Способ определения патулина в пищевых продуктах

 

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к определению микотоксинов в пищевых продуктах. Целью изобретения является сокращение способа и повышение его точности. Способ включает подкисление соляной кислоты, осаждение веществ, мешающих экстракции, фильтрацию патулина этилацетатом, очистку экстракта, двумерную тонкослойную хроматографию, проявление хроматограммы, обнаружение и количественное определение патулина. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (I9) (fI) 81) G 01 N 33/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П.(НТ СССР

f (21) 4401764/30-13 (22) 01.04.88 (46) .15.08.90. Бюл. Р 30 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт консервной и .овощесушильной промышленности . (72) А.И.Погосян и С.Ю,Гельфанд (53) 664. (088.3) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1103146, кл. G 01 N 33/02, 1982. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕШИ ПАТУЛИНА В

IIHIIIEBEIX ПРОДУКТАХ

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при анализе пищевых продуктов на содержание микотоксина патулина.

Цель изобретения — сокращение способа и повышение его точности.

Способ осуществляется следующим образом.

В исследуемый образец, разбавленный водой, добавляют концентрированную соляную кислоту, растворы гексациано-(ТТ)феррата калия и уксуснокислого цинка. Образец отфильтровывают от осадка через складчатый бумажный фильтр. К фильтрату добавляют гидрохлорид гидроксиламина, перемешивают и выдер>кивают в течение 15 мин.

Патулин из фильтрата трижды экстрагируют этилацетатом. Экстракт сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют в отгонную колбу, куда добавляют силикагель, и упаривают досуха (до состояния, когда силикагель начинает свободно пересыпаться) на ротацион2 (57) Изобретение относится к пищевой) промьппленности, а именно к области определения микотоксинов в пищевых продуктах. Целью изобретения является сокращение времени анализа и повышение его точности. Способ включает подкисление соляной кислотой, осаждение веществ, мешающих экстракции, фильтрацию патулина этилацетатом, очистку экстракта, двумерную тонкослойную хроматографию, проявление хроматограммы, обнаружение и количественное определение патулина. 1 табл. ном испарителе при температуре водяной бани не более 40 С °

Для очистки экстракта с помощью ( колоночной хроматографии на дно стеклянной колонки помещают кусочек 2 ваты, на нее наливают суспензию 2 r силикагеля в 20 смЗ толуола. Толуолу дают стечь, не допуская просыхания колонки, добавляют еще 20 см з толуола и высыпают в колонку силикагель с адсорбированным экстрактом из круглодонной колби. Толуолу дают стечь и пропускают через колонку еще

100 см толуола.- Толуольные элюаты отбрасывают. Круглодонную колбу опо" паскив ают 5 см з смеси г екс ан — э тил ацетат (2:3) и выливают раствор в колон ку, куда добавляют еще 100 см смеси Ь

3 гексан — этилацетат (2: 3) . Весь элюат Ь собирают и унаривают в грушевидной колбе на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более

40 С до объема 0,2 см з.

1585754 те, Количество патулина в пятне анализируемой пробы определяют, сравнивая размер w интенсивность Алуоресцен5 ции пятна стандарта патулина и пятна патулина в анализируемой пробе. 11ассовую долю патулина в анализируемой пробе вычисляют по формуле и ° V V3

С т (нг/г или мкг/кг), Полученный раствор анализируют с помощью двумерной тонкослойной хроматограАии на пластинках "Силуфол".

На пластинке на расстоянии 2,5 см от нижнего и правого краев карандашом проводят две тонкие линии. В точку их пересечения с помощью микрошприца наносят аликвоту анализируемого раствора. На обеих стартовых 1р линиях отмечают по 3 точки, в которые микрошприцем наносят различные количества стандартного раствора патулина в интервале от 10 до 80 нг в пятне.

После нанесения всех растворов пластинку одной из стартовых линий вниз

I помещают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно заполненную смесью хлороАорм-ацетон (80:20) на высоту около 1 см. Проявление хроматограммы в первом направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от края пластинки. После этого пластинку извлекают иэ камеры и сушат до исчезновения запаха растворителя.

