Способ получения производных аденина
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Соавтскнк
Со4мьлистнмвских
Республик
<"I656520 (53) 3L Вл
С 07 О 473/34 (6I ) Дополнительный к натенту (22) ЗаввЛеио 150776(23) 2381802/23-04 (23) Приоритет — (32) 15. 07. 75
Государственный комитет
СССР по аелам изобретений и открытий (31) 25419А/75 . (33) И алиЯ
Опублиноваио 0504.79&юлветень М 13 (63) УДИ547-857. .7.07 (088.8) . Дата опубликования описания 050479
Иностранцы
Пьерджорджо Дзаппелли, Антонио Ро
Розарио Паппа и Лучано Ре (Италия) (72) Лвтоун изобретения ззодивита, т
Иностранная фирма .Снампрогетти С.п.А. (Италия)» (71) Заавитель (54 f СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЬК АДКНИНА
Изобретение относится к способу получения новых производных аденина, которые могут найти применение в качестве исходных продуктов в синтезе коферментов.
Известна реакция алкилирования меркаптидов галоидпроиэводными гетероциклических соединений (1)..
Предлагается способ получения производных аденина общей формулы
ВтМ 1 х®
МН, 34 О О+ - (Сн,, „(оо и (11 Я 14
Н ННИ
I 4 где А — НОСНт- С- С-С-С- или
ОН ОН
С0Я, l .
Н ННН 0Н 0 НННN
I I I
-С- С-С- С- СН,0 -Р- 0-Г-0СН; С С- С- С-М И
ОН 0N 0 О ОИ OH
М вЂ” ион щело- ного металла; п = 1 или 2.
Способ заключается в том, что сое динение общей формулы где A имеет вышеуказанные значения.„
K — - галоид, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы
® (=) 0 0+
М 3 (<2IR)n (!00M (IE)3 где И и и имеют вышеуказанные значения, в полярном апротонном растворителе при комнатной температуре.
В качестве апротонного полярного растворителя могут быть использованы гексаметилфосфотриамид, диметил ьульфоксид, диметилформамид.
Пример 1. Получение 8-(2-карбоксиэтилтио)аденоэина.
В раствор 380 мг (1,1 ммоль) 8-бромаденозина в 5 мл безводного гексаметилфосфотриамида вносят при перемешивании прн комнатной температуре (в атмосфере азота) 683 мг (4,2 ммоль) динатриевой соли 3-ме
656520 каптопропиононой кислоты (полученной обработкой при КоМНаТНоА тем.пературе меркаптокислоты стехиометрическим количеством гидрида натрия в безводном тетрагидрофуране и последующей отгонкой растворителя н вакууме). 5
После перемешинания в течение
16 ч при комнатной температуре смесь фильтруют, к фильтрату приливают
l5 мл воды и несколько раз экстрагируют хлороформом до удаления гексаме-10 тилфосфотриамида, Водный раствор доводят разбавленной соляной кислотой до рН 8,5, хроматографируют на смоле
Доуэкс-1 (НСОО ), элюируя градиентом муравьиной кислоты в воде. Фракции 15 с Л,дс,„с =282 нм объединяют и сушат вымораживанием. Получают 327 мг 8-(2-, -карбоксиэтилтио)аденозина.
Соединение оказывается чистым по данным тонкослойной хроматографии (силикагель с флуоресцентным индикатором; элюент: иэопропанол — вода — 32%-ный едкий аммоний в объемном соотношении 7:2:1; проявление пятна под УФ-лучами при 254 нм; Rf
= 0,56) и высоковольтажного электрофореза (ватманская бумага ЗММ 11х х57 см; электролит — 0,02 М раствор ацетата аммония, рН 5,0, потенциал
5000 В в течение, 40 мин; проявление пятна в УФ-свете при 254 нму мобильность соединения в сторону анода, что находится в согласии с наличием карбоксильной группы, между тем как аденозин мигрирует в сторону катода).
УФ-спектр в 0,1 М растворе едкого натра обнаруживает пик поглощения при 282 нм, между тем как 8-бромаценозин — при 263 нм.
ЯМР-спектр н ИаОН, показывает в дополнение к сигналам аденоэина (за 40 исключением сигналов протона н положении 8) сигналы протонов. боковой цепи: 2 88 д (2 Н, t; СН СОО) и 3 86 (2 Н, t, СН ) .
Масс-спектр также подтверждает структуру (м/е 239, ?21, 142, 167).
Пример 2. Получение никотиноиламид-8-(2-карбоксиэтилтио)-аденоэиндинуклеотида. 50
В раствор 118 мг (160 мкмоль) никотиноиламид-8-бромадениндинуклеотида в 2 мл безводного диметилсульфоксида вносят при перемешинании при комнатной температуре н условиях защиты от влаги в атмосфере азота
98,4 мг (656 мкмоль) динатриевой соли 3-меркаптопропиононой кислоты (полученной описанным в примере 1 способом).
