Фторированные аналоги простациклина,проявляющие антиагрегационную активность и способ их получения

 

1. Фторированные аналоги простациклина общей формулы С00Х

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (И) А зсю " 61 K 31/19

Ц"

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

QOOX о ф

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3235701/28-13 (22) 02.02.81 (46) 07.10.83. Бюл. 1(37 (72) В.B. Безуглов, К.М. Лакин, В.А. Макаров и Л.Д. Бергельсон (71) Московский ордена Трудового

Красного Знамени медицинский стома тологический институт им. Н.А. Семашко и ордена Трудового Красного

Знамени институт биоорганической химии им. M.M Шемякина

{53 ) 547.514.71.07 (088.8) (56) 1. Я„Т.Iryglewski et al., Prostaplandins, 1?78, 15, 637 °

1 (54 ) ФТОРИРОВАННЫЕ АНАЛОГИ ПРОСТАЦИКЛИНА, ПРОЯВЛЯ!ОЩИЕ АНТИАГРЕ ГАЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ (57) 1, фторированные аналоги простациклина общей формулы

S, F где Х - щелочной металл, например натрий или калий

Ф проявляющие анти агре гационную акти вность.

2. Способ получения фторированных аналогов простациклина, о т л и ч а ю шийся тем, что растворяют метиловый эфир 15-фтор-15-дезокси-5-йодпростагландина 1 в органическом растворителе менее полярном, чем спирт, прибавляют к,раствору алкоголят натрия или калия, полученную смесь нагревают при температуре

70-75 С в течение 45-90 мин, непосо редственно обрабатывают смесь 0,01 М гидроокисью щелочного металла в течение 90-120 мин.

47999 2

1 9

Изобретение относится к области химии и медицины и может найти применение в проведении экспериментальных медико-биологических исследований и в лабораторной практике.

Известен природный простациклин. мощный ингибитор агрегации тромбоцитов (1 )

Однако обладая высокой биологической активностью, он быстро раз" рушается при комнатной температуре и при физиологических значениях рН .

0Х

Целью изобретения является разработка способа получения фторированных аналогов простациклина общей химической формулы где Х - щелочной металл, например натрий или калий, проявляющие антиагрегационную активность .

Способ получения фторированных аналогов простациклина отличается тем, что растворяют метиловый эфир

15-фтор-15-дезокси-5-йодпростагландина I„ в органическом растворителе менее полярном, чем спирт, прибавляю к раствору алкоголят натрия или калия, полученную смесь нагревают при температуре 70-75оС в течение

45-90 мин, непосредственно обрабатывают смесь 0,01 М гидроокисью щелочного металла в течение 90120 мин.

Полученные соединения ингибируют агрегацию тромбоцитов в тех же концентрациях, что и природный простациклин. Однако в отличие от последне го они в 5-6 раз более устойчивы о при длительном хранении при 5 С.

П р и. м е р 1 . Синтез натриевой соли 15-фторпростациклина (1,Х =

= Йа).

Смесь 3 мг 15-фтор-5-йод-6,9 (К) -эпокси" 11 ()Ъ ) -оксипростен-13овой кислоты, 0,15 мл диоксана, 0,3 мл метанола и 0,075 мл метанольного раствора метилата натрия (25 мг/мл )инкубируют l ч при 75 С в запаянной ампуле. ампулу охлаждают, вскрывают, добавляют к содержимому 0,1 мл 0,01 М ЙаОН в Н20, снова запаивают и инкубируют 1,5 ч при

75 С. Реакционную смесь упаривают о досуха в вакууме при комнатной тем/ пературе, остаток растворяют в

0,5 мл диметилсульфоксида и используют для исследования действия

15-фторпростациклина (1, Х = Йа ) на агрегацию тромбоцитов. Указанная форма 15-фторпростациклина содержит некоторое количество гидроокиси щелочного металла (Na ), стабилизирующее кислотолабильный фторпростациклин {1, Х = Ма). По данным тонкослойной хроматографии в системе, исключающей распад простациклина во время хроматографии (хлороформметанол-2, 5 н. водный раствор аммиака 5:1:0,1), 15-фторпростациклин (1, Х = Ча ) практически не содержит продуктов распада, К 15-фторпростациклина (Х = Йа ) 0,34.

Для определения выхода целевого продукта, а именно натриевой соли, 15-фтор- 15-дезокси простагландина

I2 используют реакцию превращения простациклина в более стабильный

6-кетопростагландин F . После проведения описанных выше реакций с

3 мг 15-фтор-5-йод-6,9 (о )-эпокси-11(P )-оксипростен- 13-овой кислоты сухой остаток после удаления растворителей растворяют в 0,5 мл 0,24 M буфера Трис-НС7,, рН 5,0, выдерживают 30 мин при комнатной температуре и экстрагируют эфиром (3 15 мл), Эфирный экстракт упаривают досуха, остаток растворяют в эфире, фильтруют и упаривают досуха. Получают

2,2 мг (984 ) 15-фтор-15-дезокси-6-кетопростагландина { F>< R О, 13, система: хлороформ-метайол-2, 5 н . водный раствор аммиака: 5:1:0,1 ).