Высушенную пластинку поворачивают на 90 и помещают второй стартовой линией вниз в другую хроматограАи ческую камеру, предварительно заполненную смесью толуол — этилацетат — муравьиная кислота (50: 40: 10) . Проявление хроматограммы во втором направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от края пластинки.

После извлечения из камеры пластинку сушат до исчезновения запаха растворителя. Затем пластинку помещают в камеру с хлором. Атмосферу хлора

40 в камере создают, медленно приливая соляную кислоту к раствору марганцовокислого калия. Обнаружение пятен патулина достигается после опрыскивания пластинки раствором бензидина 4 в муравьиной кислоте и просушивания ее в токе воздуха. Для увеличения устойчивости окраски пятен патулина пластинку покрывают тонким слоем парафина. Хроматограмму рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете. Патулин обнаруживается в виде зелена-желтых флуоресцирующих пятен на темно-фиолетовом фоне. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету флуоресценции и хроматограАической подвижности пятнам стандарта патулина, свидетельствует о его наличии в анализируемом продукгде С вЂ” массовая доля патулина в продукте, мкг/кг;

m — масса навески продукта, г;

n — количество патулина, обнаруженное в пятне, нг;

Ч вЂ” общий объем, до которого доведена навеска при прибавлении к ней воды, см з, V — объем Аильтрата, взятый на анализ, см

V — общий объем хлороАормного з экстракта, мм з.

V — объем хлороАормного экстракта, наносимый на пластинку, мм

Патулин устойчив в кислой среде и быстро деградирует в щелочной, поэтому введение в образец соляной кислоты создает необходимые условия для стабилизации патулина. Кроме того, высокая кислотность среды существенно тормозит процесс дериватизации (оксимирования) патулина гидроксиламином.

Использование гексациано-(II)hepрата калия и уксуснокислого цинка вызывает быстрое и полное осаждение взвешенных частиц, высокомолекулярных, белковых и полиАенольных соединений, создающих при смешивании водной фазы с этилацетатом трудноразделяемые эмульсии. Процессы осаждения и фильтрации, занимающие 1-2 и

10-15 мин соответственно, успешно заменяет преследующий ту же цель продолжительный (3-4 ч) диалиэ.

Добавление в Аильтрат гидроксиламина и выдержка в течение 1020 мин ведут к получению производного оксиметилАурфурола, значительно отличающегося от патулина по хроматограАическим свойствам. Применение в первой системе растворителей

У ля тонкослойной хроматограАии смеси хлороформ — ацетон позволяет полностью отделить патулин от производного оксиметилАурАурола.

158

Таким образом, сокращение времени проведения анализа достигается за счет замены диализа осаждением и фильтрацией, а повьппение точности, понимаемое как снижение случайной ошибки, вызываемой перекрыванием пятна патулина на хроматограмме пятном оксиметилфурфурола при сохранении патулина неоксимилированным эа счет подкисления образца соляной кислотой достигается использованием гидроксиламина в достаточной концент. рации и необходимое время и обеспечением условий хроматографирования, обуславливающих эффективное отделение патулина от производного оксиметилфурфурола.

Пример 1. Анализ пюре из яблок.

Навеску пюре массой 50 г помещают в стеклянный стакан, смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды, а затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью

250 смЗ. В мерную колбу вносят 2 см э концентрированной соляной кислоты, 5 см раствора гексациано- (ТХ)феррата калия с концентрацией 150 г/дм э и

5 см раствора уксуснокислого цинка с концентрацией 300 г/дм э..Содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют в мерный цилиндр через плотный складчатый фильтр.

Отфильтровывают 50 см раствора. В полученный фильтрат вводят t г гидрохлорида гидроксиламина, содержимое цилиндра перемешивают и настаивают в течение 15 мин. Фильтрат из цилиндра переносят в делительную воронку.

Этим же цилиндром отмеряют 50 см3 этилацетата, переносят его в делительную воронку и затем 1-2 мин интенсивно перемешивают содержимое.

