Штамм вируса гриппа а/киев/3304/84, используемый для приготовления гриппозного диагностикума

 

Изобретение относится к медицине , а именно к вакцинно-сывороточному производству, и касается штамма вируса гриппа, используемого для получения гриппозного диагностикума типа 17(HONI). Штамм 17(Киев)3304/84 вируса гриппа депонирован под номером ГКВ № 1979 и характеризуется свойствами , присущими диагностическим штаммам: высокой репродуктивностью, широким антигенным спектром, резистентностью к неспецифическим ингибиторам сывороток человека, лошади и морской свинки, высокой авидностью к антителам человеческих сывороток. Использование штамма позволяет повысить качество Оценки коллективного иммунитета к вирусу гриппа с антигенной формулой А(HONI). 1 табл. i (Л с Штамм вируса гриппа Р(Киев)3304/84 выделен из крови больного ребенка на 2-й день от начала заболевания и пассирован 9 раз в аллантонсной полости куриных .эмбрионов. Депонирован под номером ГКВ 1979 я характеризуется следующими признаками. Морфология. Плеоморфные частицы, преимущественно сферической формы, диаметром 80-120 нм, с наружГ1ыми ши- jiaMH гемагглютинина и нейрамииидазы. а 00 ч СП 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1

1 е

A(HONI) .

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

l10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

MPH ГКНТ СССР (21) 4304717/28-13 (22) 1 7.07.87 (46) 07. 03.89. Бюл. № 9 (71) Всесоюзный научно-исследователь.ский институт гриппа, Киевский научно-исследовательский институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л.В.Громашевского и Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Та-. расевича (72) Е.В.Кузнецова, А.А.Соминина, А.Н.Найхин, О.М.Литвинова, T.ß.Ëóçÿнина, E.Б.Гринбаум, Е.Л.Медведь, С.В.Гаврилов, А.Ф.Фролов, Л.В.Агафонова и Н.И.Лонская. (53) 576.858 (088.8) (56) Найхин А.Н., Денисов Г.M. Исмагулов А.Т. и др. Формирование, длительность сохранения и защитная роль антигемагглютииинов к ранее циркулировавшим вирусам гриппа А. — Вопросы вирусологии, 1980, ¹ 4,. с. 408-412.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в вакцинно-сывороточном деле для получения гриппозного диагностикума типа

Цель изобретения — получение диагностического штамма вируса гриппа, типа A(HONI) характеризующегося резистентностью к неспецифическим ингибитарам сывороток,авидностью к антителам и

I высокой репродукционной активностью.

„„SU„„1463758 А1

<бц 4 С !2 N 7/00ю А 61 K 39/145 (54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А(КИЕВ)

3304/84, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГРИППОЗНОГО ДИАГНОСТИКУИА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к вакцинно-сывороточному производству, и касается штамма вируса гриппа, используемого для получения гриппозного диагностикума типа

17(HONI). Штамм 17(Киев)3304/84 вируса гриппа депонирован под номером

ГКВ № 1979 и характеризуется свойствами, присущими диагностическим штаммам: высокой репродуктивностью, широким антигенным спектром, резистентностью к неспецифическим ингибитарам ю 1 сывороток человека, лошади и морской свинки, высокой авидностью к антителам человеческих сывороток. Использование штамма позволяет повысить ка- С чество оценки коллективного иммунитета к вирусу гриппа с антигенной формулой .A(HONI) . 1 табл.

Зиад

4ь

Cb

М

°

Ю

Штамм вируса гриппа P(Киев)3304/84 Q() выделен из крови больного ребенка на

2-й день от начала заболевания и пассирован 9 раз в аллантонсной полости куриных, эмбрионов. Депонирован под номером ГКВ № 1979 и характеризует- Ъ ся следующими признаками. й

Морфология. Плеоморфные частицы, преимущественно сферической формы, диаметром 80-120 нм, с наружными шипами гемагглютинина и нейрампнидазы.

1463758

Физические свойства. Коэффициент седиментации 750S, плавучая плотность

1,21 г/см °

Молекулярно-биологическая характе5 ристика. Злектрофоретический профиль белков вируса А(Киев)3304/84 сходен (но не идентичен) с профилем белков вируса A(PR) 8/34. При электрофорезе в 7,57-ном полиакриламидном геле под- 10 вижность полипептидов М, NP, HA2 аналогична у обоих вирусов, однако в скорости миграции гг.икопротеидов NA u

HAI существуют минорные отличия.

Специфичность, резистентность к неспецифическим ингибиторам сывороток, стабильность свойств при пассировании. Штамм А(Киев)3304/84 характеризуется специфичностью, документированной в РТГА при взаимодействии с антителами к вирусам гриппа А других подтипов, в том числе А(НСв2П), A(HINI) A(H2N2) А(Н3112) и к вирусу гриппа В. Нейраминидаза вируса гриппа А(Киев)3304/84 относится к подтипу NI и является близкородственной нейраминидазе штамма А(РР)8/34, однако отличается от последнего сниженной активностью расщепления овомуцина (15 1и 180 т освобожденной от суб- 30 страта ИАНА соответственно). Штамм

А(Киев)3304/84 резистентен к неспецифическим ингибиторам сывороток лошади и морской свинки, Стабильность биологических свойств штамма доказа35 на при 9 — кратном пассировании, Широта антигенного спектра.

Штамм А (Киев) 3304/8«(HONI) обладает наибольшей широтой антигенного спектра (ШАС) среди исследованных ви- 4 русов этого подтипа. Средние геометрические титры антител к. гетерологичным штаммам подтипа А(НОЯ?), определенные в перекрестной РТГА с гипериммунными сыворотками крыс, при использовании штамма А(Киев) 3304/84 су— щественно выше, чем с другими вирусами этого подтипа.