Масс спектр трис-триметилсилильного производного, (е относительная интенсивность, t }, 588 (0,1)(М+), 573 (0,2) (М СН5} 568 {0,1) {М+нг)

523 {О, 2), 517 (1, 5) (М+ С5Н1.1), 495 (1) М -ТМС-НГ), 483 {11 (М+-ОТИС-СН3),467 (2 ), 458 (2 ) (М+-СВН Г), 427 (3 >, 407 (б ), 382 (5), .

3"1 (6 ) 339 (5 ), 329 (4 ). 328 (6.).

327 (4 ), 314 (6) 313 (14) (g+-ОТИС-НОТМС-ТМС-НГ ) 279 (22 ), 265 (19 ), 199 (6 ), 132 (14}, 165 (17)

139 (100 ).

Для сравнения антиагрегационного действия 15-фторпростациклинов (I, где Х принимает указанные выше

Заказ 8008/1, Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ ул. Проектная, 4

3 9479 значения 2 и природного простациклина, раствор последнего в диметилсульфоксиде получают по описанной выше методике из 3 мг метилового эфира

5-йод-6, 9 (< 2-эпокси-11 (И; 15 (S)-диоксипростен-13-овой кислоты.

Пример 2 . Антиагрегационное действие натриевой сали 15-фторпростациклина (1, Х = Йа ).

К 0,9 мл обогащенной тромбоцитами плазмы, содержащей 200-250 тыс, тромбоцитов, добавляют О, 1 мл раствора 15-фторпростациклина (1, Х = Йа 2

l в диметилсульфиде. После 10-минутной инкубации измеряют агрегацию кровяных пластинок, вызванную АДФ в конечной концентрации 0,2 мкг/мл.

Агрегацию определяют по методу Борна на установке, состоящей иэ фото электроколориметра ФЭК-56М:и само- 20 пишущего потенциометра КСП-4 .

В исходном состоянии агрегация тромбоцитов составляет 53+53. При добавлении 10 мкг/мл 15-фторпростациклина (1, Х = Na) -9 + 14, 1 мкг/м

-10 + 13, 0,1 мкг/мл -10 + 0,01 мкг/мл

- 30 + 3i. При добавлении в кювету фотоэлектроколориметра 10 мкг/мл простациклина агрегация составляет

5 + 13, 1 мкг/мл - 8 + 13, 30

0,1 мкг/мл — 9 + 1i, 0,01 мкгlмл-29+ 3> °

Через 1,5 мес. после опыта проводят повторное исследование антиагрегационной активности данных образцов 35

/ простациклина и, 15-фторпростациклина, хранившихся в растворе в диметилсульфоксиде при 4 С. При анализе о действия простациклина отмечена полная потеря антиагрегационной актив- 40 ности. В концентрации 10 мкг/мл

-агрегация составляет 50 + 51, 1 мкг/мл - 53 + 5Ф. Между тем 15,-фторпростациклин (1, Х = Йа 2 по-преж. ,:нему проявляет антиагрега ионное 45 действие. В концентрации 10,1 мкг/мл он снижае т анти а гре г ационную способ- ность тромбоцитов до 10 + 13, в концентрации 0,01 мкг/мл — до 30 + 14.

Таким образом, простацикпин и

15-фторпростациклин (1 Х = йа ) профилиал ППП "Патент", r. Ужгород, являют одинаковую силу антиагрегациойного действия, но в отличие от про стаци клина 15- фторпростаци клин (1, X = Йа 2 сохраняет свою высокую антиагрегацйойную активность при длительном хранении в растворе в диметилсульфоксиде, стабилизированном гидроокисью щелочного металла (натрия ).

Пример 3 . Влияние натриевой соли 15-фторпростациклина на концентрацию тромбоцитов при получении тромбоплазмы .

В 0,4 мл 3,8 -ного раствора цитрата натрия добавляют О,1 мл раствора, содержащего 100 мкг 15-фторпростациклина, и набирают кровь до 5 мл. Пробу центрифугируют со скоростью 1000 об./мин. Получают обогащенную тромбоцитами плазму с числом кровяных пластинок 360000 на 1 мм3. В контрольной пробе, где вместо раствора фторпростациклина добавляли физиологический раствор, концентрация тромбоцитов составила

250 000 на 1 мм . Таким образом, заявляемое вещество повышает выход тромбоцитов из крови, что может найти применение для получения тромбоплазмы.

Пример 4 . Влияние 15-фторпростациклина на агрегацию тромбоцитов в условиях организма.

5 мл тромбоплазмы, содержащей

100 мкг 15-фторпростациклина, вводят внутривенно кролику весом 2 кг. В исходном состоянии агрегация составляет 50 + 5г, через 10 мин после трансфузии агрегация составляет

55 + 53. Таким образом, 15-фторпростациклин не оказывает антиагрегационного действия в условиях организма . Заявляемое вещество может

Ф быть использовано для консервирования тромбоплазмы, что 15-фторпростациклин и его производные могут найти применение для стабилизации обогащенной тромбоцитами плазмы в экспериментальной гематологии, онкологии, радиологии и др.