Смеси дают отстояться, и после полного разделения водный слой сливают обратно в цилиндр, а этилацетатный экстракт переносят в плоскодонную колбу с притертой пробкой. Экстрагирование в аналогичных условиях свежими порциями этилацетата проводят еще два раза.Этилацетатные экстракты объединяют и сушат в колбе с притертой пробкой безводным сернокислым натрием (приблизительно 10 г) в течение

10-15 мин. После просушивания объединенный экстракт фильтруют через вату в отгонную колбу. Колбу с сер

5754 6 нокислым натрием ополаскивают 15 cM этилацетата, которые затем также отфильтровывают в отгонную колбу.

В экстракт вводят 1 г силикагеля °

Экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре- водяной бани не более 40 .С; Концом упаривания считают момент, когда силикагель начинает свободно пересыпаться. Дчя очистки экстракта с помощью колоночной хроматографии на дно стеклянной колонки помещают кусочек ваты, на нее наливают суспензию, содержащую

2 r силикагеля в 20 смЗ толуола.

Толуолу дают стечь, и, не допуская просыхания силикагеля, на него наливают еще 20 см толуола. На хромаэ тограйическую колонку, находящуюся

20 под слоем толуола, высыпают силикагель с адсорбированным экстрактом из отгонной колбы. Через колонку пропускают еще 100 см толуола. Толуольные элюаты отбрасывают. Отгон25.ную колбу ополаскивают 5 см смеси гексан — этилацетат в соотношении (2:3) и выливают раствор в колонку, куда приливают еще 100 см э смеси гексанэтилацетат (2:3). Весь полученный

3р элюат собирают и упаривают в грушевидной отгонной колбе на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 40 С до объема

200 мм . Полученный раствор анализиь руют с помощью двумерной тонкослойной хроматографии на пластинках

"Силуфол" размером 15Х15 мм.,На пластинке на расстоянии 2,5 см от нижнего.и правого краев карандашом прово40 дят Две тонкие линии. В точку их пересечения с помощью микрошприца наносят 20 мм анализируемого раствора. з

На обеих стартовых линиях отмечают по три точки, в котбрые микрошприцем

45 наносят различные количества стандартного раствора патулина в интервале от 10 до 80 нг в пятно. После нанесения всех растворов пластинку одной из стартовых линий вниз поме5г. щают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно заполненную смесью хлороформ — ацетон (80:

:20) на высоту около 1 см. Проявление хроматограммы в первом направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в

1 см от,края пластинки. После этого пластинку извлекают иэ камеры и сушат до исчезновения запаха раствори1585754

8 теля. Высушенную пластинку поворачивают на 90 . и помещают второй стартовой линией вниз в другую хроматографическую камеру, предварительно заполненную смесью толуол — этилацетатмуравьиная кислота (50:40: 10). Проявление хроматограммы во втором направлении заканчивают тогда, когда фронт растворителя будет приблизительно в 1 см от края пластинки.

После извлечения иэ камеры пластинку сушат до исчезновения запаха растворителя, Затем пластинку помещают в камеру с хлором. Атмосферу хлора в камере создают, медленно приливая концентрированную соляную кислоту к раствору марганцевокислого калин с концентрацией 50 г/дм . Обнаружение э пятен патулина достигается после опрыскивания пластинки раствором бензидина в муравьиной кислоте и просушивания ее в токе воздуха. Для увеличения устойчивости окраски патулина пластинку погружают и вынимают иэ 25 расплавленного парафина с температу" рой около 60 С. Парафину дают застыть, держа пластинку в вертикальном положении. Хроматограмму рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом 30 свете (365 нм). Патулин обнаруживается в виде зелено-желтых флуоресцирующих пятен на темно-фиолетовом фоне.

Сравнивая интенсивность флуоресценции и размер пятен стандарта патулина в пятна патулина в анализируемом образце, определяют, что в пятне патулина в анализируемом образце содержится

50 мг вещества. Расчет концентрации патулина в пюре иэ яблок:

С

30 250 200 — — 60 мкг/кг.

