Способ получения антрациклингликозидов

 

Изобретение касается замещенных гликозидов, в частности получения антрациклингликозидов общих Лормул I и II с(о)снз он --он R ОН вон с(о)снз --он --ш он где R - Н (а);,ОСН (б), которые обладают противоопухолевой активностью . Цель изобретения - разработка нового способа получения более активных веществ указанного класса. Синтез соединений I и II ведут реакцией соединений формул III и IV О ОН R О ОН ОН СНчс-о о Cri,Gl сл о 0-С(0)СНз Процесс ведут в хлористом метилене в присутствии трифторметансульфоната серебра и молекулярных сит с последующим разделением и очисткой хроматографией на колонке. Последняя заполнена силикагелем и процесс ведут с использованием смеси зтилацетата и циклогексана (равные объемы)в качестве элюента. Защитные 0-ацетильные .группы удаляют обработкой 0,2 н. раствором NaOH при комнатной температуре . Новые вещества обладают лучшим противоопухолевым действием, чем известные - доксорубицин и даунорубицин. Активная доза 3-4,4 мг/кг. 7 табл. 00 00 ч 00 4 СМ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н flATEHTY

О ОН ((o) (-H q

3, о Он 0Н сн — с — о

li

Cl

Π— С(О)СН, с(о) сн, он — -ОН

--О

ОН

R О ОН

СИ) CHç — — ОН вЂ” -о НЗС он

О OH

Я О Н

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР пО ДелАм изОБРетений и ОтнРытий (21) 3590801/23-04 (22) 17,05,83 (31) 8215083 (32) 24.05.82 (ЗЗ) GB (46) 29,02.88. Бюл. Р 8 (71) Фармиталиа Карло Эрба С.п.А.(ХТ) (72) Альберто Барджиотти, Серджио Пенко и Мисс Анна Мария Казацца (IT) (53) 547.455.566,07(088,8) (56)Патент СССР Ь 728719, кл, С 07 Н !5/252, 1980.

Патент СССР М 826956, кл. С 07 Н 15/252, 1981, Патент СССР Р 867315 кл. С 07 Н 15/252, 1981. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТРАЦИКЛИНГЛИКОЗИДОВ (57) Изобретение касается замещенных гликозидов, в частности получения антрациклингликозидов общих формул и

О OH

151) 4 С 07 Н 15/252 А 61 К 31/70 где B — Н (а);.ОСН > (б), которые обладают противоопухолевой активностью. Цель изобретения — разработка нового способа получения более активных веществ указанного класса, Синтез соединений I u II ведут реакцией соединений формул III и тЧ

Процесс ведут в хлористом метилене в присутствии трифторметансульфоната серебра и молекулярных сит с последующим разделением и очисткой хроматографией на колонке. Последняя заполнена силикагелем и процесс ведут с использованием смеси этилацетата и циклогексана (равные объемы)в качестве элюента. Защитные 0-ацетильные группы удаляют обработкой 0,2 н. раствором Na0H при комнатной температуре. Новые вещества обладают лучшим противоопухолевым действием, чем известные — доксорубицин и даунорубицин. Активная доза 3-4,4 мг/кг.

7 табл.

1378784

Изобретение относится к способу получения новых антрациклингликозидов общих формул I u II

О

Il

С вЂ” CH

0 ОН.В 0 ОН

Яо Ф O

Q где Н - Н (а) и Н вЂ” ОСНз (б),обладающих противоопухолевой активностью, 30

Цель изобретения — разработка способа получения гликозидных производных антрациклина, обладающих улучшенными свойствами по сравнению с противоопухолевыми препаратами-структурными аналогами: даунорубицином и доксорубицином.

Пример 1, Получение 7-0-(2,6= дидеокси-0 .-L-арабиногексопиранозил)дауномицинона 11а1 и 7-0- (2,3,6-тридеокси-aL- 1 -эритрогекс-2-енопирано, зил)-дауномицинона (ХХа).

К раствору, содержащему 2 г дауномицинона в 200 мл безводного хло" ристого метилена, прибавляют 1,25 г

45 хлорида 3,4-ди-О-ацетил-2,6-дидеокси- -Ь-арабиногексопиранозилла, растворенные в 30 мл хлористого метилена, и 12 г молекулярных сит (4 А

"Мерк"). Смесь обрабатывают 1,28 г трифторметансульфоната серебра, раст- 50 воренными в 30 мл безводного дизтилового эфира. Через 5 мин смесь нейтрализуют прибавлением 0,65 мл безводного коллидина. После выдержки в течение 30 мин при комнатной температуре органический раствор промывают насыщенным водным раствором кислого углекислого натрия, водой, 0;1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты и, наконец, водой. Органическую фазу отделяют и упаривают н вакууме до получения сухого остатка.

