Способ получения галактоцереброзидного антигена

Авторы патента:

A61K39 - Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела (материалы для иммунологического анализа G01N 33/53)

Изобретение относится к биохимии, касается получения галактоцереброзидного антигена (ГалЦ) из ткани мозга для дальнейшего использования как компонента диагностической тест-системы. Цель изобретения - повышение активности, стабильности антигена и упрош.ение способа за счет исключения хроматографических этапов выделения и экстракции этанолом. Галактоцереброзиды (ГалЦ) являются специфическими гликолипидными антигенами клеточной поверхности клеток-продуцентов миелина (олигодендроцитов и шванновских клеток) и миелиновых оболочек и способны вызывать образование специфических антител. Для этого определяют антитела к ГалЦ в иммунологических реакциях с липидным антигеном. В качестве липидного антигена вместо смеси ГалЦ, холестерина и лецитина используют суспензию, приготовленную из спиртового раствора общих липидов мозга, полученных путем экстракции ткани мозга хлороформметаноловой смесью, отмытых от ганглиозидов и нелипидных примесей (и упаренных досуха).

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1461465 А 1 (5D 4 А 61 К 39 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 танол 1:1 (10 мл смеси на 1г исходной ткани), экстракт фильтруют, фильтрат объединяют с первой порцией и общий объем экстракта доводят хлороформом до соотношения хлороформ вЂ” метанол 2:1. Липидный экстракт отмывают от ганглиозидов и нелипидных примесей 0,75%-ным раствором

KCl (2,0 мл раствора КС1 на 10 мл экстракта) и оставляют на ночь для расслоения фаз. Верхнюю водно-метаноловую фазу отбрасывают, а нижний хлороформный слой повторно промывают половинным объемом

«чистой верхней фазы», смесью хлороформметанол вЂ” КС1 вЂ” 3:47:48 и оставляют на ночь.

Затем верхнюю фазу удаляют. Нижний хлороформный слой представляет собой ОЛЭ мозга быка, отмытый от ганглиозидов и нелипидных примесей. Для приготовления 5 мл липидной суспензии антигена берут 0,1 мл

ОЛЭ и разводят смесью хлороформ вЂ” метанол 2:1 в 16 вЂ” 25 раз, чтобы концентрация ГалЦ составляла 55 вЂ” 75 мкг/мл. ОтбиГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3883753/28-14 (22) 16.04.85 (46) 28.02.89. Бюл. № 8 (71) Институт физиологии им. И. П. Павлова (72) Н. ГI. Таранова и О. С. Лучакова (53) 615.36(088.8) (56) Duponey P., Journal of Immunology, 1972, ч. 109, № 1, р. 146 вЂ” 153. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАЛАКТОЦЕРЕБРОЗИДНОГО АНТИГЕНА (57) Изобретение относится к биохимии, касается получения галактоцереброзидного антигена (ГалЦ) из ткани мозга для дальнейшего использования как компонента диагностической тест-системы. Цель изобретения вЂ” повышение активности, стабильности антигена и упрощение способа за счет ис1

Изобретение относится к биохимии и может быть испол ьзов а но дл я получения гал а ктоцереброзидного антигена (ГалЦ) из ткани мозга для дальнейшего использования как компонента диагностической тест-системы.

Целью изобретения является повышение активности, стабильности антигена и упрощение способа за счет исключения хроматографических этапов выделения и использования экстракции этанолом.

Пример.

Для приготовления антигена готовят общий липидный экстракт (ОЛЭ) мозга. Для этого ткань головного мозга быка, крысы или кролика гомогенизируют и экстрагируют лип иды смесью хлороформ вЂ” метанол 2:1 (20 мл смеси на 1 г ткани) при нагревании на водяной бане при 50 вЂ” 55 С в течение

15 мин. Экстракт отфильтровывают от осадка, а осадок фильтруют с фильтром, повторно экстрагируют смесью хлороформ вЂ” меключения хроматографических этапов выделения и экстракции этанолом. Галактоцереброзиды (ГалЦ) являются специфическими гликолипидными антигенами клеточной поверхности клеток-продуцентов миелина (олигодендроцитов и шванновских клеток) и миелиновых оболочек и способны вызывать образование специфических антител. Для этого определяют антитела к ГалЦ в иммунологических реакциях с липидным антигеном.

