Способ получения алкеновых производных или их солей

 

Изобретение касается ациклических ненасыщенных соединений , в частности, способов получения алмкеновых производных общей формулы R<SB POS="POST">4</SB>-CH<SB POS="POST">2</SB>-(CH<SB POS="POST">2</SB>M)<SB POS="POST">N</SB>-C(-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-N-R<SB POS="POST">1</SB>)-C(-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-N-R<SB POS="POST">2</SB>)*M99.(-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-N-R<SB POS="POST">3</SB>), где N=1 или 2

R<SB POS="POST">1</SB> и MR<SB POS="POST">2</SB>-H или OH

R<SB POS="POST">3</SB>-H, OH, OCH<SB POS="POST">3</SB> или 2-(NM,N-диметиламино)-этоксил

R<SB POS="POST">4</SB>-CI или BR, или их м солей, обладающих эстрогенной, антиэстрогенной, прогестановмой и противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых активных соединений указанного класса. Синтез ведут реакцией соединения формулы R<SB POS="POST">5</SB>-CH<SB POS="POST">2</SB>-(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">N</SB>-CH(-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-N-R<SB POS="POST">6</SB>)-C(O)-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-N-R<SB POS="POST">7</SB>, где N имеет указанные значения

R<SB POS="POST">5</SB>-тетрагидропиран-2-илокси или бензилокси

R<SB POS="POST">6</SB>-H или тетрагидропиран-2-илокси

R<SB POS="POST">7</SB>-H, метокси или тетрагидропиран-2-илокси, с соединением общей формулы R<SB POS="POST">8</SB>-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-N-MG BR, где R<SB POS="POST">8</SB>-H, метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси или тетрагидропиран-2-илокси. Образующееся соединение, в котором R<SB POS="POST">8</SB>-тетрагидропиран-2-илокси или бензилокси, подвергают кислотному гидролизу с последующей дегидратацией и замещением гидроксильной группы на CI или BR и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли. Испытания показывают, что максимальный эстрогенный эффект соединения примера 1 слабее, чем у гексестрола и диэтилстильбэстрола, но оно может антагонизировать эстрогенный эффект этих соединений при их совместном применении. Кроме того, это соединение ингибирует рост MCF - 7 опухоли клеток IN VITRO. Так, увеличение числа выживших клеток в 2 раза по сравнению с контролем наблюдается при концентрации в 10 раз меньшей, чем для гексестрола и диэтилстильбэстрола. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5D4C 07 С 11 02

6, °,;е .|,";ü, лп. .

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ (сн21пс!,Б

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (2 1) 359 7902 /2 3-0 4 (22) 26.05.83 (3l) 821879; 8218414 (32) 27,05.82; 25.06.82 (33) PI, СВ (46) 15,09.89, Бюл, У. 34 (71) Фармос-Ихтюмя Ой (FI) (72) Реийо Юхани Тоивола, Арто

Иоханнес Карьялайнен, Кауоко Ойва

Антеро Куркела, Марья-Лииса Седервапл, Лаури Вейкко Матти Кангас, Гуиллермо Луис Бланко и Ханну Каллерво Сундивист (FI) (53) 547.313.07(088.8) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКЕНОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ИЛИ ИХ СОЛЕЙ (57) Изобретение касается ациклических ненасыщенных соединений, в частности способов получения алкеновых производных общей формулы

R -СН -(СНа) -С(СьН4-п-В,)-С(-С6Н .п-R )(-С6Н -п-R ), ãäe n = 1 или 2;

R и К-Н или ОН; К = Н, ОН, ОСН или 2-(N,N-диметиламино)-этоксил;

R = C1 или Br, или их солей, обф ладающих эстрогенной, антиэстрогенной,прогестановой,противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине, Цель — создание новых активных соединений указанного класса. Синтез ведут реакцией

Изобретение относится к получению новых соединений, а именно алкеновых производных общей формулы.m®U 150 55 А 3

2 соединения формулы R -СН -(СН. )„,—

-СН(-С6Н -n R6)-Ñ(0)-С6Н -n-R, где п имеет указанные значения, R g тетрагидропиран-2-илокси или бензилокси;

R<= Н или тетрагидропиран — 2-илокси, R>-H, метокси или тетрагидропиран-2илокси, с соединением общей формулы

Ка-C6H -n-MgBr, где Ка-Н, метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси или тетрагидропиран-2-илокси, Образующееся соединение, в котором R ВЙБ- и R -тетрагидропиран-2-илокси или

0 бензилокси, подвергают кислотному гидролизу с последующей дегидратацией и замещением гидроксильной группы на С1 или Вг и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли. Испытания показьгвают, что максимальный эстрогенный эффект соединения примера 1 слабее, чем у гексестрола и диэтилстильбэстрола,но оно может антагонизировать эстрот енный эффект этих соединений при их совместном применении. Кроме того, это соединение ингибирует рост МСР-7 опухоли клеток in vitro, Так, увеличение числа выживших клеток в 2 раза по сравнению в контролем наблюдается при концентрации в 1О раз меньшей, чем для гексестрола и диэтилстильбэстрола. 5 табл.

1508955 где R u R — водород или гидроксил;

В., — водород,гидроксил,метоксил, или 2-(N,H-диметиламино)этоксил;

R — хлор или бром; и 1или2, или их солей, которые обладают эстрогенной, антиэстрогенной, прогестановой и противоопухолевой активностью и могут найти применение в медицине, Цель изобретения — разработка на основе известного метода способа получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами °

Изобретение иллюстрируется следующими примерами., Пример 1.а 4- ((Тетрагидропиран-2-ил)окси) -1,2-дифенилбутан-)-o .

