Способ определения гетерогенных антигенов бактерий, сходных с группой аво человека

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения - упрощение способа и сокращение времени исследования . В лунки добавляют культуру бактерий и антигрупповую сыворотку в количестве 1,5-2 гемагглютинирующих доз. Смесь инкубируют. В лунки вносят взвесь отмытых донорских эритроцитов и встряхивают . Через 20-30 мин учитывают реакцию. Лунки, где еще отсутствует гемагглютинация, показывают в исследуемой культуре наличие гетерогенного антигена, а о его количестве судят по титру реакции, то есть по наименьшему числу бактерий в лунке с отрицательной гемагглютинацией. со со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1337102 (5д4А61 К39 02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3910558/28-14 (22) 14.06.85 (46) 15.09.87. Бюл. № 34 (71) Днепропетровский медицинский институт (72) Ю. П. Царевский, Л. М. Сладкова, Н. П. Гладкий и А. М. Иванова (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Бочко Г. М., Подоплелов И. И. Реакция адсорбции специфических изогемагглютининов гетерогенными антигенами бактерий.—

Лабораторное дело, 1971, № 11, с. 681 — 684. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕТЕРОГЕННЫХХ АНТИГЕ НОВ БАКТЕРИЙ, СХОДНЫХ С ГРУППОЙ АВО ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения — упрощение способа и сокращение времени исследования. В лунки добавляют культуру бактерий и антигрупповую сыворотку в количестве 1,5 — 2 гемагглютинирующих доз.

Смесь инкубируют. В лунки вносят взвесь отмытых донорских эритроцитов и встряхивают. Через 20 — 30 мин учитывают реакцию.

Лунки, где еще отсутствует гемагглютинация, показывают в исследуемой культуре наличие гетерогенного антигена, а о его количестве судят по титру реакции, то есть по наименьшему числу бактерий в лунке с отрицательной гемагглютинацией.

1337102

Изобретение относится к медицине, преимущественно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в бактериологических исследоганиHx, направленных на идентификацию бактерий.

Цель изобретения -- упрощение способа и сокращение времени исследования.

Способ осу1цествляетсH следующим образом.

В 8-л jIIKBx полистироловых 1>дастин раститровывают в объеме 0,25 мл на основе

0,85%-ного (рН 7.2) раствора . ха(.1 выращеннуlо на минимальной IIHòательп1>й cредс, инактивиров<1нну>о нагреванием культуру бактерий, начиная с 1-го млрд взвеси в 1 мл.

Затем I>o Bcc лунки добавляю г 0,25 мл известной антигрупповой (антиэритроцитарной) сыворотки в количестве 1,5 — 2 гемагглютинирующих доз (одна доза наибольшее разведение сыворотки, вызывающее агг IIQTHIIBIIHIo 5,0 — 7,5% взвеси эритроцитов человека соответствующей группы крови устанавливается непосредственно перед опыToM) . См cl> осторожно FlcTDIlxHIIBIoT Fi HIIKvбируют при комнатной температуре в течение 15 -20 мин. Затем во все лунки в объеме 0,25 мл вносят 5,0 — -7,5% взвеси отмытых в 0,85%-ном (рН 7,2) растворе NB(.l донорских эрптроцитов человека соответствующей группы крови. Пластины осторожно встряхива>от. Учет реакции осуществляют через 20- 30 мин. Лунки, где еще отсутствует гем а гглюти нация, показывают 13 исследуемой культуре наличие гетероге1шого антигена, а о его количестве судят по титру реакции, т. е. но наименынему 1ислу бактерий в лунке с отрицательной гемагглютинацией.

Ко>пролями слу>кат 9 и 10 лунки ряда, в которых к 0,5 мл 0,85%-ного (рН 7,2) раствора ХB(.I (9-я луIIKII — контроль эритроцитов) и опытной дозе сыворотки (10-я лунка контроль сыворотки) добавляк>т

0,25 мл 5,0 — -7,5% взвеси отмытых эритроцитов.

