Способ лечения гнойно-септических заболеваний

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ (61 ) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 18,0179 (2t) 2714833/28-13 (5f }М. Кл.

А 61 к 37/04 с присоединением заявки Ио (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий

Опубликовано 071230.Бюллетень ¹ 45

Дата опубликования описания 071280 (53} УДК 81б-08 (088.8) (72) Автор изобретения

В.И. Новикова

Витебский государственный медицинский инстнтут (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЧНО-СЕПТИЧЕСКИХ

ЗАБОЛЕВАНИЯ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения больных гнойно-септическими и другими заболеваниями.

Известен способ лечения .гнойно-септических заболеваний с использованием стафилококковой плазмы и иммуноглобулина (11.

Однако известный способ не позволяет прогнозировать эффективность иммунотерапии.

Целью изобретения является прогнозирование эффективности иммунотерапии.

33

Эта цель достигается тем, что в кровИ больных перед лечением предварительно определяют количество лейкоцитов, несущих рецепторы для Fc-фрагментов иммуноглобулинов, и способность к сенсибилизации антистафилококковыми иммунопрепаратами и при наличии 8% и более лимфоцитов и 105 и более гранулоцитов в количестве более 100 мкл крови, имеющих Fc-рецеп- 2 торы, и положительной реакции на сенсибилизацию прогнозируют эффективность иммунотерапии.

Способ осуществляют следующим образом. 30

Лейкоциты выделяют из гепаринизированной крови обычным способом. Определение на них рецепторов для Fcфрагмента иммуноглобулина- 6 проводят методом розеткообразования с эритроцитами быка или голубя, обработанными субагглютинирующими концентрациями антисыворотки, полученной у кроликов после многократной иммунизации соответствующими эритроцитами. Для этого эритроциты предвари-. тельно отмывают йе менее 3-х раз физиологическим раствором так, чтобы не было их лизиса, и готовят их 50%H„ю суспенэию. К 1-2 мл этой суспензии добавляют 2 объема кроличьей про тивоэритроцитарной сыворотки в разведении, превыаающем в 2 раза ее агглютинационнйй титр. Этот титр предварительно определяют в реакции агглютинации с данными эритроцитами. Пометнивая, смесь инкубируют 30 мин при

37 С. Обработанные эритроциты отмывают 3 раза физиологическим раствором и готовят их 2%-ную суспензию.

0,2 мл этой суспензии добавляют к равному объему суспензии лейкоцятов (концентрация 2 млн/мл). Смесь- инкубируют 15 мин при 37 С и ночь при

4о С. Затем осадок ресуспендируют и

784877

Результаты иммунотерапии детей, больных гнойносептическими заболеваниями

До иммунотерапии

После иммунотерапии

Больные

Клетки с Fc-рецепторами (%) и количество

КоличестГруп па

Ангис(-токсин в

МЕ

Клиническое состояние

Перенос сенсибилизации во исходный после ле чения лимфоциты гранулоциты б

3 +1,2Ъ

"0,06 +0,02 3 1,2

0,3 -0,1 0,5 0,2

6 3%

82+9

55 +11

0,15+0 1 14 + 2,8

1 l 12

0,5 + 0,2 "1,64» 0,2 +

8 +2

118 + 16

10+4

194 + 11 добавляют 2 капли 0,6%-ного раствора глютарового альдегида. Через

20 мин из,суспензии готовят мазки, которые фиксируют метанолом и окрашивают галлоцианин-хроМовыми квасцами.

На мазках подсчитывают процент розеткообраэующих лимфоцитов и гранулоцитов, присоединивших более 3 зритроцитов, которые имеют Fc-рецепторы.

На основании анализа крови, выполнен-. ного одновремейно, определяют количество лимфоцитов и гранулоцитов— с Fc-рецепторами в 1 мкл крови.

Способность лейкоцитов больных воспринимать сенсибилизацию от антибактериальных сывороток и иммуноглобулинов определяют следующим обра- 1$ зом. Суспензию лейкоцитов крови или выделенные на градиенте плотности фиколл-верографин лимфоциты и грану— лоциты разводят в растворе Хенкса до конечной концентрации 5 млн/мл.К ®

0,5-2 мл этой суспензии добавляют равный объем антибактериальной сыворотки или иммуноглобулина, которые предполагается вводить больному»Лейкоциты инкубируют с препаратом

30 мин -1 ч при 37О С. Затем дважды

° отмывают их раствором Хенкса, центрифугируя при 1000 об/мин по 5 мин,Осадок лейкоцитов ресуспендируют в растворе Хенкса до концентрации 2 5 млн/мл.

Результаты по переносу сенсибилизации лимфоцитам оценивают в реакции подавления миграции лейкоцитов, используя антигены стафилококка»Если антигены стафилококка подавляют миг- И рацию лейкоцитов, обработаннйх анти- стафилококковой плазмой, но не подавляют миграцию лейкоцитов, обработанных нормальной плазмой, реакция считается положительной.