Смесь, содержащую 19,6 r дезоксибензоина,20,9 г тетрагидропиран-2-илэфир-защищенного бромэтанола, ),0 г

ТЭБАХ и 50 мл 48%-ного раствора гид- 25 роокиси натрия, перемешивают в течение 2 ч при 75ОС. Далее добавляют воду, продукт зкстрагируют в толуоле °

Раствор толуола промывают водой и сушат сульфатом натрия . В заключение растворитель выпаривают Получают количественный выход, но маслообразный продукт, содержит около 20%

О-алкилированного продукта.

b. Получение 4-((Тетрагидропиран-2-ил)окси)-1,1,2-трифенилбу35 тан-,)-ола.

Готовят комплекс Гриньяра:в без" водных .условиях с использованием

3,6 r магниевой стружки в 25 мл безводного тетрагидрофурана, которые реагируют с 23,6 г бромбензола в 50 мл безводного тетрагидрофурана. Далее добавляют остаток, полученный после выпаривания на стадии а, в 75 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную.смесь кипятят. с обратным холодильником в течение 2 ч, Охлажденную смесь выливают в насыщенный раствор хлорида аммония ° После перемешивания встряхиванием отделяют органичес1 кий слой, Процесс экстракции повторя ют с использованием эфира. Далее органические слои объединяют и сушат сульфатом натрия. В заключение растворитель выпаривают.

С. ), ),2-Трифенилбутан-1,.4-диол.

Остаток, полученный в результате выпаривания на стадии в, подвергают растворению в смеси, содержащей

400 мл абсолютного этанола, 10 г концентрированной серной кислоты и 75 мл воды. Эту смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре,затем полученный раствор нейтрализуют с использованием 2 M раствора гидроокиси натрия. Далее,этанол выпаривают, и к остатку добавляют воду. Затем полученный продукт экстрагируют в этилацетате. Этилацетатный раствор сушат сульфатом натрия, и растворитель выпаривают. Полученный продукт перекристаллизовывают из толуола. Выход составляет 16,5 г (52% от дезоксибензоина), т.пл. 185-187 С.

Спектр-ПИР (СР OD) ц : 2,06 (2Н, як); 3,83 (2H,Т); 3,92 ()Н, Т); 4,76 (2H, с); 6,85-7,45 (13H,M); 7,68 (2H, gg).

Пример 2 ° а. 4- ((Тетрагидропиран-2-ил)окси12-фенил-1-(4-метоксифенил)-бутан-1-он, Соединение получают иэ 22,6 r

4-метоксидезоксибенэоина и 20,9 г тетрагидропиран-2-ил-эфир-защищенного бромэтанола в соответствии с методикой,,описанной в примере 1 °

b. 4- ((Тетрагидропиран-2-ил)окси)-1,2-дифенил+1-(4-метоксифенил)бутан-1-ол (RR ББ и RS. БЮ .

Изомеры (RR, SS) получают из остатка после выпаривания, приготовленного в примере 1а и 28,1 г 4-броманиэола в соответствии с методикой, описанной в примере 1b.

Изомеры (RS,SR) получают иэ остатка после выпаривания, приготовленного в примере 1Ь, и 23,6 г бромбензола в соответствии с той же самой методикой, что и указанные выше иэомеры (RR, SS)., с. 1,2-Дифенил-1-(4-метоксифенил)бутан-1,4-диол (RR,SS и RS,SR), Изомеры (RR,SS) получают из остатка после выпаривания изомеров (RR,SS), произведенных на стадии Ь в соответствии с методикой, описанной в примере 1с. Продукт подвергают .перекрис-. таллиэации из толуола» Выход составляет 13,9 г (40% от дезоксибензоина).

Т.пл.)24-126 С. (RS,SR)-иэомеры получают в результате выпаривания остатка (RS>SR) изомеров, полученных на стадии а в соответствии с той же самой методикой, что и (RS ББ)-изомеры,указанные выше,.

15089

Ф.

Продукт подвергают перекристаллизации из толуола. Выход составляет 16,0 г (46K от 4-метоксибензоина) . Т.пл. 172-174 С.

d. 1,2-Дифенип-1-(4-метокси5 фенип)-1-бутен-4-ол (Z и Е).

Смесь изомеров (Е,Е), Реакцию осуществляют в безводных условиях.

Вначале 34,8 г 1,2-дифенил-1-(4-меТоксифенил) бутан-1,4-диола растворяют в 200 мл ангидрида уксусной кислоты. Далее добавляют 30 мл ацетилхлорида. Полученную смесь выпаривас ют в течение 2 часов при 100 С, после чего растворитепь выпаривают (промежуточный продукт представляет собой чистый (Z, E) -4-ацетокси- 1, 2 — дифенил-1-(4метоксифенил) — 1-бутен) . Далее добавляют 200 мл 947-ного этанола, 20 мл 20 воды и 45 мл 207-ного раствора гидроокиси натрия к указанному остатку, образовавшемуся после выпаривания.

Полученную смесь кипятят с обратным холодильником, в течение 1 ч. Раствор 25 нейтрализуют 2 М хлористоводородной кислотой, после чего этаноп выпаривают. К остатку добавляют воду, и продукт экстрагируют в этилацетате

Этипацетатный раствор сушат над суль- 30 фатом натрия, и растворитель выпари- вают, Выход чистой смеси изомеров (Z:Å в соотношении 7:3) является количественным, т.пп, 91 †1 С, Остаток, полученный после выпаривания смеси изомеров, перекристаллизовывают из смеси, состоящей из гексана и этанола, в соотношении 95:5,. после чего получают 14,5 r (44Å) о (Z)-изомера, т,пп.121 — 123,С., 40

Спектр IINP(CDCJ ) 5: 1,28 (1H,с); 2,73(2Н,т); 3,57 (2Н,т); 8,63 (ЗН,с);

6,53 (2Н,д); 6,80 (2Н,a); 7,15 (5Н,м)

7,29 (5H,ñ) .

Масс-спектр m/е: (M, 79),299 (100), 221 (46), 191 (70), 121 (46) .91 (60) . (Е)-изомер. Т.пл. 107-110 С.