25 ° 50 20 !

= 50 мкг/кг (нг/г).

Таким образом, содержание патулина в анализируемом пюре иэ яблок составляет 50 мкг/кг.

При пятикратной повторности среднее значение содержания патулина составило 50,2 мгк/кг, стандартное отклонение - 5 3 мкг/кг, относительное стандартное отклонение — 10,6%, доверительный интервал (Р=0,95)

6,57 мкг/кг.

Пример 2. Анализ повидла из яблок.

Навеску повидла массой 25 r помещают в стеклянный стакан, смешивают

50.n . V Чз 50 250 200 ш ° V -V 50 50 20 с небольшим количеством дистиллированной воды, а затем количественно

1 переносят в мерную колбу вместимостью 250 смЗ. Далее анализ проводят в соответствии с тем, как это описано в примере 1. После проявления хроматографической пластинки бензидином обнаруживают, что в пятне патулина в анализируемом образце содержится 30 нг вещества. Расчет концентрации патулина в повидле:

Пример 3. Анализ джема из слив.

Навеску джема массой 25 r помещают в стеклянный стакан, смешивают с водой, а затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью

250 см . Далее анализ проводят так, э как это описано в примере 1. После проявления хроматографической пластинки бенэидином обнаруживают, что в пятне патулина в анализируемом образце содержится 75 нг вещества.

Расчет концентрации патулина в джеме:

75 250 200

25 50 15

200 мкг/кг. Анализ примеров позволяет заключить, что предлагаемый способ определения патулина, использующий осаждение и фильтрацию для отделения грубодисперсных частиц и высокомолекулярных соедйнений, оказывается пригодным для любых продуктов переработки плодов и овощей (соков, пюре, повидла, варенья, джема и порошков) независимо от их консистенции.

Пример 4. Анализ клубничного варенья, искусственно загрязненного патулином на уровне 40 мкг/кг, по предлагаемому способу при добавлении растворов гексациано-(II)феррата калия и уксуснокислого цинка с концентрациями 150 и 300 г/дм соответственно в количестве 0,5; 3, 5; 7 и 10 см з

5 проб образца варенья, искусственно загрязненного патулином на уровне 40 мкг/кг, разводят дитиллированной водой, переносят в мерные колбы, а затем вызывают осаждение взвешенных частиц и высокомолекулярных соединений добавлением растворов гексациано-(ЕЕ)феррата калия и уксуснокислого цинка в количестве по 0,5;

3, 5; 7 и 10 см . В дальнейшем аназ

1585754

1О лиз проводят согласно описанию в примере 1. Пробы, обработанные осадителями в количестве 0,5 и 3 ем, очень медленно Аильтруют, кроме того, первая из этих проб дает труднораз5 деляющуюся эмульсию с этилацетатом.

Не обнаружено существенных различий между тремя остальными пробами в скорости Аильтрования и,скорости раз- 10 деления водного и этилацетатного слоев.

Выбранное количество вводимых в образец растворов гексациано-(II)hepрата калия и уксуснокислого цинка является оптимальным. Добавлением меньшего количества этих веществ может быть недостаточно для осаждения всех высокомолекулярных соединений.

Превышение этаго уровня не сказывается на полноте или скорости осаждения.

Поэтому использование больших количеств гексациано-(ЕЕ)Аеррата калия и уксуснокислого цинка нецелесообразно. 25

Введение в образец соляной кислоты имеет целью наиболее полное проведение дериватизации оксиметилфурАурола и стабилизацию патулина на том же уровне. 30

Пример 5. Анализ яблочного порошка, искусственно загрязненного патулином на уровне 200 мкг/кг, по предлагаемому способу при добавлении в анализируемую пробу 1 или 2 см

3 концентрированной соляной кислоты или без ее добавления.