Оценку переноса сенсибилизации гранулоцитам проводят в реакции их лизиса. Для этого суспензию гранулоцитов (0,25 мл) инкубируют с равным объемом различных разведений антиге- 45 нов стафилококка. К контрольным порциям гранулоцитов антиген не добавляют или используют антиген другой специфичности (стрептококка и др.).

После инкубации 30 мин при 37С смеси центрифугируют при 1000 об/мин.

10 мин,надосадочную жидкость удаляют, а к осадку добавляют 0,1 мл 0,1%-ного раствора трипановой синьки с эозином, приготовленных в растворе

Хенкса. Каплю взвеси лейкоцитов наносят в камеру Горяева и подсчитыва- ют процент живых (неокрашенных) и мертвых (окрашенных) клеток и определяют цитотоксический индекс:(al-d7(y, где а - процент живых клеток в контроле, б — процент живых клеток в опыте. При индексе ) О, 15 реакция переноса сенсибилизации лейкоцитам считается положительной.

П р и м е pi Предлагаемый способ был применен для прогнозирования эффективности иммунотерапии антистафилококковой плазмой и иммуноглобулином 40 детей больных гнойно-септическими заболеваниями, подтвержденной стафилококковой этиологии. Кровь берут y детей за сутки до назначе-. ния препарата. Выделяют лейкоциты и, определяют среди них лимфоциты и гранулоциты, имеющие Fc-рецепторы для иммуноглобулина-9. Другую порцию этих лейкоцитов обрабатывают антистафилококковой плазмой или иммуноглобулином по описанному выше способу. Ставят реакцию лизиса и реакцию подавления миграции лейкоцитов с антигенами стафилококков и для контроля с антигенами стрептококка.

Результаты лечения оценивают по клиническому состоянию больных, а также по изменению концентрации антитоксина в сыворотке крови. Данные предварительного обследования лейкоцитов детей на наличие Fc-рецепторов и перенос лейкоцитам сенсибилизации антистафилококковЪгми препаратами, а также результаты иммунотерапии представлены в таблице.

784877

Продолжение таблицй

После иммунотерапии

До иммунотерапии

Больные

Груп па

Клетки с F с-рецепторами Ъ)и количество

Анги р!. -токсин в

МЕ

Перенос сенсибилизации

Коли чест во

Клиническое состояние исходный после лечения лимфоциты гранулоциты

О, 35+ 0,1 "1,2 + 0,1

19+ 3

241 + 14! !! 12 18+5

220 + 12

0,16 „ 0,3

"21 +6,1

31 «+.5

346 + 21

0,4 + 0 1 Х2,1 0,2

О, 22 4* О, 3 28 + 7,2

9 24+6

+++

250+ 34

П р и м е ч а н и е: а — цитотоксический индекс, б — процент подавления миграции лейкоцитов, "-" после иммунотерапии нет существенного клинического улучшения "+" небольшое улучшение состояния больных, "++" заметное улучшение, "+++" значительное улучшение, X-P <0,05-0,001 по сравнению с исходными данными.

Составитель С. Малютина

Редактор П. Горькова Техред М.Петко Корректор С. Шекмар

Заказ 8699/3 Тираж 673 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, NocKEa, Х-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Наилучшие результаты лечения наб-. людались в III u IV группах больных, у которых имелось наибольшее количество лимфоцитов и гранулоцитов, несу- Зп щих рецепторы для Fc-фрагмента иммуноглобулина- 6 и у которых поЛучен перенос сенсибйлизации к антигенам стафилококка антистафилококковой плазмой и иммуноглобулином. Иммунотерапия была неэффективной в груп пе больных, имеющих низкий уровень (ЗЪ)Гс-рецептор несущих лимфоцитов и гранулоцитов (6%) при количестве их менее 100 в 1 мкл крови, а также при отрицательной реакции переноса 40 сенсибилиэации антистафилококковыми препаратами к антигенам стафилококка.

Следовательно, назначение антистафилококковых иммунопрепаратов 45 больным I группы нецелесообразно, так как не вызывает положительного эффекта, а поэтому удлиняются сроки лечения и нерационально расходуются дорогостоящие иммунопрепараты.Этих ур больных необходимо лечить препаратами, восстанавливающими рецепторы лейкоцитов.

Предлагаемый способ позволяет прогнозировать эффективность иммунотерапии.

Формула изобретения

Способ лечения гнойно-септических заболеваний с использованием стафилококковой плазмы и иммуноглобулина, отличающийся тем, что, с целью прогнозирования эффективности иммунотерапии, в крови больных перед лечением предварительно определяют количество лейкоцитов, несущих рецепторы для Fc-фрагментов иммуноглобулинов, и способность к сенсибилизации антистафилококковыми иммунопрепаратами и при наличии 83 и более лимфоцитов и 10% и более гранулоцитов в количестве более 100/мкл

Крови,имеющих Fc-рецепторы,и положительной реакции на сенсибилизацию прогнозируют эффективность иммунотерапии.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Справочник по применению бактериальных и вирусных препаратов под.ред. Дэагурова С.Г. М-., Мед., 1975, с. 166-168.