Спектр IIHP (CDCI >) a! . "1,31 (1Н,с), 2,80 (2Н,т), 3,61 (2Н,т); 3,81 (ЗН,. с); 6,80-7,35 (14H,м) . е. 4-Бром-1,2-дифенил- l -(4-меток .. сифенип)-1-бутен (Z) .

33,0 r (Z) — 1,2 — дифенип- 1-(4-метоксифенил)-1-бутен-4-ола растворяют в 500 мл безводного ацетонитрила,Далее при перемешивании добавляют

39,3 г трифенилфосфипа и 49,8 г тетрабромида углерода, Процесс перемешивания проводят в течение 1 ч

6 при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, и остаток, полученный после выпаривания, растворяют в горячем петропейном эфире. Нераство— римый материал удаляют фильтрацией.

Маточный раствор выпаривают и остаток, полученный после выпарива— ния, перекристалпизовывают из метанола. Выход продукта составляет

26,7 r (687). T.ïë .116-118 С.

Спектр IIMP (CDC1>) Р : 3,0,!(2Н,т);

3,28 (2Н,т); 3,67 (ЗН,с); 6,54 (2Н,д);

6,8 (2Н,д); 7,17 (5H,ñ); 7,32 (5H,ñ).

Масс †спек: m/е 392/394 (M 86), 299 (65 ), 22 1 (79), 19 1 (94), 12 1 (100), 91(50).

Пример 3. а. 4- ((Тетрагидропиран-2-ип)окси)-1,2-дифенип-1-4-(4(2 — (N, N-диметип- амин о) э ток си) фе нип) бутан-1-ол (RR, SS и RS, SR) (R, R и SS) изомеры получают из выпаренного осадка, полученного в примере 1а, и 36 6 r 1-бром 4-(2-(N N-. диметиламино)этокси! бензола по методике примера 1. (RS, SR) изомеры получают следующим путем.

b . 1, 2-Дифенип-1- (4 — (2- (N, N-.äèì етил амино) этокси) фенип )бутан-1,4-диол (BRASS и RSÝSR) . (RR,SS)-изомеры получают из выпаренного осадка (RR, SS)-изомеров, полученных на стадии а соответственно по методике примера 2 с, исключая

20 центрированной серной кислоты, Выход

19,5 г (487. из дезоксибензиона),Т.пл.

165-167 С (из топуола). (RS, SR) — изомеры были получены таким же путем. Т.пп. 139-141 С (из толуопа) . с ° 1,2-Дифенип-l- (4- $2-N,N-диме-. тиламино) этокси) фенип)-1-бутен-4-оп (Z и Е).

По методике примера 2d получают смесь изомеров Z и Е.

Выделение (Z)-изомера, как свободного основания.

Смесь изомеров (Z:Е в соотношении

2: 1) подв ер гают пер екристаллизации из толуола, в результате чего получают

15,9 .г (41K) (Z)-изомера, имеющего т.пл. 110-112 С.

Спектр ?П1Р (CDC1 ) 8: 2,28(6Н,с);

2,60 (2Н, т); 2, 71 (2Н, т); 3,53 (2Н, т);

3, 89 . (2Н, т); 6,53 (2H, д); 6, 78 (2Н, д);

7 12 (5H с), 7 28 (5Н с).

1508955

Выделение (Z)-изомера в виде хпо- ристонодородной соли. Смесь изомеров (Z:Е в соотношении 2:1) подвергают растворению в зтаноле и затем добавФ

5 ляют избыточное количество концентрированной хлористоводородной кислоты.

Растворитель выпаривают, и далее, полученный остаток дважды подвергают ".перекристаллизации из этанола, в результате чего получают 12,3 r (29 ) (Е)-изомера в виде хлористоводород" ной соли, Т.пл, 166-168 С (из ацетона).

I 15

Гидрохлорид (Z)-изомера также получают из (Z) изомерного основания. (Z)-изомер растворяют в этаноле, Далее пропускают через раствор газообразный хлористый водород, В за- 20 ключение растворитель выпаривают.

Выделение (Е)-изомера.

Маточные растворы, полученные при выделении гидрохлорида (Z)-изомера, объединяют и растворитель выпаривают ° 25

Выпаренный остаток подвергают перекристаллизации из ацетона, в результате чего получают 9,7 г (23 ) (Е)изомера в виде соли гидрохлорида, Т.пл. 235-237 С. (Е)-изомер может 30 быть отделен от соли тем же самым способом, что и смесь изомеров, указанных выше. Температура плавления (Е)-иэомера, как свободного основания, составляет 129-131 С (из толуоо ла) е .Спектр IIMP; (CDC1 ) 3:2,31 (2Н,с);

2,71 (2Н,т); 2,78 (2Н,т); 3,57 (2Н,т);

4 05 (2Н,т); 6,87 (2Н,т); 6,94 (5H, e);

7,10 (5Hс); 721 (2Нуд) . 40

d. 4-Хлор-1,2-дифенил-1 (4-(2- (N,N-. диметинамино) этокеи) фенил) -I-бутан (Е и Е). (Z)-изомер. Реакцию проводят в безводных условиях. Вначале 42,4 r (Z) -1, 2-дифенил-1- (4-(2- (N,N-диметиламино) этокси1фенил1-1-бутен-4-ола растворяют в 250 мл хлороформа. Далее по к аплям добавляют 23, 8 r тионилхлорида. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником(в течение

3 ч. Из полученного продукта выпаривают растворитель и затем продукт перекристаллизовывают из этилацетата.

Выход хпористоводородной соли составляет 36,7 г (83 ). Продукт имеет тем-,, пературу точки плавления, равную

194-196 С. Этот продукт может быть отделен от солевой формы с помощью 1 М

1 раствора карбоната натрия, после чегo продукт зкстрагируют в толуоле.