Полученный остаток подвергают очистке с помощью хроматографии ча колонке, наполненной кремневой кислотой, при применении н качестве элюирующего средства смеси этилового эфира уксусной.кислоты и циклогексана (1:l по объему). В результате порознь получают 0,9 г соединения формулы

Va, т.пл, 117-118 С, IINP (CDC1 ):

inter а1 a около 1,23 8 (d, СН -С-5 );

1,95 3 (Б, СН ГООГ); 2,07 В (S, СН СООС), 2,43 3 (Б, СНз СО); 5,20 3 (СН 7); 5 53 b(CH-1 ) и 0 9 г соединения формулы Ч?а, т.пл. 83-84 С.

Соединение формулы .Va (0,7 г) растноряли н ацетоне (45 мл) и производили обработку 50 мл 0,2 н, водного раствора гидроокиси натрия при комнатной температуре, Через 1 ч значение рН раствора доводили до 7, после чего производили экстрагирование хлороформом, После отгонки органического растворителя в вакууме получали чистое соединение la с количественным выходом, т,пл. 161lá2 С, FD-МС: m/z 528 (М ). .После обработки соединения формулы VIa в основных условиях получали в чистом ниде соединение формулы IIa т,пл.

181-182 С. FD-МС: mjz 510 (М ) II, IP (CDC1>, хп1er а1 . а около 1, 40 Р (d, СН -С-5 ), 2.,428 (S, СН, СО); 5,33 8 (СН-7)", 5,58 5 (СН-1 ) и 5,5-6,0 8 /m;

СН-2 (СН-3 ) .

Пример 2. Получение 4-деметокси-7-0-(2,6-дидеокси- -L-арабиногексопиранозил)-дауномицинона (lв) и 4-деметокси-7-0-(2,3,б-тридеоксиФ;Ь-эритрогекс-2-енопиранозил)-дауномицинона (Ila).

К раствору 0,74 г 4-деметоксидауномицинона (Illa) в безводном хлористом метилена (70 мл) прибавляют

0,65 r галогенида сахара формулы IV, растворенные н 10 мл хлористого метилена, и 5 г молекулярных сит (4 А

"Мерк"). Смесь обрабатывают 0,64 r трифторметансульфоната серебра, растворенными н 15 мл безводного диэтилового эфира. Через 5 мин реакционную смесь нейтрализуют прибавлением

0,4 мл безводного коллидина, После выдержки в течение 1 ч при комнатной температуре органический раствор

13 "Я7Я- промывают насыщенным водным раствором кислого углекислого натрия, водой, водным 0,1 и. раствором хлористоводородной кислоты и снова водой.

Органическую фазу отделяют, после чего раствор упаривали до получения сухого остатка в вакууме. Полученный в результате этого остаток подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке, заполненной кремневой кислотой, при применении в качестве элюирующего средства смеси хлороформа и ацетона (96:4 по объему). В результате получают 0,48 г соелинео ния формулы Vb,, т.пл ° 65-66 С, ГЛ-МС: m/z (11 0,45 г соединения формулы ЧТЬ. Соединение Vh растворяют в 20 мл ацетона и производят обработку 20 мл 0,2 н. водного раствора гидроокиси натрия при комнатной температуре. Через 1 ч значение рН раствора доводят до 7 и экстрагируют хлороформом, После отгонки органического растворителя в вакууме получают чистое соединение формулы

ТЬ с количественным выходом, т.пл.

165-166 С, FD-МС: m/z 498 (М ), После обработки соединения формулы Ъ |Ь в основных условиях получали чистое соединение формулы IIh, ПМР (СТ1С1 )

inter alia около 1,39 (СН -С-5 );

2,42 8 (S, С:1з — CO), 3,50-4,00 о (m, С-Н-4 и С-Н-5 ); 4,08 8 (, СН О);

5,33 8 (bs (,"-Н-7), 5,58 б (bs С-1!-1 j, 5,65 (а, С-Н-3 ), 5,93 У(а, С-1.-2 ).

Биологическая активность соединений IIa, ХЬ.