3 пробы по 25 г одного образца яблочного порошка, содержащего патулин на уровне 200 мкг/кг, смешивают с. водой, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см и добавляют 1 или 2 ем концентрированной соляной кислоты или не добавляют ее. Дальнейшее определение пРоводят, как в прн 45 мере 1. Сравнение анализируемых проб показало, что при добавлении к пробе

2 см концентрированной соляной кислоты оксимируется не более 2-37. патулина, при добавлении 1 см соляной кислоты — 5-6Х, а в отсутствии соля50 ной кислоты — около 10Х патулина. В то же время,при добавлении к пробе

2 см концентрированной соляной кислоты неоксимированным остается около

2Х оксиметилАурАурола, при добавлении 1 см кислоты — менее 1Ж и в от-

Ъ сутствии соляной .кислоты оксиметилфурфурол оксимируется практически полностью. Таким образом, предлагае-. мое введение в образец 2 см концентз рированной соляной кислоты обеспечивает максимальную стабилизацию патулина в растворе, при этом остается очень небольшое крличество оксиметил-. фурфурола неоксимированным, что не мешает точному определению содержания патулина в пробе.

Для оксимирования оксиметилАурАурола используется количество гидроксиламина, значительно превышающее ко-. личество оксиметилфурфурола в анализируемой пробе. В большинстве продуктов переработки плодов и овощей со.держание оксиметилфурфурола исчисляется десятками миллиграммов 1 кг продукта. Практически предельным можно считать концентрацию оксиметилфурфурола 100 мг/кг. С учетом этой концентрации в 50 смз сока мо жет содержаться 5 мг оксиметилАурфурола. Обработке гидроксиламином подвергается пятая часть берущейся на ан1лиз пробы. Таким образом, в

50 см раствора, отбираемого для обработки гидроксиламином, содержится не более 1 мг оксиметилфурАурола.

К 50 см добавляют 1 г гидрохлорида гидроксиламина, содержащего около

470 мг гидроксиламина. Высокая скорость и достаточная полнота реакции оксимирования достигается не менее чем 400-500-кратным превышением концентрации гидроксиламина над оксчметилАурАуролом.

JI p и м е р 6. Анализ виноградного сока, искусственно загрязненного патулином на уровне 20 мкг/кг, по предлагаемому способу при добавлении в анализируемую пробу гидрохлорида гидроксиламина в 400-500кратном избытке по отношечню к оксиметилфурАуролу и настаивании в течение 3, 10, 15, 20 и 30 мин л.

5 проб по 50 см э одного образца виноградного сока, содержащего пату" лин на уровне 20 мкг/кг, разводят водой, переносят в мерные колбы на

250 смЗ, добавляют к ним по 2 см концентрированной соляной кислоты и по 5 см растворов гексациано-(II)феррата калия и уксуснокислого цинка, перемешивают и отфильтровывают. К каждому из полученных фильтратов, имеющих объем 50 см, добавляют по

1 г гидрохлорида гидроксиламина.

Патулин экстрагируют из проб этил1585754

12 пластинке. ацетатом через 3, 10, 15, 20 и 30 мин.

В дальнейшем анализ проводят согласно примеру 1.

При анализе по предлагаемому спо5 собу при четырехкратной повторности среднее значение содержания патулина составило 16,5 мкг/кг, стандартное отклонение - 5 5 мкг/кг, относительное стандартное отклонение — 33,3%, доверительный интервал (Р=0,95)

8,74 мкг/кг. IIpH анализе по известному способу в 2 из 4 повторностей патулин обнаружен не был, в двух других содержание патулина составило

5 мкг/кг (предел обнаружения патулина).

Влйяние продолжительности обработки фильтрата гидроксиламином на степень дериватизации оксиметилАурфурола может быть оценено следующим образом: за 3 мин оксимируется около

50% оксиметилфурфурола, за 10 мин—

94-95%, эа 15 мин — 98%, за 20 и, 30 мин — 99%. Увеличение продолжи- 25 тельности обработки сверх 15 мин оценено как нецелесообразное из-за того, что остаточное содержание оксиметилфурАурола (менее 2%) уже не сказывается на результатах анализа.