Толуольный раствор сушат, и растворитель выпаривают, Т.пл. 108-110 С (из ацетона).

Спектр ПМР (,CDC1 ) ) P: 2,27 (6Н, с);

2,63 (2Н,т); 2,91 (2Н,т); 3,41 (2Н,т);

3,92 (2Н,т); 6,54 (2H,ä); 6,79 (2Н,с);

7,15 (5H,ñ); 7,31 (5H,ñ) .

Масс-спектр . m/å 405/407 (М,7/3), ф

72 (20), 58 (100) .

Соль лимонной кислоты может быть получена следующим образом.

Вначале 40,6 r (Z)-изомера., в виде свободного основания, растворяют в 175 мл теплого ацетона и 24,5 г лимонной кислоты в 100 мл теплого ацетона. Затем растворы соединяют, и смесь охлаждают . Цитрат собирают фильтрацией, его температура плавления 160-162 С. (Е)-изомер . Соединение получают из (Е)-1,2-дифенил-1-14-12-(N,Nдиметиламино) этокси) фенил)1-бутен-4-ола, по той же самой методике,что и соответствующий (Z)-изомер, Хло ристоводородную соль кристаллизуют из толуола. Выход составляет 35,8 r (81 ) т.пл. 183-185 С. Этот продукт может быть отделен от солевой формы по той же самой методике, что и соответствующий (Z)-изомер Температура плавления равна 69-71 С. (из гексана) ° тН спектр ЯМР (С Cl ): 2,34 (6Н, с);

2, 74 (2Н, т); 2,97 (2Н, т) 3,43 (2Н, т);

4,08 (2Н,т); 6,80-7,30 (14Н,M) .

Масс-спектр: m/е 405/407 (М 7/3), 72 (19), 58 (100).

Пример 4. а. 4-Бензилокси-1,2-дифенилбутàí-1 îí.

Соединение получают из 19,5 r дезоксибензоина и 21,5 г бензилэфйрного защищенного бромэтанола в соответствии с методикой, укаэанной в примере Iа.

Ь . 4-Бен зил ок си- 1, 2-дифенил- 1- (4тетрагидропиран-2.-ил-окси фенил) бутан-1-ол (RR,SS}.

Соединение получают из остатка,полученного после выпаривания, как указано в примере 4а, и из 38,6 г тетрагидропиран-2-ил эфирного защищенного

4-бромфенола в соответствии с методикой, описанной в примере 1Ь. с, 4-Бензилокси- I 2-дифенил-1-(4оксифенил)-бутан-1-ол (RR, SS) .

Соединение получают из остатка, полученного выпариванием из стадии а, 1508955 в соответствии с методикой, описанно& в примере 1с.

d, 1,2-Дифенил-1-(4-оксифенил) бутан-1 4-диол.

Э

Остаток, полученный после выпаривания на стадии Ъ, подвергают растворению в 300 мл 943-ного этанола, Далее добавляют 2 г катализатора — 57 палладия, нанесенного на активирован- )0 ный уголь. Полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода до тех пор,пока,не израсходуется 1 эквивалент водорода. Катализатор отфильтровывают,)5

Далее растворитель выпаривают, и полу ченный продукт кристаллизуют из толуоГ ла. Выход составляет 12,7 r (38X от дезоаксибенэоина), т.пл.192-194 С. е. 1,2-Дифенил-2-(4-оксифенил)-) — 20 бутен-4-ол (Z и Е).

По методике примера 2d получают названное соединение. Выход чистой смеси изомеров (Z:Е в соотношении 1:)) составляют 22,8 г (727), т.пл.)64167О C

Отделение (Е)-иэомера. Вйачале 20, С r смеси изомеров подвергают растворению в теплом метиленхлориде, затем добавляют и. быточное 30 количество 2 M раствора гидроокиси ° натрия. После смещения или встряхива- . ния смесь подвергают фильтрации, Осадок который представляет собой (Е) изомер в форме натриевой соли суспен- 35

Э дируют в 2 M хлористоводородной кислоте. Далее (Е)-из омер экстрагируют в этилацетате как свободный фенол.

Этилацетатный раствор сушат сульфатом натрия, и растворитель выпаривают. 40 (Е)-Изомер перекристаллиэовывают из смеси вода-метанол, в соотношении

50:50. Выход составляет 7,2 г (36 ) т.пл, 165-167 С.

Спектр IIMP (СР СОС1 ) 8 2,78(2Н,т);45

3,54 (2Н,т); 6,83 (2Н,д); 6,90-7,35 (12Н,м); 8,32 (1Н.с), Масс-спектр: m/е 3)6 (M,64), 285 (100)э 207 (87)э 191 (58)

107 (55), 91 (94). 50

Натриевая соль может быть получена как описано выше. Другой метод заключается в растворении чистого (Е)-иэомера в этаноле, добавлении эквивалентного, количества, гидрооки- 55 си натрия в этаноле и выпаривании растворителя. Натриевую соль промывают ацетоном. Полученная при этом соль. имеет т.пл. 215-226 С.

)о

Выделение {Е) изомер.а. Смесь гидроокиси натрия с метиленхлоридным маточным раствором помещают в разделительную воронку. Слой метиленхлорида удаляют, а водный слой нейтрализуют с помощью концентрированной хлористоводородной кислоты,, после чего осуществляютт экстр акцию с использованием этилацетата. Этилацетатный раствор сушат над сульфатом натрия, растворитель выпаривают ° (Z)-Иэомер подвер ают перекристаллизации из смеси метанолвода в соотношении 50:50. Выход составляет 6,2 г (3)Ж), продукт имеет т.пл.169-171 С.

Спектр IIMP (ацетон-d<) 3 : 2,70 (2Н,т); 3,52 (2Н,т); 6,48 (2,д);

6,74 (2Н,д); 7,)5 (5H,с); 7,32 (5H,ñ); 8,08 ))H,с).

