Способ определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови

 

Союз Советсиии

Социалистические

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< >922636 (6I ) Дополнительное к авт. саид-ау-! ,(22) Заявлено 25. 06. 80 (21) 2945812/28-13 (51)М. Кл. с 01 г 33/48 с присоединением заявки J42—

3Ьеудорстеенньй номнтет

СССР (23) Приоритет ао деяом нзобретеннй н открытий

Опубликовано 23 04 82 ° Бюллетень № 15

Дата опубликования описания 2 >. 04. 82 (53) УДК 612. 13 (088. 8) (72) Автор изобретения

Г

В. В. Банкова с

Ордена Ленина и ордена Трудового Красног Знамени научно-исследовательский институт педиа рии (7!) Заявитель

«ИВ

Г

Академии Медицинских Наук СССР (5Й) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬДОСТЕРОНСВЯЗЫВАЮЦЕИ

СПОСОБНОСТИ БЕЛКОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ

Йзобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики заболеваний, протекающих с нарушением альдостероновой системы.

Известен способ определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови путем инкубирования пробы плазмы с меченым альдостеро-.. ном с последующим отделением несвязанного альдостерона и измерения

10 радиоактивности супернатанта L11.

Однако известный способ недостаточно специфичен, что снижает точность и ведет к неправильным результатам диагностики.

Цель изобретения -. повышение спе" цифичности способа.

Эта цель достигается тем, что согласно способу определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови путем инкубирования пробы плазмы с меченым альдостероном с последующим отделением несвязанного альдостерона и измерения радиоактив-.

2 ности супернатанта, в пробу перед инкубированием добавляют кортикостерон, а инкубацию ведут в физиологическом режиме в течение 2-3 ч.

Способ осуществляют следующим образом.

Производят забор венозной крови, а затем отделяют плазму. К 0,1 мл плазмы добавляют 0,1 мл фосфатного буфера рН = 7,.6, 0,1 мл раствора

14 С вЂ” альдостерона и О,1 мл раствора немеченого кортикостерона. Пробу инку- бируют 2-3 ч при 37 С, периодически помешивая, и после определения общей радиоактивности в О, 02 мл пробы в нее добавляют по 0,4 мл суспензии углядекстрана. После 10-минутной инкубации на льду пробу центрифугируют и супернатант пробы переносят в счетную камеру для измерения радиоактивности. Связанный альдостерон вычисляют как процент от общей радиоактивности в пробе без кортикостерона, 3 922636 4 имп/мин связанного альдостерона щее связывание 100. имп/мин общей радиоактивности

30 формула изобретения

Неспецифическое связывание с альдостеронсвязывающим белком определяют путем вычитания специфического связывания из общего. Специфическое связывание с альдостеронсвязывающим белком получают по радиоактивности в пробах с добавленным кортикостероном. 10

Для определения связывания меченого альдостерона белками плазмы требуФ ется две параллельные пробы по 0.1 мл плазмы, в которые добавляется фосфат- .1s ный буфер (рН = 7,6) .(0,2 мл в одну пробу и 0,1 мл в другую), затем во все пробы добавляется меченый аль- достерон в 0,1 мл фосфатного буфера, а во вторые пробы -.0,1 мл кортико- щ стерона (1 мкг в 0,1 мл фосфатного буфера . Используется С вЂ” альдостерон фирмы Амершам, уд.акт.55 мк/м.

В пробу вводят 10-20 тыс.имп./мин, что соответствует 6-8 -10 М или д5

20-40 пг. Добавление возрастащих коОбщее связывание— импlмин свя имп/мин общ

О

Специфическое связывание с ACI рассчитывают по формуле в пробах с добавлением кортикостерона. Неспецифическое связывание с транскортином, определяют путем вычитания специфического связывания из общего. Результаты исследования связывающей способности белков плазмы крови у здоровых и больных первичной артериальной гипертонией детей, у крыс трех возрастов и у здоровых кроликов показали, о что у детей с первичной артериальной гипертонией увеличено специфическое и особенно транскортиновое связывание альдостерона. Принимая во внимание тот факт, что связанный с белком гормон не подвергается метаболизму в печени, определение связывающей способности белков плазмы позволяет определить одну из сторон метаболического клиренса альдостерона. Увеличенное связывание альдостерона у детей с первичной артериальной гипертонией указывает на уменьшение у них метаболического клиренса альдостерона по сравнению со здог ровыми детьми. У крыс связывание возрастает, что предполагает уменьшение метаболического клиренса альдостероличеств С вЂ” альдостерона приводит к к соответствующему увеличению связывания гормона белками, в результате чего сохраняется один и тот же процент связывания, который в данной системе является константной величиной. Пробы инкубируют 2 ч при 37 С, периодически помешивая, и после определения общей радиоактивности в

0,02 мл каждой пробы добавляют по

0,4 мл смеси угля-декстрана j0,43 декстран - 80 и 43 активированный уголь марки Norit-Л) в фосфатном буфере. После 10 - минутной инкубации на льду пробы центрифугируют при

2500 и в надосадочной жидкости определяют,радиоактивность íà р- счетчике

Marlc-III после добавления сцинтилляционной жидкости с тритоном Х-100.

Общее связывание альдостерона с белками плазмы рассчитывают как процент от общей радиоактивности в пробе без кортикостерона.

1 анного альдостерона . 100 ей радиоактивности на. Это в основном специфическое связывание в отличии от кроликов, у которых альдостерон в большей степени связывается с транскортином,, с возрас том - у крыс.

Таким образом, использование предложенного способа повышает его специфичность, точность диагностики забо леваний, протекающих с нарушением альдостероновой системы. При этом способ прост и сокращает сроки исследования проб.

Способ определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови путем инкубирования пробы плазмы с.меченым альдостероном с последующим отделением несвязанного альдостерона и измерения радиоактивности супернатанта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения специфичности способа, в пробу перед инкубированием добавляют кортикостерон, а инкубацию ведут в физиологическом режиме в течение

2-3 ч.

5 922636 6

Источники информации, Lebel H, Dynamik aldostегоne and принятые во внимание при экспертизе. 18-hydroxydeoxycorticostегоne stu1. Nmaczynski Ч., Kuchel О., dies in labile and stable benign esGenest T. 31esserli F.Í., Honda И, sential hypertension. Т. of Stегоid

Tolis G., Seth К., Parvin-Pande и, s Biochanistry, 1975, v. 6, N 5, Kufo S. Grosse Т., 1.edoux F. and рр. 767-778, I

Заказ 2573/59

ВНИИПИ по

113035 к

Тираж 883 Подписное

Государственного комитета СССР делам изобретений и открытий

Москва.Ж-Я Раушская наб.i g. 4/

Филиал Allfl "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, Составитель Ю. Алмазов

Редактор А. Козориз Texpeg А.Бакинец Корректор О. Билак