В качестве липидного антигена вместо смеси

ГалЦ, холестерина и лецитина используют суспензию, приготовленную из спиртового раствора общих липидов мозга, полученных путем экстракции ткани мозга хлороформметаноловой смесью, отмытых от ганглиозидов и нелипидных примесей (и упаренных досуха).

1461465

Формула изобретения

Сост а вител ь М. В ас илье в

Редактор Н. Горват Техред И. Верес Корректор М. Самборская

Заказ 508/5 Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 10! рают 1 мл этого раствора в пробирку, упаривают растворитель на кипящей водяной

;бане, вращая пробирку, чтобы осадок липидов образовал тонкую пленку на ее стенках, добавляют 1 мл этилового спирта и растворяют в нем липиды, нагревая спирт на водяной бане до кипения. К кипящему спирту добавляют 4,0 мл дистиллированной воды,,получая концентрацию ГалЦ в антигене

I11,0 вЂ” 15,0 мкг/мл. Образуется слегка опалесцирующая суспензия липидов, которую используют в качестве галактоцереброзидного антигена.

Этот антиген используют для определения антител к ГалЦ в сыворотке крови кроликов, иммунизированных ГалЦ, и контрольных кроликов. Определение антител проводят при помощи реакции связывания комплемента.

Способ получения галактоцереброзидного антигена путем экстракции липидов из ткани мозга хлороформ вЂ” метанолом, отмывания липидного экстракта от нелипидных примесей и ганглиозидов, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, стабильности антиген:.1 и упрощения способа, липидный экстракт упаривают досуха, растворяют осадок липидов в кипящем этаноле и доба вл я ют воду.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для диагностики рака носо глотки

Вакцина против инфекционного гепатита плотоядных и способ профилактики инфекционного гепатита плотоядных // 1459002

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии

Способ получения дигиталис-антител // 1455999

Изобретение относится к области иммунохимии и относится к способу получения дигиталис-антител

Штамм гибридных культивируемых клеток животных мus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к j @ g человека и высших обезьян // 1454850

Способ контроля безвредности коклюшной вакцины // 1454473

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам оценки безвредности коклюшной вакцины

Способ получения вакцины для профилактики и лечения инфекции мочевых путей // 1452462

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, в частности к получению лечебных вакцин

Способ получения фракции на, содержащей защитный антиген воrdетеllа реrтussis // 1447266

Изобретение относится к медицинской промьйшенности и может быть использовано при получении коклюшной вакцины

Штамм бактерий bordetella pertussis, используемый в качестве продуцента экзотоксина // 1446716

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении экзотоксина коклюшных бактерий

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus вскк (п) n 62 d, используемый для получения моноклональных антител к мyсовастеriuм тuвеrсulоsis // 1445184

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для диагностики туберкулеза Целью изобретения является полз генне штамма гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus, продуцирующего моноклональные -антитела (МКА) к цельным микобактерням чепопака штамма ,,

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к мyсовастеriuм воvis (bcg) // 1445183

Изобретение относится к биотехнологии н может быть использовано , для диагностики туберкулеза

Способ получения вакцинных штаммов вируса гриппа в для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин // 2100033

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть применено при производстве вакцинных препаратов для массовой профилактики гриппа

Штамм coronavirus canine, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин и получения сывороток для лечения и диагностики коронавирусной инфекции собак // 2100433

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к штамму коронавируса собак, используемого для контроля иммуногенной активности вакцин и получения сывороток для лечения и диагностики коронавирусной инфекции собак

Способ получения препарата для идентификации стрептококков группы в // 2101027

Способ получения препаратов для идентификации стрептококков группы а или группы с // 2101028

Способ получения препарата для идентификации стрептококка группы д // 2101029

Способ получения антибруцеллезной сыворотки // 2101030

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицине и ветеринарии, и может быть использовано для получения антибруцеллезной сыворотки и производства диагностикумов

Способ выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам // 2102080

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам

Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi // 2102081

Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих

Препарат с иммуномодулирующими свойствами // 2102988

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии, а именно к получению лиофилизированных лекарственных форм, обладающих иммуномодулирующей активностью и может быть использовано для неспецифической профилактики и лечения инфекционных заболеваний