Масс-спектр: тп/е 315 (М,35), 285 (38), 207 (54); )91 (37);

107 (40), 91 (100).

Натриевую соль (Z)-изомера получают как описано выше для (Е)-иэомера. Т.пл.205-217 С.

f. 4-хлор-1,2-дифенил-1-(4-оксифенил)-1-бутен (Z и Е).

Используя методику примера 3d; получают количественный выход. т,пл .

85-87 С (из метанол а) .

Спектр ПМР (CD OD ) 8: 2,67 (2Н, т); 3,38 (2Н, т); 4, 76 (1, с);

6,42 (2Н,д); 6,70 (2Н,д); 7,15 (5Н,с);

7,30 (5H, с) .

Масс-спектр: m/е: 334/336 (М

94/32), 285 (71), 207 (78), 191 (56)

)83 (199); 107 (55),. 91 (86). (Е)-изомер. (Е)-Изомер получают по той же самой методике, что указано выше для (Z)-изомера. Полученный продукт промывают петролейным эфиром. Был достигнут почти количественный выход. Т.пл. 109-112 С.

Спектр ПМР (CD>OD) 3: 2,96 (2Н, т);

3,42 (2Н,т); 4,79 ()H,с); 6,79 (2H,д);

6,93 (5H,с); 7,12 (2Н,д); 7,12 (5H,с).

Пример 5. 4 — t (Òåòðàãèäðîïèp ан-2-ил) ок си) -1,2-бис (f4- (тетрагидропир ан-2-ил) окси) фенил) бутан-!-он. а. Соединение получают иэ 39,6 r

4,4 -бис(тетрагидропиран-2-ил)окси-! деэоксибензоина и 20,9 г тетрагидропиран-2-ил-эфир-защищенного бромэтанола в соответствии с методикой, описанной в примере 1а.

Ь. 4- ((Тетрагидропиран-2-ил) окси)— ! -фенил-1,2-бис j (4 — (тетр агидропи55 12

1l 15089 ран-2-ил) окси) фенил) бутан- 1-ол (RS, SR) .

Соединение получают из остатка, произведенного в результате выпаривания в примере 5а, и 23,6 r бромбензо5 ла в соответствии с методикой, описанной в примере lb. с. 1-Фенил-1,2-бис(4-оксифенил)бутан-1,4-диол (RS SR). 10

Соединение получают из остатка, полученного после выпаривания на стадии Ь в соответствии с методикой, описанной в примере lс. Полученный продукт перекристаллизовывают из толу-f 5 ола. Выход составляет 8,4 r (24 от

4,4 -бис (тетрагидропиран-2-ил -ок си1дезоксибензоина}, продукт имеет т.пл.213-215 С.

d. I-Фенил-1,2-бис(4-оксифенил)—

1-бутан-4-on (Z,Е) .

35,0 г l-фенил-1,2-бис(4-оксифенил) бутан-1,4-диола дефпегмируют в течение 1 5 ч в смеси, содержащей

250 мл этанола и 10 мл концентриро-. 25 ванной хлористоводородной кислоты.

Раствор обрабатывают древесным углем

После фильтрации растворитель выпаривают, а остаток после выпаривания подвергают рекристаллизации из толуо" 30 ла. Выход смеси изомеров (Z:Е 1:1) составил 19,2 г (58 ), а т.пл, 182-, 196 .С.

IIMP-спектр (CD OD) 5 2,64 (1Н,т);

2,74 (1Н,т); 3,50 (2Н,т); 4,77 (ЗН,c);35

6,38-7,33 (13H,м) °

Примерб. а; 5- ((Тетрагидропиран-2-ил) окси 1, 2-дифенилпентан- l-он.

Соединение получают из 19,6 г 40 дезоксибензоина и 22,3 г тетрагидропиран-2-ил-эфир-sащищенного 3-бромпропанола в соответствии с методикой, описанной в примере lа.

Ь. 5- ((Тетрагидропиран-2-ил)окси) — 45

1,2-дифенил-1- 4-(тетрагидропиран2-ил) окси1фенил1пентан-1-ол (RR, SS) .

Соединение получают из остатка выпаривания, полученного в примере

6 а, и 38, 6 r т етр агидр опир ан-2-илэфир-защищенного 4-бромфенола в соответствии с методикой, описанной в примере lb. с. 1,2-Дифенил-l-(4-оксифенил)пен- тан-1,5-диол (RR,SS), 55

Соединение получают в результате выпаривания остатка, произведенного на стадии b, с помощью того же самого метода, что и 1,1,2-трифенилбутан-1,4-диол в примере l с, Полученный продукт перекристаллизовывают иэ толуола. Выход составляет 11, 1 г (32X от бензоксибензоина),продукт имеет т.пл. 182-184 С.

d. 1,2-Дифенил-l-(4-оксифенил)—

1-пентен-5-ол (Z и Е).

Используя методику примера 2d в результате получают смесь производных пентенола (Z:E в соотношении

1:1). Выход составляет 5,6 r (17X) т.пл ° 157-)63 С, Иэомеры разделяют по методике, описанной в примере 5е для их гомологов. (Е)-Изомер подвергают перекристаллизации из смеси метанол:вода в соотношении 2:3, т.пл. 167-169 С.

Спектр ПМР (CD OD) E 1,36-1,74 (2Н,м); 2,44-2,67 (2Н,м); 3,42 (2Н,т); 4,75 (2Н, с); 7,76 (2Н,м);

6,91 (5Н,мс); 7,05 (ЗН,д); 7, 9 (5Н,с).

Масс-спектр: mje 330 (M,100), +

265 (39), 207 (73), 183 (89), 107 (57), 91 (90) . (Z) -Из ом ер п ер екрист алли з овыв ают из смеси: вода-метанол в соотношении

1:2, продукт имеет т.пл. 164-167 С.

