Способ определения содержания глюкозы в биологических жидкостях

 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения содержания глюкозы в биологических жидкостях. Способ осуществляется путем добавления к пробе ферментной системы, содержащий глюкооксидазу, пероксидазу, буфер, глицерин и индикаторное вещество, причем соотношение пробы, ферментной системы и индикаторного вещества составляет 0,5:1,0:0,02-0,1 по объему. В качестве индикаторного вещества используют люминол в концентрации 10<SP POS="POST">-4</SP>-2<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-5</SP> М, а определение глюкозы проводят по интенсивности хемолюминесценции.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 G O l N 33/66

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4305445/28-14 (22) 16. 09, 87 (46) 15. 12.89, Бюл. № 4б (72) В,Т.Ивашкин, В,Ю, Васильев, А,А.Токмаков, P),Е,Беляев и Н,В,Ефимов (53) 6 1 2,015 (088. 8) (56) Analyt. Biohemistry, 1969, ч.30, № 5, р. 467-470. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕПЕ1ИЯ СОДЕРЖАНИЯ

ГЛЮКОЗЫ В БЛОЛОГЛЧЕС1ЫХ ЖИДКОСТЯХ (57) Лзобретение относится к медицине, в частности к способам определеЛзобретение относится к медицине, в частности к 5иохимии, к способам определения содержания глюкозы в биологических жидкостях, Цель изобретения — повьппение чувствительности.

На чертеже предс тавлена зависимость средних значений интенсивности хемилюминесценции от количества глюкозы в интервале 0,5-40 мкг субстрата (по оси ординат — log интенсивности люминесценции, по оси абсцисс — log концентрации глюкозы в интервале 0,5-40 мкг), Цель достигается тем, что в качестве индикатора в глюкооксидазную систему до5авляют чюминол в концентрации 10 -2 10 М, а полученный раствор исследуют методом хемилюминометрии.

Спосо5 осуществляют следующим образом.

С целью определения содержания глокозы в биологических жидкостях готовят следующий раствор.

ÄÄSUÄÄ 1529122 А 1 ния содержания глюкозы в биологических жидкостях, Способ осуществляется путем добавления к пробе ферментной системы, содержащей глюкооксидазу, пероксидазу, буфер, глицерин и индика торное вещество, причем соотношение пробы ферментной системы и индикатор> ного вещества составляет 0,5: 1,0: 0,02-0,1 го объему, В качестве индикаторного вещества используют люминол в

-5 концентрации 10 -2 10 М, а определение глюкозы проводят по интенсивности хемолюминесценции. ил.

Р%

Глюкооксидазная система — трисбуфер 36,6 r, ИаН РО+ 2Н О 56,6 г рас- M g творить в 50 мл воды, профильтровать, гроверить рН (7, О), до5авить 400 мл глицерина и Н Gдо 1 л,,затем растворить 600 мг глюкооксидазы и 50 мг пероксидазы хрена (раствор хранится при 4 С в течение полугода), — 3

Водный раствор люминола 1,5 ° 10 М

-265,5 мг люминола на 1 л воды (храо нится в темноте при 4 С в течение месяца).

При определении количества глюкозы в моче берут О, 1 мл мочи, добав-, ляют 0,4 мл физраствора, полученный о раствор сначала нагревают до 90 С, охлаждают и к нему добавляют 1 мл глюкооксидазной системы а затем до- ) бавляют 100 мкл 1,5 10 М раствора

-Ф люминола (до концентрации 10 М) °

Проводят инку5ацию про5ы в хемилюмио нометре при 37 С и определяют интенсивность хемилюминесценции раствора в течение 10 мин. (пиковое значение

1529122 (40икг) (О.Э нке) Составитель В.Митюшин

ТехРед М.дидык

Корректор Н.Король

Редактор Т.Перфенова

Заказ 7634/39 Тираж 789 Под пи гное

ВНЙИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при 1 КВТ СССР

II3(Ë 5, Москва, Ж-35, Раушская. наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. I ëi, ðèíà,101 определяют примерно на третьей минуте), При определении концентрации глю— козы используют калибровочную прямую, построенную в двойных логарифмических

5 координатах по стандартным растворам глюкозы, выражающую зависимость интенсивности хемихпвминесценции от концентрации глюкозы (чертеж), При определении глюкозы к 0,1 мл крови добавляют 0,4 мл физраствора, нагревают до 90 С, после охлаждения о к пробе добавляют 1 мл оксидазной системы и 50 мкл растьора люминола до концентрации 5 10 М, Дальнейшее определение проводится также, как. описано, При определении концентрации глюкозы в среде инкубации клеток отбирают 0,1 мл среды, добавляют 0,4 мл физраствора, 1 мл глюкооксидаэной системы и стандартный раствор люминола до концентрации 2.10 М, Дальнейшие операции как описано.

Зависимость средних значений максимумов интенсивности хемилюминесцен, ции от количества глюкозы в пробе в интервале 0,5-40 мкг субстрата приведена на чертеже, она используется как калибровочная при определении глюкозы в исследуемых образцах. Чувствительность определения — 0,5 мкг в пробе. Для сравнения чувствительность метода- Л,.11ойда, принятого за прототип, 5 мкг в пробе, формула изобретения

Способ определения содержания глюкозы в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе ферментной системы, содержащей глюкооксидазу, пероксидазу, буфер, .глицерин и индикаторное вещество с последующей регистрацией продукта реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, в качестве индикаторного вещества ис-4 пользуют люминол в концентрации 10

-5 — 2. 10 М, регистрацию проводят измерением хемолюминесценции, а объемное соотношение компонентов в смеси проба: ферментная система: индикаторное вещество составляет 0,5:1,0:0,02-0,1