Способ определения жизнеспособности сердечной мышцы в условиях гипотермии
ОП ИСАНИ Е
ИЗЬБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик (ii 972314 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 01.04.81 (21) 3273098/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (5l) М. К;.
G 0l N 1/28
A 61 B 10/00
Гооударстееиимй комитет (53) УДК 615.475 (088.8) Опубликовано 07.11.82. Бюллетень № 41
Дата опубликования описания 17.!1.82
Ilo делам изобретеиий и открытий (72) Авторы изобретения!
Д. И. Рыжаков и А. Г. Маслов
"-, -ъ с
Горьковский медицинский институт им. С. М. Кирова
Й: (()Щ м
ЛА ТЕ11ДД1.
ГГХЮГЧИ;1,"М д
Ц!!1 Я!!0 Т;;,« (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ В УСЛОВИЯХ ГИПОТЕРМИИ
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно морфологии.
Известен способ определения жизнеспособности сердечной мышцы путем определения ее энергетики !! ).
Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.
Цель изобретения - повышение точности способа.
Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения жизнеспособности сердечной мышцы в условиях гипотермии исследуют срезы сердечной мышцы, на которых определяют общее содержание митохондрий и митохондрий, содержащих фермент сукцинатдегидрогеназу, и по соотношению митохондрий с положительной активностью фермента к общему содержанию митохондрий определяют жизнеспособность сердечной мышцы.
Способ определения жизнеспособности ткани сердца осуществляют следующим образом.
У животного под эфирно-кислородным наркозом в 4-5 межреберье слева производят торакотомию и проводят прижизненную биопсию миокарда левого желудочка для гистохимического и электронно-микроскопического анализов. В одном сосуде растворяют 5 мл нитросинего тетразолия (Нитро-СТ фирмы Реанал) в !5 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,6. В другой сосуд наливают 15 мл дистиллированной воды,в которой растворяют 405 мг сукцината натрия.
Содержимое обоих сосудов сливают, npu ð готовленную среду наносят на криостатный срез и выявляют активность сукцинатдегидрогеназы СДГ, которая используется как маркер метабоаически эффективных митохондрий. Полученный срез с выявленными митохондриями с положительной активностью фермента с помощью микроскопа
МБИ вЂ” 6 с увеличением в 400 раз фотографируют пять разных полей (с одного препарата). Площадь одного поля 0,1085 см2.
Производят подсчет гранул (т. е. выявив ленных митохондрий с положительной активностью фермента) в каждом поле. Подсчитывают среднее количество гранул на одно поле, которое в данном случае равно
463,7 <- 39,4
9723!4
Фс)1 ь(!у га изобретения
ВНИИПИ лаказ 8080i31 ираж 887 Подеписное
Филиал ППП! «Пате(»», г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Зат«ХЕ, с помощью эл«к Гро>-.ной микроско»ии (увеличение 20 21 тыс. раз) по.(счиГЕ,»)е!к).! количество Всеx им«к>шихся митоxotI «ðHé {5324: 624) на Tj же 07(HIIHI(v ил о!цади»IHOKB pда (0,1085 с м ) .
Из общего количества (53 .),4= 62,4) выЕ:ит;!ют количество мит(>хондрий с положи(«Г!!«!)01! ак THBflOcTbio ферме»та (463, 7 : 39,4
»! учак>7 K(). IH÷cctво мити>н ндрий с отри»а (ел(и!ой активностьк> ферме»га (68,7). ! 10 соотношению колич«Оп Ба .читохо»дрий с»оложительной актив»(.стьк7 ф«рм ll»!итохо>1,(ре)й с», (ят об у(н>Б»с жизнсс»особ»ости Гка»и (ердца
Б (,10 ВИЯХ Эф H PI! 0-KHCËOPOДИОГО HB f) KO3ii, Негl и ч и н а с О от н 01» (. н и я B;1 ii ll н ы .х ъ с л 0 Б и я х кол(би,tileü (>г 0,87! 10 0,945. г 10(ииеp. С посо() Осjtt(c«TH.7 ë IÎT, е)03, ) ей(ГБ) H i!it миокард в» с.!ОБиях ГH»oT(. pxl и и
К !) Е! 1 К О Б Р (. . Ч (f l и Ы ХЕ P il 3 Р Я ДО XI » (f) (: » Е I l! I 0 ГО эл«ктр» Icc8010 тока.
1!Од эфир»о-кис,юрод»ым»аркозоч жие!Оте!Ое Ох.>ажда!07 .(о ректаль»ой температуры 24 С ° (а»а 70I liri»o с условиями кли IHк1! ) . Г 1() (Осте(же>ЕР! и за.(а е! е!Ое! T(. м ll(.pеlтмp ы
Б 4-5 чежре(>ерье слева производят торакоToxlHK! H»poBo (HT»рижизнеиHvK) б»o»c»K) миокарда .!СвогÎ желудочка для гистохимического и ).!«ктр()lf»0-»!Икроскопич«ского а»ае!изов.