Кроме того, более продолжительная обработка сопровождается дальнейшим возрастанием доли оксимированного патулина.

Оптимальной системой для отделе35 ния патулина от оксиметилфурфурола является смесь .толуол — этилацетат— муравьиная кислота (50:40:10). Поэто,му эта система была использована без изменения для надежного и эффектив- 40 ного отделения патулина на хроматограАической пластинке от остаточного количества оксиметилАурфурола.

Другая система растворителей долж- 5 на,отвечать следующим трем требованиям: максимальное отделение патулина от производного оксиметилфурфурола, отделение патулина от других соединений, присутствующих в экстРакте, и нахождение патулина в интервале

R между 0,35 и 0,65.

Пример 7. Анализ грушевого нектара, искусственно загрязненного патулином на уровне 100 мкг/кг, по

55 новому способу с использованием в двумерной тонкослойной хроматографии в первой системе смесей хлороАормацетон - муравьиная кислота в различных объемных соотношениях представлен в таблице.

Данные о хроматограАической подвижности патулина и производного оксиметилфурАурола представлены в таблице.

Установлено, что присутствие в смеси мураьиной кислоты снижает селективность системы, не гарантируя во всех случаях надежного отделения патулина от производного оксиметилфурфурола. Особенно хорошо это видно на примере системы 2. Система 4 обеспечивает наиболее приемлемое значение патулина, но очевидно, что селективность систем 5 и 6 лучше, В то же время при использовании систем 6 значение патулина оказывается вне зоны качественного проведения хроматографирования, что может сказываться на низкой эффективности отделения патулина от других веществ, присутствующих в экстракте. Таким образом, оптимальной для отделения патулина от производного оксиметилфурфурола и других веществ, присутствующих в экстракте, является система хлороформ — ацетон (80:20), Сравнение существующих способов определения патулина позволяет сделать заключение о том, что использование нового способа обеспечивает сокращение времени проведсния анализа с 7 до 4 ч за счет устранения диализа и повышение точности результатов анализа эа счет снижения случайной ошибки, происходящей при перекрывании пятна патулина пятном окси-. метилфурфурола на хроматограАической

Формула и з б р е т е н и я

Способ определения патулина в пищевых продуктах, включающий отбор пробы, добавление в нее кислоты, экстракцию этилацетатом, очистку экстракта адсорбцией на силикагеле, упаривание, элюирование толуолом и смесью гексан — этилацетат, двумерную тонкослойную хроматограАию с использованием в первой системе смеси хлороформ — ацетон, а во второй — смеси толуол — этилацетат — муравьиная кислота, проявление хлором . и раствором бензидина, фиксацию!

1585754

Система раствори- Соотношение Патулин телей компонентов

Оксиметилфурфурол

Система!!1

0,37

0,50

80: i5:5

Хлороформ — ацетон— муравьиная кислота

То же

0,67

0,42

0,50

0,43

0,27

0,65

0,28

0,34

0,10

0,02

70:23:7

80:18:2

70:30

80:20

90: 10

3

5

Хлороформ — ацетон

То же

Составитель Л.Елисеева

Редактор М.Циткина Техред Л.Олийнык Корректор M.0 0p K

Заказ 2325

Тираж 509

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.. Гагарина, 101! хроматограммы парафином и обнаружение патулина в ультрафиолетовом свете с последующим его количественным определением, о т л и ч а ю щ и й—

5 с я тем, что, с целью сокращения времени проведения анализа и повышения

его точности, при введении кислоты используют концентрированную соляную кислоту с доведением рН пробы до 1,0-1,5, после чего дополнительно проводят осаждение мешающих веществ гексациано-(?Х)ферратом калия и уксуснокислым цинком с последующей фильтрацией осадка, добавляют к Лиль трату гидрохлорид гидроксиламина при соотношении 1:50 и выдерживают в течение 10-20 мнн, а в первой системе тонкослойной хроматографии соотношение компонентов в смеси хлороформ - ацетон устанавливают равным (78:82) -- (18:22).