Пример. Три (¹¹ 231, 259 и 107) нпамма брюшнотифозных бактерий, содержащих соответственно О(1), А(11) и B(111) изогемаг.лютиногены, выращивак>т на минимальной безбелковой синтетической среде (1). Выросшие бактерии инактивируют прогреванием, концентрируют центрифугированием до 1 млрд взвеси в 1,0 мл 0,85%-ного раствора NB(.I с рН 7,2 (физиологический раствор) . Затем в об ьеме 0,25 мл взвесь раститровывают в 10 лунках полистироловых пластин Ilo 4 ряда (повторность опыта) на каждый режимный параметр. Для определения A(I I) и B (III) изогех1агглютиногенов используют судебно-медицинские моноспецифические пммунные анти-А и В-сыворотки, а для 0(H) антигена -- лектин анти-Н, приготовленный из II:io.>011 бузины.

С целью изучения влияния дозы сыворотки последнюю в количе-тве 1,5; 2,0; 2,5;

3,0 и 4,0 гемагглютинирую>цпх доз в ооье5

10 l5

45 ме 0,25 мл добавляют к раститрованным взвесям бактерий. Пластины осторожно встряхивают и после 30 мин инкубации при комнатной температуре во все лунки вносят ио 0,25 мл 5% взвеси соответствующих донорских эритроцитов, предварительно отмытых в физиологическом растворе. Учет реакции осуществляют через 15 — 20 мин. Титром реакции считают наименьшее количество бактерий во взвеси, где огсутствовала агглютинация эритроцитов.

Статистически достоверной разницы в колебаниях величин титров реакции для всех трех штаммов бактерий при 1,5 и 2,0 гемагглк>тинирующих дозах сывороток выявить не удалось (Р)0,05). При нарастании дозы сывороток с 2,5 до 4,0 значительно (Р(0,001) возрастали концентрации всех трех штаммов бактериЙ, необходимые для выявления гетерогенных антигенов. Следовательно, оптимальными для постановки реакции вь>явления гетерогенных антигенов являются дозы антиэритроцитарной сыворотки, равные 1,5 — -2,0 ггмагглютинирующим единицам.

Предлагаемый способ в отличие от известного является менее трудоемким (отпадают этапы центрифугирования взвеси бактерий после контакта с сывороткой и переноса на стекло капли каждого разведения сыворотки, нет необходимости соблюдения соответствук>щих условий контакта

37 С), сокращается время постановки реаКции в 4 раза (по известному способу оно составляет 3,5 -4,0 ч, а по предлагаемому—

50 — 60 мин.), уменьшается в 40 — 65 раз

I>BcxojF антиэритроцитарной сыворотки. Возможно по титрам реакции (по количеству бактерий в лунке) количественно характеризовать содержание гетерогенных антигенов у бактерий.

Кроме того, установлено, что в прямом агглютинационном тесте (РА) гетерогенные антигены определялись у 38,8% изученных штаммов бактерий, в реакции адсорбции специфических изогемагглютининов РАСИГА — у 47,2% и по предлагаемому способу реакции нейтрализации изогемагглютиннинов (РНИ) — — у 52,7%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить эффективность определения гетерогенных антигенов по сравнению с РА и РАСИГА на 13,9 и 5,5% соответственно.

Формула изобретения

Способ определения гетерогенных антигенов бактерий, сходных с группой ABO человека, заключающийся в выращивании бактерий, приготовлении их взвеси и добавлении соответствующей антиэритроцитарной сыворотки, отличающийся тем, что, с целью упро1цения способа и сокращения времени исследования, к раститрованной смеси бактерий добавляют 1.5 — 2,0 гемагглютинирую1337102

Составитель В. Фролова

Редактор М. Дылын Техред И. Верес Корректор И. Муска

Заказ 4071/8 Тираж 594 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 щие дозы антиэритроцитарной сыворотки, смесь инкубируют 15 — 20 мин при комнатной температуре, добавляют соответствующей группы эритроциты человека и по отсутствию агглютинации определяют количество гетерогенных антигенов.