Способ получения гриппозного диагностикума

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для приготовления гриппозных диагностикумов. Целью изобретения является повышение специфичности диагностического препарата. Способ заключается в том, что куриные эмбрионы заражают штаммом вируса гриппа В /Ленинград/ 90/86, после инактивации вируссодержащей аллантоисной жидкости ее обрабатывают кислотой до рН 5,8 - 6,0. Полуфабрикат осветляют центрифугированием и консервируют. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„.Я0„„153554 (51)5 A 61 К 39/145

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4405751/30-13 (22) 05.04.88 (46) 15.01.,90. Бюл. Р 2 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа и Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов ии. Л.А.Тарасевича (72) М.К.Громова, А.А.Соминина, А.И.Банников, Л.В.Агафонова и A.Ê.Çóáoâ (53) 576.858(088,8) (56) Monto А.S., Maassab Н.F., Ether

treafment of ty R influenza virus antigen for the hemagglutination inhibition test, — Clinical Microbiology, 1981, v. 13, М 1, р. 54-57.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской вирусологии, и может быть использовано в вакционно-сывороточном деле, в частности в производстве гриппозных диагностикумов.

Целью изобретения является повьппение специфичности целевого продукта.

Способ получения диагностикума заключается в том, что вируссодержащую аллантоисную жидкость (ВАН) инактивируют мертиолятом, а затем обрабатывают кислотой до значений рН среды

5,8-6,0.

Для заражения куриных эмбрионов используют штамм вируса гриппа В

/Ленинград/ 90/86 ГКВ 2125, который выделен в Ленинграде в лаборатории этиологии гриппа ВНИИ гриппа Минздра2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГРИППОЗНОГО ДИ-, АГНОСТИКУМА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для приготовления гриппозных диагностикумов.

Целью изобретения является повышение специфичности диагностического препарата. Способ заключается в том, что куриные эмбрионы заражают штаммом вируса гриппа В (Ленинград) 90/86, после инактивации вируссодержащей( аллантоисной жидкости ее обрабатывают кислотой до рН 5,8-6,0. Полуфабрикат, осветляют центрифугированием и консервируют. 3 табл. ва СССР в январе 1986 года от больного ребенка 8 лет и пассирован 6 раэ в

tan аллантоисной полости куриных эибрио- Ql нов. С Э

Морфология. Характеризуется морфо- (Д логической однородностью частиц, имеющих преимущественно бобовидную форму, „Д длиной 200-250 нм, диаметром 100- С 4

120 нм с наружными шипами гемагглютинина и нейраминидазы.

Физические свойства. Коэффициент седиментации 7508,плавучая плотность—

1,21 г/си . :В

Антигенная характеристика штамма д. и широта его антигенного спектра.

Штамм вируса гриппа В/Ленинград/90-86 по антигенной структуре подобен вирусу гриппа В/ЗннАрбор/1/86. Штамм B/

Ленинград/90/86 характеризуется ши1535543 роким антигенным спектром по отношению к антителам к современным вирусам гриппа В. Ингенсивность взаимодействия с антителами еще более повышается после модификации гемагглютинина кислотой, Репродукционная активность. Инфекционные титры вируса составляют 6-9

ЗИД в (? мл титры гемагглютинииов от 1:64 до 1:512 Ь 0,2 мл с 17-ными куриными эритроцитами.

Пример 1. Куриные эмбрионы заражают 1О ЭИД о од мп вируса гриппа B/Ëåíèíãðàä/90/86. Зараженные куриные эмбрионы инкубируют в течение

72 ч при 31,5-0,5 С. Затем эмбрионы охлаждают в течение 16 ч при+4 С и в стерильных условиях собирают ВАЖ.

Титр ГА полученной ВАЖ составляет

1:128. К объединенному сбору ВАЖ добавляют раствор мертиолята (20 г/л) до конечной концентрации 0,2 г/л. Инакгивацию вируса проводят в течение

72 ч при 6f 2 С. Затем стерильный pactBop органической кислоты добавляют по каплям к постоянно перемешиваемой

ВАЖ до рН среды 5,8-5 9 (иэ расчета

291 1 мл О,1 моль/л органической кислоты на 500 мл RNK).Через 30 мин инкубации ВАЖ повторно контролируют рН среды с доведением ее до значений

5,8-5,9. Материал осветляют центрифугированием прн 700 g в течение

30 мин, Влияние рН среды аллантоисной жид- 35 кости на стабильность гемагглюгинина и частоту диагностирования гриппа В.