Спектр ПМР (CD)OD ) : 1,35-1,72 (2Н, м); 2, 77-.2,5 (2Н, м).; 3, 39 (2Н, т);

4, 74 (2Н, с); 6,40 (2Н, д); 6, 68 (2Н, д);

7,12 (5Н,с); 7,26 (5Н,м.с) .

Масс-спектр . ш/е 330 (M 100).

285 (19), 207 {70), 183 (97), 115 (76),91 (81j. е. 5-Хлор-1 2-дифенил-1-(4-оксифенил)-пентен (Z,Е). Используя методику примера Çd, получают в результате смесь, состоящую из (Z)- и (Е)-изомеров. Изомерную смесь подвергают перекристаллиэации из петролейного эфира с получением в результате 7,7 г (22X) (Z)-изомера, о продукт имеет т.пл.116-118 С.

Спектр IIMP (CD>OD) ц: 1,56-1,94 (м)

2,74-2,66 (2Н,м); 3,35 (2Н,т); 4,74 (IН, с); 6,41 (2Н,.д); 6,49 (2Н,д);

7,13 .(5Н,с); 7,22-2,41 (5Н,м}.

Пример 7 ° 4-Брам-1,2-дифенил1-(4-(2-(N,N-диметиламино)этокси)— фенил) -1-бутен (Е)

Смесь, содержащую 38,7 r (Z)-1,2дифенил-1- f4- (N, N-диметиламино)— этокси)фенил -бутен-4-ола, 52,4 г трифенилфосфина, 66,4 г тетрабромида углерода и 400 мл сухого ацетонитрио ла встряхивают в течение 2 ч при 22 С, 13

1508955

25 после чел о образовавшийся продукт в ниде осадка отделяют фильтрацией.

Выход 21,1 г (477), т.пл. 114116 С (перекристаллизация из метанола) °

Спектр ЛМР (СРС1 ) S: 2,27 (6Н,с), 2,63 (2Н,т); 2,88-3,09 (2Н,м); 3,193,40 (2П,м); 3,92 (2Н,т); 6,54 (2Н,д);

6,79 (2Н,д); 7,15 (2Н,с); 7,31 10 (5Н,с) .

Т.пл.цитрата 165-167 С.

Соединения I проявляют эстрогенную, антиэстрогенную, прогестановую и противоопухолевую активность. 15

Средство к эстрогенным рецепторам определяют на основе способности молекул конкурировать с ЗН-меченым и

17-бетаэстрадиолом, в препаратах, цитозола маток крыс. После инкубации ли- 20 ганды, не связанные с рецептором, и лиганды, связанные с рецептором, подвергают разделению с помощью известного метода с использованием декстрана и активированного угля. !

Эстроген- антиэстрогенный (прогестеронный) эффект в живом организме был определен следующим образом.

Эстрогенные свойства молекул были определены с помощью подкожного ввода молекул, суспендированных в кунжутном масле, неразвившимся мышам в возрасте 21 день, в течение трех последовательных дней, На четвертый день мышей умерщвляли, и производили взвешивание матки. Эстраднол (положительный контроль) увеличивал вес матки. Все матки коррелируют с эстрогенным эф-. фектом молекул .

Антиэстрогенные эффекты молекул 40 были определены аналогичным образом на неразвившихся мышах. . В этом случае также была исследована способность молекул ингибировать увеличение веса матки, вызванное эстрогеном. 45

Прогестановые эффекты были изуче.ны аналогичным образом как и эстрогенные, Ацетат медроксипрогестерона, который приводит к увеличению веса матки, был использован для срав нения, Противоопухолевый эффект был изучен "вне организма" следующим образом.

Рост MCF-.7 клеточной линии (аде55 нокарцинома молочной железы людей, известная как зависящая от эстрогена) оценивают в присутствии или в отсутствии эстрадиола, ацетата медроксипрогестерона или молекул, подвергаемых исследованию. Также были и зуч ены такие комбинации к ак мол ек ула + эстрадиол и молекула + медроксипрогестерон. Количество живущих клеток спустя 4 ч, 24 ч и 48 ч инкубации определяют методом биоломинесценции (внутриклеточное определение АТФ), Противоопухолевый эффект исследуют в живом организме по отношению к вызванной ДМВА-аденокарциноме молочной железы крысы, способной к трансплантации молочной железы, и аденокарциноме яичников, и способной к трансплантации простатической чешуйчатой клеточной карциномы, в соответствии со следующими методами.

Аденокарцинома молочной железы была вызвана с помощью ДМВА у самок крыс в возрасте 35-40 дней. Обработка молекулами подвергаемыми исследо) ванию, была начата после того, как удавалось пальпировать опухоли. Размер опухоли и количество опухолей оценивали два раза в неделю. Размеры опухолей в контрольной группе, обработанйых только растворителем, сравнивали с опухолями в группах, подв ер гаемых и с сл едов анию.

Активность молекул против других опухолей была исследована путем введения молекул с помощью желудочной трубки животным, которым была осуществлена имплантация способной к трансплантации мышиной саркомы матки или простатической крысиной аденосаркомы.

Ежедневно или два раза в неделю производили ввод препарата. При этом использовали IINRI мыши (самки весом примерно 20 г) и крысы породы Фишер-344 (самцы весом примерно 200 r). Эстрам устинфосат. использовали в качестве позитивного контроля . Трансплантированная крысам эдепокарцинома молочной железы была развита путем инокуляции элементов, вызванной ДМВА карциномы, подкожно здоровым взрослым самкам крыс. Опухоль, которая давала существенный рост, использовали для дальнейшей трансплантации. Другие способные к трансплантации опухоли были инокулированы подкожно, в виде 7 промытой клеточной суспензии (10 клеток/животные). (Соединения I показали хорошее средство к эстрогенным рецепторам,что

15 15 было измерено с помощью метода,использующего декстранактивированный уголь.

Полученные результаты приведены в табл.1.

