Способ определения клеток крови на цитологических мазках при световом и электронномикроскопическом исследовании

 

ОП ИСАНИЕ ц

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДНЕЛЬСТВУ. (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 2g0479 (23) 2750317/28 13 (51)М з с присоединением заявки HP (23) Приоритет

G 01 N 1/28

A 61 В 10/00

Государственный комитет

СССР по деяам изобретений н открытнй

Опубликовано 0711.81. Бюллетень М 41

Дата опубликования описания 071181 (53) УДК 815. 475 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г.К.Гогичадзе и И.Л. Яковлев

Научно-исследовательский институт гемат и переливания крови им. акад. Г.М..Мухадзе (73) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК КРОВИ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ

МАЗКАХ ПРИ СВЕТОВОМ И ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ

Способ осуществляют следующим образом.

20 Мазки крови или пунктат ко тного мозга приготавливают на эпоновых пластинках, изготовленных с размерами, соответствующими размерам обычным предметным стеклам. На вычищенной от эмульсии фотопластинке размером .9х12 см делается остов с размером, соответствующим обычному предметному стеклу, посредством стандартных предметных стекол или стеклянных по30 лосок. Предварительно поверхность

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и цитологии.

Известен способ определения клеток крови на цитологических мазках при световом и электронномикроскопическом исследовании, который заключается в том, что приготовленные на обычных предметных стеклах мазки крови фиксируются для электронного микроскопа, обезвоживаются, покрываются заливочной средой (эпоксидной смолой), после чего на них помещается органическое стекло. Образец полимеризуется, а после отделения стекол друг ох друга мазок оказывается на органическом стекле. Затем в фазовоконтрастном микроскопе специальным метчиком отмечаются выбранные клетки, после чего они вырезаются, прикрепляются каплей заливочной среды к блоку из органического стекла и полимеризуются. Через несколько дней затачивается пирамида (1).

Однако такой способ включает большое количество операций, что затягивает время исследования при определении лейкозных клеток.

Цель изобретения — сокращение вре+ мени исследования при определении лейкозных клеток.

Поставленная. цель достигается тем, что при осуществлении способа опреде" ления клеток крови на цитологических

5 мазках при световом и электронномикроскопическом исследовании, включающего приготовление мазка на предметном стекле, фиксацию, обезвоживание, заключение материала в эпоксидную смолу и выбор клеток, подлежащих электронно-микроскопическому изучению, мазок наносят на предметное стекло, изготовленное из эпоксидной смолы, а выбор клеток проводят до его заключения в эпоксидную смолу путем окрашивания в красителе Майн-Грюнвальда в течение 20-30 мин.

879368

Формула изобретения

Составитель Л.Соловьев

Техред А.Ач Корректор М..Шароши

Редактор С.Суркова.

ЗАКАЗ 9704/8, Тираж 91.0 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,, 4 фотопластинки и предметных стекол, ооставляющих остов, тщательно смазы-,, вают тонким слоем термостойкой смазки ки - ЦИАТИМ. В остов вливают окончательный состав смолы — Эпон-812 с катализатором и фотопластинку ставят в горизонтально расположенный термостат. После полимеризации в течение ,48 ч при 60ОС зпоновая пластинка посредством легкого поддевания скальпелем отделяется от формы, Полученная эпоновая пластинка имеет толщину 23 мм и достаточную для микроскопирования прозрачность. Эпоновую пластинку перед нанесением мазков протирают спиртом и покрывают тонким слоем раствора альбумина. Мазки крови и костного мозга окрашивают и просматривают в светооптическом микроскопе под иммерсионным объективом. После выявления интересующей клетки не фотографируют, под иммерсионным объективом 2О помещают точно в центре поля зрения.

Затем посредством объектива с увеличением в 20 раз с опущенной диафрагмой и с фокусированной нижней поверхностью эпоновой пластинки отмечают с обратной стороны центр поля зрения.

Сняв эпоновую пластинку с предметного столика микроскопа, с обратной стороны простыми чернилами отмечают кружок, в центре которого находится метка. Затем производят контроль на наличие интересующей клетки точно в центре кружка и отмеченный участок вырезают посредством вращения металлической трубки. Полученный образец .представляет собой эпоновый диск с мазком, в центре которого размещена интересующая клетка. (размером 2х2 мм) .

Диск помещают в широкодонную пробирку и фиксируют в 1Ъ-ном, растворе глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфе- Щ ре (рН 7,2-7,4) на 15 мин, а затем после кратковременной промывки в фосфатном буфере в 1Ъ-ном растворе четырехокиси осмия на том же буфере на 10 мин. После промывки в буфере проводят процесс дегидратации и инфильтрации эпонового диска с мазком, в 70 спирте материал помещают на

5 мин, в 96О- на 5 мин, в 100О- на

5 мин по 2 смены, в абсолютном ацетоне на 5 мин, в смеси абсолютного .ацетона с зпоном - на 5 мин, в эпоне .без катализатора также на 5 мин, 3аключение эпонового диска с мазком в эпоксидную смолу проводится в желатиновой капсуле. Полимеризация материала проводится при 60 С в течение 48 ч.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает непродолжительное время подготовки препарата для электронного микроскопа (48 ч по сравнению с известным, где требуется как минимум 96 ч). Способ не требует никакого дополнительного оборудования (фазоконтрастная прйставка, специальный метчик) экономичей, так как все процедуры, связанные с электронной микроскопией, производятся после выбора интересующей нас клетки, в то время как в известном способе эти же манипуляции проводятся сразу же .после нанесения мазка, что требует фиксацию нескольких мазков из-за вполне возможного отсутствия интересующей нас клетки в мазке. Проводка материала для электронной микроскопии в способе производится на объекте размером 2х2 мм, что значительно сокращает расход дорогостоящих реактивов, в то время как в известном способе проводка проводится на предметных стеклах размером

25х75 мм, что приблизительно в

500 раз больше °

Способ определения клеток крови на цитологических мазках при световом и электронномикроскопическом исследовании, включающий приготовление мазка на предметном стекле, фиксацию, обезвоживание, заключение материала в эпоксидную смолу и выбор клеток, подлежащих электронномикроскопическому изучению, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью сокращения времени исследования при определении лейкозных клеток, мазок наносят на предметное стекло, изготовленное из эпоксидной смолы, а выбор клеток проводят до его заключения в эпоксидную смолу путем окрашивания в красителе Майн-Грюнвальда в течение 2030 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ростомян М.А ° и Абрамян К.С.

Ультраструктура клеток крови. Иэд. .АН Арм. ССР, 1975, с. 8-19.