Соединения IIa u Ib были испытаны

f в сравнении с даунорубицином ДНР) и доксорубицином (ДК) в in vitro u

in vivo системах с целью установления их цитотоксичности и противоопухолевой активности.

В табл. 1 приведены активности на

Неlа клетках, размножающихся продуктивно in vitro (обработка 24 ч).

Соединение ТТа примерно в 25 раз менее цитотоксично, чем ДНР, и в

40 раз менее цитотоксично, чем ДК.

Первичные исследования in vitro были проведены на CDF-1 мышах, страдающих асцитической Р388 лейкемией (1О клеток/мышь). Результаты представлены в табл. 2 (обработка i.ð, 1 раз в сутки). Соединения ТХа суспендировали в 10Х-ном Tween 80 и инъицировали внутрибрюшинно. Соединение ITa оказалось менее токсичным и было инертным по отношению к

Р38Я асцитической лейкемие при двухдозном .испытании, включая максимальную переносимую доэ у (МПД) l 00 мг/кт .

Соединение ТЬ было изучено in

v .tro íà Не1,". и РЗ88 лейкемических клеток чувствительных (P388 и устойчивых (РЗЯЯ/ДК) к ДК, à in v trc-10 на РЗЯЯ и Ого"-.s leukemia.. Значения. приведенные в табл. 3, показывают, «То соединения ТЬ, исследованное на

l1elа клетках, размножающихся продуктивно in -кд!;го, в сравнении с известными соединениями ДНР и 4-деметокси-)1НР (4 — дм-ДНР), в 3 и 6 раз ме= нее цитоксично, чем ДНР и 4-дм-ДНГ.

Соединение Ib было изу-чено на

РЗЯЯ/ДК п vi"ro.

Р388 и P388/ДК лейкемические клетки были отобраны из асцитической жидкости мышей и помещены для выращивания в суспензию in i-itro. Те".— ты на питотоксичность осуществляли путем воздействия на клетки препаратов в различных концентрациях в течение 48 ч. В конце экспозиционного периода клетки были подсчитаны с помощью счетчика Соы11.ег клеток, а

ПЗ доза, которая дает 5ОХ-нос уменьшение количества клеток, в сравнении с необработанными контроль11ыми клетками была рассчитана.

Табл. 4 показывает, что соедине— ние ТЬ было приблизительно так.1м же

35 цитотоксичным, как ДНР на Р388 лейкемических клетках, и бь1ло очень активно по отношению к Р388/ДК лейкемическим клеткам, ДНР было приблизи40 тельно в 500 раз менее активно по

oTHopIeHèlJ к устойчивым клеткам, чем к чувствительным клеткам, Результаты первичного исследования и к кo, проведенного на CDF-1 мышах, страдающих асцитической Р388

45 лейкемией и обработанных .р. через сутки после трансплантации опухоли, показаны в табл, 5.

Сравнение на максимальную переносимую дозу показало, что соединение

50 ?Ь менее активно, чем ДНР и 4-дм-ДНР.

Результаты исследований, проведенных на СЗН/Ме мышах с i,v, трансплантированной Gross leukemia., обработанных i ч. через сутки после

55 трансплантации опухоли, приведе 1ы в табл. 6. Соединения ТЬ оказались более токсичными и более сильнодействуюп;ими, чем родственные соедине1378784

It

СН3

0 Ой

OH!

ОССН

И

20

ОН

8 О ОН

1 и

HúC е OО сн

О

Il

С вЂ” СН

О OI) --ОБ оссн

И о

С-СН, 8 О ОН

ОН

Я О ОН

О

П I

К C-C-О О сн3

II — С%

0 ОН

ОН

Я 0 ОН, Ю ния. Сравнение максимальных переносимых доз показывает, что Ib более активно, чем ДНР. Соединение Ib gaлее исследовали на активность при введении через рот, на Gross leukeн 1а трансплантированную 1, г,, в сравнении с ДНР, ДК, вводимыми i. ê., и в сравнении с 4-дм-ДНР, вводимым через рот.

