2. М. М. Кабачник, В. К. Потапов. Синтез олигонуклеотидов на полимерном носителе.

15 5КОХ, 4, 379, 1973.

3. G. Reitz, W. Pfleiderer, Chem. Ber. «Синтез и свойства О -бензилзамещенных диуридилфосфатов». 108, 2878, 1975.