После перемешивания в течение 16 ч 60 при комнатной температуре смесь отфильтровывают и к фильтрату приливают 10 объемов ацетона. Полученный осадок отфугонывают, промывают ацетоном, сушат в вакууме и растворяют в 65
15 мл 0,1 М раствора соляной кислоты.
Раствор доводят разбавленным раствором соды (едким натром) до рН 7,5, хроматографируют на смоле Дауэкс-1 (НСОО ), элюируя градиентом муравьиной кислоты н воде.
Хроматографические фракции с
= 276,5 нм объединяют, сушат вымораживанием (лиофильная сушка) и получают 90 мг никотиноиламид-8 (2-карбоксиэтилтио) -аденозиндинуклеотида. Вещество оказывается чистым по данным тонкослойной хроматографии
{силикагель с флуоресцентным индикатором; элюент: изомасляная кислота вода — 32Ъ аммиаком в объемном соот(ношении бб:33:1,7; проявление пятна
УФ-лампой при Л = 254 нм; Rf = 0,31) и вЫсоконольтажного электрофореза (ватманская бумага ЗИМ 11х57 см; электролит — 0,02 И раствор ацетата аммония, рН 5,0, потенциал 5000 В н течение 30 мин; проявление пятна под УФ-лампой при 254 нм; подвижность соединения н сторону анода больше, чем у НАД н соответствии с
+ наличием карбоксильной группы)..
УФ-спектр в растворе пирофосфатного буфера, рН 8,7, обнаруживает пик при 276,5 нм, который при ферментатинном восстановлении спиртовой дегидрогеназой из дрожжей, переходит к 282 нм с появлением нового пика при 340 нм, характерного для восстановленного ядра никотиноиламида.
ЯМР-спектр в Н О показывает н
2 дополнение к сигналам НАД " (за исключением сигналов протона у углерода н положении 8 адениноного ядра) сигналы, характерные для протонов боковой цепи: ?,88 сР (2Н, 1; СЧ СОО) и 3,86 (2Н, t; СЧ ).
Масс-спектр также находится в согласии с указанной структурой (м/е
221, 192, 1.67).
Пример 3, Получение никотиноиламид-8-(2-карбоксиэтилтио)—
-адениндинуклеотидфосфата.
В раствор 50 мг (57,6 мкмоль) никотиноиламид-8-бромадениндинуклеотидфосфата в 1 мл безводного диметил,сульфоксида вносят при перемешивании при комнатной температуре н условиях защиты ат влаги в атмосфере азота
36 мг {240 мкмоль) динатриеной соли
3-меркаптопропионовой кислоты (полученной описанным в примере 1 способом).
После перемешинания в течение
16 ч при комнатной температуре смесь отфильтровынают и к фильтрату приливают 10 объемов ацетон. Полученный осадок отфуговывают, промывают ацетоном, сушат н вакууме и растворяют в 10 мл 0,1 М раствора соляной кислоты. Раствор доводят разбанленным раствором едкого натра до рН 7,5 и хроматографируют на смоле Дауэкс-1 (C1 " ), элюируя градиентом хлористо5 656520 6 го кальция в воде, имеющим рН 3 бла- фосфата устанавливают аналогично опигодаря добавлению соляной кислоты. санному в примере 2 для соответствуюХроматографические фракции, содержа- щего производного ИАД + (для ферменщие целевой продукт объединяют, упа- тативного восстановления испольэуетривают до небольшого объема и обес- ся дегидрогеназа глюкоза-б-фосфата). соливают фильтрацией через СефадексG-10, элюируя вешество водой. 5 Формула изобретения
Строение никотиноиламида-8-(2- Способ получения производных
-карбоксиэтилтио) -адениндииуклеотид- аденина общей формулы
m 2
Эт &(СН2, СО0 М
Г .„У
Н ННН
I где А — НОСН2- — <-<-q—
Q +J
НННН ОМ О ! 1
С-С-С-C-СН20 — r — 0-Р— ОЩ
ОН ОН 0 0
О
М Я К вЂ” С- C — (-Н
М â€”; n — 1 или 2, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что соединение общей формулы подвергают взаимодействию с соединением общей формулы
80 00
M 5 (сн,)„(оом (ф т где M и п имеют вышеуказанные значения, в полярном апротонном растворителе при комнатной температуре.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
35 1. Вейганд-Хильгетах, Методы эксперимента в органической химии.М., "Химия", 1968, с. 580.
3((М)
3 1 )4.
А
1 где А имеет вышеуказанные значения;
* — галоид, Составитель A. Орлов
Редактор 3. Бородкина ТехредМ.Келемеш Корректор Е. Дичинская
Тираж 512 Подписное
ЦИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москваг F.-35, Раушская наб. д. 4/5
Заказ 1582/53
Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