По о»и«ае!!юй х!е.!о (HK(»f)r!H. Водят»оде»СЕ количества ч»тохо»дрий «!юложит««tüной i)KTHI fio«TI ю (I)(j)»I«»TB (292,7 37,1), «
>гр»пателb»c)! актив;!осTью ферме:пrl (187, .5)
»х 0() lti(. ãî !»О«!и !Сс Ба (480: 59,0) и ко-->ффини(» Ãа э»е рГ(7 ич(скОГО ОО«(»(. ч«е»! я I ИОхард.: ({),{>0()57+- 0,775) . жи Б01 110« БОЗ, (ейстБУ!От f! i!3 (и I 0»l и « ,i()!Е.»l(il () -.r 1(KTPH IC«KOI 0 TOKri (»B f1 ÐÅ!ж(»исм 2 "0 B B Tc ÷c:IHc трех секунд. С:разу
»о(хн;>азрида lt(70B0,(Hò прижизнен»ук) биопсию миокарда левого желу (очка и производят гисгохимич«ский и электронно-микро(KoHHH«cêèé а»а;!из мышцы сердца.
l lо;,с»итыва!от количество гистохимичсс к11»ыявле!!»ых митохондрий с»оложитсльlloH активностьк> фермента (537,3 90,3). Г
li()мо!цью электронной микроскопии подсчитbiBBIoT общее количество им«K)tl(HxcR митох(!»;Iрий (586, Гтд 68,0). Подсчитываю г количество митохондрий с отрицатель»ой акГи!)но«7 ьк) фермент,:, (49.2) .
Вычисляют соотношение митохондрий с ! и>.:южительной и кти в»остью фср мента к обI1:,еч) количеству ми Toxot täðий. BBë H ÷ Hit а (»от»о»н»ия после дачи разряда ток;! êî,н билась от 0,862 ло 0,958, до(тигая ие.(од»ых;орчотермических величин (0,87!
0,945)
1(р» (»иже»ии Величины»а.!ряжения,(o
150 .. 180 Б уроне»ь жизнесе(особност» из;,I()! я,!ся нехостоверно»о сравне»ию с и(риодом до дачи разряда и характеризовался колебанием соотношения от 0,572 до 0,711
При повышении напряжения до 260 — 280 В наблюдалось обратное действие. Отмечалось снижение уровня жизнеспособности, соответствовавшее величине колебания соотношения от 0,512 до 0,457.
Аналогичные тенденции выявлены и при о»рсдс ленни длительности разряда. При уменьшении длительности разряда до 2 и с величина коэффициента энергетического обеспечения миокарда (КЭОМ) по сравнении> с периодом до дачи разряда практически не менялась (0,521 — 0,682). Увеличение длительности разряда до 4,5 и 6 с,наоборот, приводило к снижению ве.)ичины
КЭОМ. Fi.о колебания составили в этом с7учае от 0,535 (o 0,487.
Таким образом, величина напряжения
220 В H д7и7 е;гьность pa3psl la 3 с HBH 7Hcb оптимальными параметрами воздействия
f3 данных ус.е! 0 е) и я х o ll bl T B .
Сравнивая результаты (до и после воздействия тока на миокард в условиях гипотсрмии) делают вывод. что жизнеспособность ткани ссрд!(а после кратковременного воздействия переменного тока значительно
Выше, о чем свидетельствует увеличение
КЭОМ от 0,609 0,0775 до 0,910 +- 0,048 (р (0,05), достигающего исходных нормот(j)xtически.х величин.
Г1р(длагаемый способ позволяет объективно, Б Ko;IH÷oñòâå»»îм, оценить жизнеспособность ткани сердца»ри воздействии на него любого агента (лекарственных пре» B pd I ()В, ф ИЗ!! IEC KH X факТОров)
Изобретение позволит оценить влияние
:н)шах (и проверить воздействие известных) факторов на энергетическом уровне, преж,((чем рекомендовать их в клинику, тем самым поможет отбору наиболее эффектив»ых ср«дстB воздействия на организм.
С:н>соб о»реле. «е, я жизнеспособности сердечной мышцы в условиях гипотермии, ОтггиЧГгЮи(ийея тЕМ, ЧтО, С ЦЕЛЬЮ ПОВЫШЕНИЯ точности с»особа, исследуют срезы сердеч»оН мышцы, на которых определяют общее содержание митохондрий и митохондрий, содержащих фермент сукцинатдегидрогеназу, и по соотношению митохондрий с положительной активностью фермента к общему содержанию митохондрий определяют жиз»еспособность сердечной мышцы.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Мосс Д. В., Баттерварт П. Д.Энзимология и медицина, М., «Медицина»: 1978, с. 10--22.