Пример 2. Полученный жидкий. полуфабрикат диагностикума контроли40 руюг на полноту инактивации инфекционности вирус а, тигр ГА, специфичность, антигенные свойства. После этого материал лиофилизируют в присутствии наполнигепя. В качестве наполнителя используют подогретую до 56 С смесь желагина (36 г/л) и сахароэы (500 г/л)

1 которую добавляют к полуфабрикату в соотношении 1: 9. Лиофилизированный препарат диагностикума сохраняет свою гемагглютинирующую активность (титр

ГА 1:128) и является специфичным в огличие от диагностикума, полученного по способу прототипу, Активность диагностикума иэ вируса В/Ленинград/90/86 в РТГА проверена при обследовании сывороток переболевших ОРЗ людей в эпидемический и межэпидемический периоды 1986-87 гг.

Частота диагностирования гриппа В при использовании диагностикума иэ вируса В/Ленинград/90/86 выше, чем со штаммом В/Ленинград/369/75(прототип) в среднем на 5,6Х.

Использование предлагаемого диагносгикума, обладающего более высокой специфической активностью, способствует своевременному проведению IIpoTHвоэпидемических мероприятий.

Формула изобретения

Способ получения гриппозного диагностикума, включающий заражение куриных эмбрионов штаммом вируса гриппа, их инкубацию, получение вируссодержащего материала с последующей его обработкой, отличающийся гем, что, с целью повышения специфичности целевого продукта, используют штамм вируса гриппа ГКВ 2125, а обработку проводят путем добавления кислоты до рН 5,8-6,0.

1535543

Таблица 1

Титры ГА* при обработке

ВАЖ раствором кислоты астота диагностирования гриппа В** при обработке

ВАЖ раствором органической кислоты рН ВАЖ неорганичес- органической кой

Опыт 111 1 Опыт Н 2

* В скобках приведены данные по сохранению гемагглютинирующей активности вируса гриппа В/Ленинград/90/86 по отношению к исходной ВАЖ (в Х).

"* Числитель — число сероконверсий к вирусу гриппа B/Ëåнинград/90/86, знаменатель — число исследованных парных сывороток.

Т ° блида 2

Результаты контрола вируса гриппа В/Ленинград/90/86 н днагностикунов, получениык нз него по аредлагаенону способу и способу-прототипу, аа слепи4ычность и чувствительность к интнбнгоран а нтнт ел ° гил ер ппп7п ньы ннык сывороткак к внрусаи па В

Препарат вируса гриппа Ь

Леиипград/90/86 нтр антител ° гнпериюеауииык ° носпенафнческик сывороткак r анр ан гриппа 4

О Лаю<и- Ленни- ЛенннО) град град град

369 /73 262/84 90/86 (160) (640) (160) иньа РР )(аба- Ленин- Нос

76/31 8/34 ровса град 2/8

20) (640) 74/77 349/80 (32 (160) (320) Искодвыд агами

Днагностнкун, попученньФ по прадлагаеноиу способу, сериа р 4

Диегаостикуи, полученныа по способу-прототипу, серна ° 2

0 О

80 160 0

О 0 О

О О 20

320 640 О

0 О

0 О 0 0 О 20

320 320 640 640 80 20 40 40 20 1О 80 а В скобкак приведены гонологнчные титры 1

8,2

6,6

6,4

6,2

6,0

5,8

5,6

5,4

5,2

5,0

64(100)

64(100)

64(100)

64(100)

64(100)

32(50)

32(50)

16 (25)

8 (12, 5)

8(12,5) 64 (100)

64 (100)

64 (100)

64(100)

64(100)

64(100)

32(50)

32(50)

16(25)

8(12,5) 1/5

1/5

2/5

2/5

3/5

3/5

3/5

3/5

3/5

1/5

1/6

1/6

1/6

2/6

3/6

3/6

3/6

3/6

2/6

1/6

1535543

Та блица 3

Диагностические свойства антигенно актуального вируса гриппа

B/ËåHHHãðàä/90/86 (модифицированного варианта) в сравнении с диагностическим штаммом В/Ленинград/369/75

Период обследования

Число сероконверсий к антигену

Число исслеОпыт

Органиэация дован

В/Ленин- В/Ленинград/ град/369/ /90/86М*

/75 ных пар ных сыворо ток

7

ЛДП**

ЛДП

ЛДП

ЛДП

Лен.Гор.

СЭС 72

Лен.Гор.

СЭС 36

Абс.число 160

Х 100

12

18

12 1пидемический

Эпидемический

Межэпид емич ес кий

Межэпидемический

Эп ид емич ес ки й

2

4

13

6 Эпидемический

46

28,7

37

23,1

Всего

B/ËåHHHãðàä/90/86М* — вирус гриппа B/Ëåíèíãðàä/90/86 (модифицированный варианг).

ЛДП** — лаборатория диагностических препаратов ВНИИ гриппа.

Составитель О.Жакетов

Редакгор A.Лежнина Техред М.Дидык Корректор М.Максимилинец

Тираж 531

Закаэ 67

Подписное

ВН1В(ПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводственно-иэдательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101