Эстрогенный эффект соединений I измеренный исходя из их способности увеличивать вес матки неразвившихся мышей, был всегда значительно меньше эстрогенного эффекта эстрадиола, который был использован для положительного контроля.

Эстрогенный эффект соединений 1 и 2 может быть обнаружен только при ° более высоких концентрациях. При дозировке, равной 5 мг/кг живого веса,. эффект первого был на 50Х меньше, чем эффект эстрадиола при дозировке

0 05 мг/кг живого веса.

Соединения 1-3 (табл.1) обладают антиэстрогенными эффектами, что было измерено по их способности ингибировать увеличение веса матки неразви.-". вшихся мышей, вызванной эстрадиолом.

Соединение 1 при дозе, равной

0,5 мг/кг живого веса, и соединения 2 и 3 при дозировке, равной 5 мг/кг живого веса, вызывают соответственцо

27, 25, 20Х-ное ингибирование эффек, та увеличения веса матки у мьппей,вызванное," эстрадиолом.

16 крыс, карпиновым простоты крыс и саркомы матки мышей.

В табл ° 3 приведены данные по

5 противоопухолевым эффектам определенных соединений формулы I. Представленные результаты показывают следующее:

Эффект 10 -концентрация соеди50

10 нения, при которой обеспечивается 50% ингибиров анре роста кл е ток

+++ . 1(Г-5 х 10 M

++ 5х10 -10" И

+ 10 -5х10 M

5 z 10 М.

Обобщенные данные эстрогенных/антиэстрогенных и прогестановых эффектов соединений I приведены ниже.

Опыт Соединение 1 (табл.1)

Без доба- Эстрогенный вок Прогестановый

С эстра- Антиэстрогеновое,27% диолом снижение

0,05 х

0,05 мг/кг живого веса

С медрокси-Слабое ингибиров ание, прогестеро- 14% снижение по сравном нению с контрольным

0,06 мг/кг живого ве

Прогестановые эффекты соединения I 35

: были определены, как описано ранее

Ацетат медроксипрогестерона, используемый в качестве положительного контроля вызывал ингибирование веса матки неразвившихся мьппей до 40Х, Соединение I кроме того, обладает антиэстрогенными и эстрогеннымн свойствами, и как было .установлено, также обладает прогестановыми свойства-, ми, и вызывает незначительное ингиби- 45 рование медроксипрогестерона при наиболее низких изученных доз.

В табл,2 и 3 представлены обобщенные данные зстрогенных (антиэстроген-. ! ных и прогестановых эффектов). Про- 5О центные данные относятся к увеличению (снижению веса маток мьппей).

Противоопухолевые эффекты соединений I были испытаны вне организма по отношению к линии MCF-7 человеческой клеточной аденокраценомы молочной же-: лезы, и "в живом организме" против аденокарциномы молочной железы крыс, вызванной ДМВА карциномы яичников са

Соединения, подвергнутые испытаниям, оказались очень эффективными вне организма по отношению к NCF-7 клеткам молочной железы и путем увеличения концентрации гибель клеточной линии была достигнута с помощью каждого из соединений.

Противоопухоленые эффекты соеди 1Г ния I в живом организме" определен при испытаниях против аденокарциномы молочной железы крыс, вызванной ДМВА.

Противоопухолевый эффект соединения 1 обнаружен в диапазоне доз от 1,0 до

30 мг/кг живого веса При наиболее высокой дозе было установлено, что рост опухоли полностью прекращался (см.табл.4) . с

Размер относится к произведению (ширина) х (высота) опухоли. Скорость роста определяется разницей между размерами по сравнению с теми размерами, которые были в первый день лечения. Противоопухолевый эффект меньший, чем тот, который проявляет соединение 1 против рака моностью, 17 15089 ночной железы, вызванного ДМВА, наблюдался дпя соединения 2.

Эффект соединения 1 против карциномы яичников у крыс и саркомы матки у мышей был испытан на способах к

% трансплантации опухолях с использова нием методов, описанных выше. Спустя две недели лечения при дозе 100 мг/кг живого веса размер саркомы матки бып на ЗОХ меньше, чем соответствующий параметр у контрольных экземпляров, и спустя 10 дней лечения при дозе

5 мг/кг живо о веса размер карциномы яичников крьГс был íà 20Х меньше по сравнению с контрольными экземпляра МИ °

Острая токсичность LD>c, у мышей изменяется от 1000 до 3200 мг/кг живого веса дпя соединений, подвергае- 20 мых исследованию. Клиническая дози.— ровка дуя взрослого человека при оральном виде изменяется в диапазоне от 10 до 200 мг в день.

Проведено .сравнение биологической 25 активности соединения 1 (торемифена) с диэтилстильбэстеролом и гексестро-. лом.

Методы роста NCF-7 клеточной линии и эстроген-антиэстрогенного (прогрес- gp теронного) эффекта, основанного на взвешивании матки, описаны выше.

Были получены следующие результаты.

Разница между соединением 1 и гексестролом так же как и между соедине- З5 нием 1 и диэтилстильбэстролом изуче.на утеротрофическим анализом на мышах и эстрогенной рецепторной положительной клеточной линии грудной железы человека. 40

Утеротрофический анализ, описыв ающий эстрогенные свойства молекул и клеточных культур, показывает активность молекул, ингибирующих рост раковой опухоли . 45

В утеротрофическом анализе гексестрол и диэтипстильбэстроп были введены подкожно мышам в дозах 5 и 50 ц г/кг. Теоремифен был введен в количестве 50, 500 и 5000 (иг/кг. Раз- 50 мер матки (вес.в мг) делится на вес

1 животного (выраженного в r) в каж дой группе, данные представлены в табл,5.

В клеточных культурах используют эстрогенную рецепторную положительнуюраковую клеточнуюлинию грудной железы человека,MCF-7 клетку культивиро- .

