Способ определения действия протеоли-тических ферментов ha компонентысвертывающей системы крови

 

О П И C А Н И Е ц828089

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 10.05.79 (21) 2759665/28-13 с присоединением заявки № (51) М К„з

G 01N 33/86 (43) Опубликовано 07.05.81. Бюллетень № 17 (53) УДК 615.779.94 (088.8) по делам изобретеиий и открытий (45) Дата опубликования описания 07.05.81 (72) Авторы изобретения (71) Заявители

Я. Д. Мамедов, P. Г. Сафаров и О. А. Нариманбеков

Азербайджанский государственный медицинский институт им. Н. Нариманова, Общественная конструкторскотехнологическая лаборатория изобретателей и рационализаторов в области медицины Азербайджанского республиканского

Совета ВОИР и Азербайджанский общественный институт изобретательского творчества (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ НА КОМПОНЕНТЫ

СВЕРТЪ|ВАЮЩЕЙ СИСТЕМЫ КРОВИ

ГосУдаРствеииый комитет (23) | |риоритет

Изобретение относится к области медицинской биохимии, а точнее к способам определения действия протеолитических ферментов.

Известен способ определения действия 5 протеолитических ферментов на компоненты свертывающей системы крови путем совместной их инкубации (1). Однако известный способ не позволяет выявить структурные превращения белковых молекул компонентов свертывания крови при действии на них фермента. Целью изобретения является повышение точности способа и упрощение его.

1|оставленная цель достигается тем, что 15 инкубацию ведут при 1=35 — 38 С в течение 10 — 12 мин, образовавшиеся бинарные системы, а также компоненты свертывающей системы крови помещают на подложки из поликристаллов солей талия из расчета

0,1 — 1,0 мг вещества на 1 см, высушивают их в течение 20 — 30 мин при t=30 — 35 С до образования пленки толщиной 8 — 10 мк, проводят ИК-спектральный анализ полученных образцов в диапазоне волн 700 см — —

4000 см †и по разнице относительных интегральных интенсивностей полос поглощения бинарных систем и соответствующих компонентов свертывания крови определяют действие протеолитических ферментов на компоненты свертывающей системы крови.

11римеры конкретного исполнения способа.

Ферментативную активность террилитина по отношению к компонентам системы свертывания крови определяют следующим ооразом. Ооразцы компонентов системы свертывания крови и оинарной системы фермент-компонент в количестве 10,0 — 15,0 мг растворяют в бидистиллированной воде, раствор наносят на пластинку KPS — 5, высушивают в вакуумном эксикаторе при давлении 20 — 25 мм рт. ст., температуре 35"С в течение 20 — 30 мин до образования равномерной пленки толщиной б — 10 мк, просматривают на ИК-спектрофотометре в инфракрасной области, получают спектрограмму в области 700 — 4000 см — .

На спектрограммах выделяют характеристические полосы поглощения, определяют относительные интегральные интенсивности полос поглощения каждой бинарной системы и соответствующего компонента и по наибольшей разности относительных инте828089

Интегральную интенсивность определяют проведением на полученной ИК-спектрограмме соответствующей базисной линии и расчетом площадей соответствующих пи5 ков по общепринятой методике.

Величины относительных интегральных интенсивностей полос- поглощения, полученных на основе анализа ИК-спектров для образцов компонентов системы свертывания

10 крови и соответствующих бинарных систем при 1 — 5% содержания фермента приведены ниже.

1 400

3 200

0,182

0,126

0,657

0,635

0,260

0,146

0,348

0,148

ОБРАЗЦЫ

РАЗНОСТЬ

Протромбин

Террилитин-протромбин

Тромбин

Террилит ин-тромб ин фибрин

Террилитин-фибрин фибриноген

Террилитин-фибриноген

0,056

Компонент

Бинарная система

Компонент

0,022

Бинарная система

Компонент

0,014

Бинарная система

Компонент

0,200

Бинарная система

Как видно из приведенных данных наибольшая разность относительных интегральных интенсивностей полос поглощения ха- 15 рактерна для системы террилитин-фибриноген.

На основании анализа спектральных данных можно заключить, что террилитин обладает наибольшей избирательной актив- 20 ностью к фибриногену; менее активен террилитин к другим компонентам системы свертывания крови — к фибрину, тромбину, протромбину.

Предложенный способ позволяет с большей степенью точности определить действие протеолитических ферментов на компоненты свертывающей системы крови. Метод является простым в исполнении свертывающей системы крови. Метод является 30 простым в исполнении и позволяет выявить структурные превращения белковых молекул.

Формула изобретения

Способ определения действия протеолитических ферментов на компоненты свертыСоставитель Л. Морозова

Техред И, Пенчко

Редактор О. Иванова

Корректоры: Н. Федорова и P. Беркович

Заказ 917/18 Изд. № 361 Тираж 915 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 гральных интенсивностей полос поглощения бинарных систем и соответствующих компонентов определяют избирательную ферментативную активность.

Для этого при определении относительных интегральных интенсивностей полос поглощения выбирают полосы поглощения, отвечающие частотам 3200 см — и 1400 см —, определяют их площади с последующим расчетом относительных интегральных интенсивностей. вающей системы крови путем совместной их инкубации, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и упрощения его, инкубацию ведут при

t=36 — 38 С в течение 10 — 12 мин, образовавшиеся бинарные системы, а также компоненты свертывающей системы крови помещают на подложки из поликристаллов солей талия из расчета 0,1 — 1,0 мг вещества на 1 см, высушивают их в течение 20—

30 мин при t=30 — 35 С до образования пленки толщиной 8 — 10 мк, проводят ИКспектральный анализ полученных образцов в диапазоне волн 700 см- †40 см- и по разнице относительных интегральных интенсивностей полос поглощения бинарных систем и соответствующих компонентов свертывания крови определяют действие протеолитических ферментов на компоненты свертывающей системы крови.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Б. Уильямс, К. Уиолсон. Методы практической биохимии. «Мир», М., 1978,. с. 153 — 155.