Репродукционная активность. Инфекционные титры вируса составляют 7,58,5 (18ЗИД,,в,),титры гемагглютининов — 1:256 — 1:10?4 в 0,2 мл с

17-ными эритроцитами кур.

Диагностическая активность. Диаг55 ностическая активность вируса в РТГА проверена при изучении коллективного иммунитета у детей и взрослых в период с октября )984 г. по февраль

1985 г. Использование диагностикума из штамма А(Киев)3304/84 в сравнении с диагностикумом из штамма A(PR)8/34 при изучении коллективного иммуните" та показало, что в группе людей в возрасте 40 лет и старше, антитела в титре l 20 и выше определяются чаще со штаммом А(Киев)3304/84,тогда как у лиц контрольной группы (до 40 лет), родившихся по окончании периода эпидемической циркуляции вирусов гриппа

A(H0NI), чаще определяются антитела к вирусу A(PR)8/34, в особенности в осенне-зимний период — no завершении кампании вакцинации (таблица), Это свидетельствует о большей специфичности и результативности оценки коллективного иммунитета при использовании штамма А(Киев)3304/84 (HONI) по сравнению с A(PR)8/34.

Таким образом, вирус гриппа

А(Киев)3304/84 является специфичным: резистентным кингибиторам сывороток млекопитающих, обладает широким антигенным спектром, выраженной авидностью к антителам человеческих сывороток, хорошо репродуцируется в куриных эмбрионах с высокими показателями инфекционной и гемагглютинирующей активностей .

Пример использования штамма

А(Киев)3304/84 для приготовления гриппозного диагностикума.

Маточный материал вируса А(Киев)

3304/84, прошедший контроль на стерильность, специфичность, гемагглютинирующую и инфекционную активности, резистентность к неспецифическим ингибиторам, разводят в 10000 раз (10 ) на фосфатно — солевом буферном растворе (pH 7,2), содержащем антибиотики (пенициллин — 2С0 ед./мл, стрептомицин — 100 мкг/мл). 11-ти дневные куриные эмбрионы заражают в аллантоисную полость разведенным вирусом из расчета 0,2 мл на эмбрион, доза заражения составляет !О ЗИД

Зараженные эмбрионы инкубируют в термостате с увлажненным воздухом в те— чение 48 ч при 36 С, затем охлаждают

16-1 8 ч при 4 С. Охлажденные эмбрионы стерильно вскрывают и аллантоисную жидкость собирают в бутыли емкостью 0,5 л, маркированные порядковыми номерами (11-13). Полученный материал проверяют в реакции гемагглютинации (РГА) с 1Е-ными куриными эритроцитами, в пробах из бутылей

I 463

Из них с титром

1:20 и более к вирусам А(Киев)3304/84, A(PR)8/34

Общее совпадение положительных и отрицательСовпадение положительных

Контингент

Количество исследованных сывороток

Период обследования результатов (абс. числа)

1 ных . результатов (Х к числу обследованных),X

417

Дети и взрослые до 40 лет

Взрослые (40 лет и старше)

Взрослые (до 40 лет)

Взрослые (40 лет и старше) 14

I — II

1985 r.

96

10

Х вЂ” XII

1984 r.

266

10

83

Высокая частота реакций неспецифического характера при использовании из— вестного штамма A(PR) 8/34

11-13 гемагглютинирующий титр равен соответственно 1:512, 1:256, 1:1024 °

Затем вирусный материал контролируют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с прогретыми при 56 С в течео 5 ние 30 мин нормальными сыворотками лошади и морской свинки на чувствительность к неспецифическим ингибиторам. Все пробы вируса (11-13) резис- !р теитны к ингибиторам и нейтрализуются специфической антисывороткой до титра 1:1280. Антисыворотки к штаммам вирусов гриппа типа А (HCaINI

HINI, H2N2, H3N2) и В не ингйбируют !6 гемагглютинирующую активность указанных проб; Дпя инактивации вируса в каждую бутыль вносят по 10 мл 27ного раствора мертиолята и выдерживают бутылки 48 ч при 37 С. Полуфаб- 20 рикат контролируют на наличие инфекционного вируса путем заражения ку- риных эмбрионов неразведенным материалом и на стерильность. Во всех пробах (11 — 13) вирус инактивирован.

Затем в каждую бутыль, содержащую

400 мл антигена, добавляют 40 мл подогретого на водяной бане 3,57-ного раствора желатины на 507-ном растворе сахарозы и тщательно перемешивают. 30

758 ь

Бутылки 1! — 13 обозначают как серии диагностикума 1-3, Каждую серию pasливают по 2,5 мл во флаконы емкостью

10 мл и подвергают лиофилизации (продолжительность 36 ч, температура нао грева 35 С). Сразу после окончания лиофилизации флаконы перекрывают резиновыми пробками. Готовый диагностикум (серии 1--3) повторно контролируют на активность в РГА, специфичность и резистентность в РТГА, стерильность.

Титр гемагглютининов в готовых сериях диагностикума составляет 1:256, 1:128, l:512.

Использование вируса А(Киев) 3304/84 позволяет более точно по сравнению с вирусами прошлых лет выделения

А(Шкляве)48 и A(PR)8/34 оценивать состояние коллективного иммунитета к вирусам с антигенной формулой

A(H0NI), способных вызывать спорадические клинические формы заболевания.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А(Киев)

3304/84 KB N - 1979, используемый для приготовления гриппозного диагностикума.