: вали в присутствии гексестрола,диэтил55 18 стиль бэ стропа и тор емифена . Кон— центрации каждого соединения были

1O- lO 10-9, 10-8, 10-7, 10-6 и

10-5 моль/л. Число живых клеток за-. писывали при каждой концентрации и вычисляли в процентах контроля (без добавления гормонов) .

Из данных табл.5 видно, что максимальный эстрогенный эффект торемифе-на даже при высоких дозах слабее,чем .у гексестрола и диэтилстильбэстророла; торемифен способен антагонизировать эстрогенный эффект гексестропа и диэтипстильбэстрол.

Все три соединения могут ингибировать рост MCP-7 опухоли клеток in

vitro по способу в зависимости от концентрации: торемифен более действенный ингибитор роста клеточной опухоли, чем гексестроп и диэтилстиль-; бэстрол. Так концентрация торемифена, которая увеличивает число выживших клеток в половину при сравнении с контролем, в 10 раз ниже чем концентрация гексестрола и диэтилстильбэстрола.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет синтезировать новые соединения I обладающие высокой эстрогенной, антиэстрогенной, про-.. гестановой и противоопухолевой активформула и з о б р е т е н и я

Способ получения алкеновых производных общей формулы где К,и R< водород или гидроксил;.

R) — водород,гидроксил,ме-:-токсил или 2-(N,N-диметиламино) этоксил, R — хлор или бром, n = 1 или 2, или их солей, о т п и ч а ю щ и и с я тем, что соединение общей формулы

19

1508955 где R — тетр агидропир ан-2-илок си% или бензилокси;

Р— водород или тетрагидропио ран-2-илокси

5

R7 - водород, метоксил или тетрагидропиран-2-илокси п — имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы $15© 2 где R R и R имеют указанные зна10 чения, подвергают дегидратации с последующим замещением s соединении общей формулы где R R R7 и R - тетрагидропир ан-2-ил ок си или бензилок си; и имеет указанные значения . 30

9 9 подвергают кислотному гидролизу, образующееся соединение общей формулы

Исследуемое соединение

Соединения

Сродство

4-Хлор-1,2- дифенил- 1/4-(2- (N, N-диметиламино) этокси) фенил)-1-бутен (Е) -изомер

4-Бр ом-1, 2-дифенил-1- 1.4- 2- (N, Nдиметиламино) зтокси)фенил-1-бутен, (Е)-изомер

4-Хлор-1,2-дифенил-1-(4-оксифенил)-1-бутен, (Е)-изомер

4-улар-1,2-дифснил-1-(4-(2-(N,Nдиметиламино)-этокси1 фенил1 -1-бутен, (Е)-изомер

Концентрация соединения, при котором имело место 50% замещение (ингибирование) Н эстрадиола

-7

10 М (ингибирование)- 10 М (слабое сродство}

10 (ингибир ов ание) — 10 М (слабое сродство)

-Ф

10 М (ингибирование) — 10 М (слабое сродство)

-%

10 М нет заметного ингибирования где R — водород, метоксил, 2-(N,N диметиламино) этоксил или тетрагидропиран-2-илокси, образующееся соединение общей формулы где R,R и R имеют указанные значения, .гидроксильной группы на хлор или бром и выделяют целевой продукт в свободном виде или в виде соли.

Приоритет. по признакам

27.05.82 при R, и R - водород;

R -2-(N,N-диметиламнно) этоксил; .R<— хлор или бром п = 1 °

25.06.82 при R„и R " гидроксил, R - водород,гидроксил или метоксил, п=2.

Таблица Ij

22! 50895

Та блиц а 2

Обобщенные данные по эстрогенной/антиэстрогенной и прогестановым эффектом соединений Т

Соединение .(табл.1) Опыт

Эстрогенное, 501 увеличеБез добавок

Эстрогенное, 2Ж увеличение

Антиэстрогенное,253 снижение ние

Антиэстрогенное,257 снижение

С эстрадиолом

0 05 мг/кг живого веса

С медроксипрогестероном

0,06 мг/кг живого веса

Нет эффекта

Таблица3

Противоопухолевый эффект соединений I против MCP-7 клеточной линии

Противоопухолевый эффект

Соединение (табл. 1) Таблица 4

Размер и рост опухолей, вызванных ДИВА, во время обработки соединением 1, по сравнению с контрольной группой

Соединение 1 (30 мг/кг), размер опухоли MM

День об- Контрольный работки размер опухоли, мм

Рост

Рост

О

0,1551

-0,2118

-0,4714

-0,5392

-0,5762

-0,5851

-О, 5682

-0,5640

-0,5379

3 914

4,716

8,509

11,622

16, 176

17,473

22,695, 29 542

35, 115

32, 803

3

9 . 14

17

21

28

0

0,803

4,596

7,708

12,622

12,826

18,049

24,896

30,469

28,156

1,5188

1,6739

1,3070

1,0474

0,1179

0,820

0,0721 .0,0891

0 09316

0,1193

Эстрогенное, 20Х увеличение

Анти э стр or енное, снижение менее !07

24

1508955

Таблиц а 5

Эффект гексестрола,;диэтилстильбэстрола, и торемифена в объеме недоразвитой (18 дней) мьппиной матки. Число животных в каждой группе 5

Доза, р г/кг день

Вес матки (мг)

Вес животного (г) Группа

7, 1+0,4

17,9+3,2

28, 1+1,8

Контроль

Гексе строл

Гексестрол, Диэтилстильбэстрол

: Диэтилстильбэс

Торемифен .Торемифен

Тор емифен

Гексестрол + торемифен

Гексестрол +

+ торемифен

Нет гормонов

-50

27,9+3,0

5000

32,6 3,1

10,5+1,3

21,6+1,5

24,1+2,7

50+500

50+500

21,4+2,4

21 9 1+017

Составитель И. Бочарова .Техред Л.Сердюкова Корректор Л,Патай

Редактор Н. Киштулинец

Заказ 7418 Тираж 352 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Гагарина,10ф