Данные, приведенные в табл. 7, показывают, что ХЬ обладает хорон1ей противоопухолевой активностью при введении через рот 1 раз в сутки в сравнении с активностью 4-дм-ДНР (где продемонстрирована как активная при введении через рот) и ДНР при введении

Таким образом, соединения lb u

IIa. обладают улучшенными свойствами по сравнению с противоопухолевыми препаратами — доксорубицином и даунорубицином. формула изобретения

Способ получения антрациклингликозидов общих формул где  — Н (а), ОГН (б), отличающийся тем, что антрациклинон общей формулы

3 0 ОН ОН где R имеет указанные значения, 10 растворяют в хлористом метилене и обрабатывают хлористым 3,4-ди-()-ацетил-2,6-дидезокси-1.-Ь-арабиногексопиранозилом формулы

СЕРСО 0 С1

1I

0 в присутствии трифторметансульфоната серебра и молекулярных сит, полученную смесь гликозидов общих формул

ОССЕ

И

О где R имеет указанные значения, разделяют и очищают хроматографированием на колонке, заполненной силикагелем, с использованием смеси этилацетата и циклогексана 1:1 (по объему) в качестве элюента, зан(итные ()ацетильные группы удаляют обработкой

0,2 н. водным раствором гидроокиси натрия при комнатной температуре.

1378784

Таблица 1

Соединение Доза, кг/мл

%," 1.1> (кг/мл) 25 12

12,5 74

6,2 106

ДНР

Соединение 400 146

IIa

400

100 !36

25 143

6,2 127

1,5 120

25 24

ДК

12,5 40

6,2 69

» Число колоний, % от необработанных контрольных.

Таблица 2

BIIB»» Toxic йеа

1Ье

Соединение Доза, мг/кг

О/10

О/10

1 60

2,9

ДНР

О/20

О/10

4,4»»»» 165-170

6,6»»»» 150-160

7/20

О/10

О/5

О/5

120

Соединение

IIR

1/10

О/10

100

О/18

2/18

4,4»»»» 220-227

6,6»»»»» 227-305

ДК

О/26

2/26

3/26

6/26

268-610

" Среднее время выживания, % по отношению к необработанным контрольным клеткам;

Выжившие на продолжительное время (>,60 сут);

" 0цененные на основе аутоптических исследований на мертвых мышах;

""""Данные двух экспериментов (range);

"""""Данные трех экспериментов (range).

1378784

Таблица3

Соединение Доза, 7. " 1.Р (мг/мл ) мг/мл

ДНР п 12

12,5

6,2

4-дмн-ДНР 25

12,5 18

6,2 53

3,1 84

6,3

Соединение

ТЪ

100

67

- 35

6,2

1,5

107

12,5.. 7,5

6,2, 59

" Число колоний, Х от необработанных контрольных.

Т а б л и ц а 4

Mr /

Соединение

Р388 " РЗЯЯ/ДК ""

1,7 .800

4?О

ЛНР

Соединение Ih 1,2

25

Доза, приводящая к 50_#_-ному уменьшению количества клеток, в сравнении с необработанными контрольными;

Р388 лейкемические клетки, чувствительные к ДК;

Р388,устойчивые к ДК;

Отношение между LD на Р388/ЦК и LD на РЗЯЯ.

SO ьо l 2

1378784

Таблица 5

Соединение

Toxiс

deaths

Доза, Т/С, 7 ВПВ мг/кг

2,9 159-194 О/18 О/8

4,4 140-184 О/18 7/)8

0,75 163 О/8 О/8

4-дм ДНР

Соединение

140

1,25

163

2,5

220

4,4, ДК

305

6,6

3 610

|

Таблица 6

Соединение Доза, Т/С, 7 Тох с мг/кг deaths

О/8

171

ДНР

О/8

О/7

7/8

4,4

100

О/1G

10 171

13 200

16, 9 207

ДК

О/10

3/10

Таблица 7

° °

T/с, Х

Toxic

deaths

Обработка

О/I0

6/10

О!6

150

ДНР 15

22,5

2-дм-ДНР 3

i ÷, Через рот

О/6

150

22,5 171

Соединение I 2,9 214

Способ График» Соединение Доза, введения мг/кг

О/8, О/8

О/9 3/9

О/10 10/10

1/10 О/10

О/10 О/10

5/10 О/10

1378784

Продолжение табл.7

График" Соединение Доза, мг/кг

Способ введения

4,3 216

2,9 167

4,4 208

6,6 116

О/3

Через рот +1

О/10

Соединение

j:b

О/10

4/9

1/20

171-171

ДК

13 » 200-200

16 9 200-207

1/20

3/13

День после трансплантации опухоли;

« Данные двух экспериментов (randе).

Составитель Г. Коннова

Редактор А. Долинич Техред Л.Олийнык Корректор М.Иарони

Заказ 896/59

Тираж 348 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4