Способ получения белков, меченых изотопом иод-125

 

Пяобретёние относится ij биохимии и медицине, п чпстности к радио- iio;uipt)FtaHiTO белков изотопом мод-125. Целью изобретения япляе тся ионьшгение .. стабильности образухпцегося KoMimeKcai - ,-j и радиоактивной метки, что достиг-л€ Т1:я ппеде;нием в инкуПмропаниую среду, содержащую радиоактивную метку , белок и i хлорамин.Т,а;чилп натрия и концоитрации 0,3-5,0%. Иммунореактипность полученного комиги-кса после /tO дн. хранения состанлпет 65,3/1.

союз соек тгник

СО(1ИАЛИС1 к!ЕСНИХ

ЩГХЬ F> ПИН (; 01 И 33/534

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 !

ГОСУД4РСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

r!O ИЭОБРЕТЕНИЯМ И OTHP Hgf>f(ПРИ ГННТ СССР (46) 07.09.91. Пюп. !с 33 (2 f ) 4338626/28 (22) 04 12. 87 (71) Институт биооргл химии

АН БССР (72) .М.В. Макаренко, (!.1!. Мороз, В.Л. Чап(ин и И.И. !(он!(ей (53) 612.015(088.8) (56) Макаренко М.В. и др. Способ получения антигено«, м ченых плотовом иод-125;

Изобретение относится к биохимии и медицине, а именно к усовершенствованному способу получения белков, меченых изотопом иод-!25, которые могут найти примеп>.ние в иммунохимических исследованиях и в качестве компонентов радиодиагностических наборов для радиоиммунологического медицинского микроанализа .

Целью изо6ретения является повышение стабильности образующегося комплекса белка и радиоактивной метки.

Пример l. Получение иод-125инсулина.

В ампулу с 1 мКи натрий-иод-125 вносят 0,5 мкг (1,78 нмоль) хлорамина Т, 4 мкг (0,7 нмоль) инсулина. Реакцию проводят в О,! М натрийфосфатном буфере, содержащем 3% аэида натрия. Перемешивают 30 с. Останавливают реакцию прибавлением 20 мкл (0,3 мкг) цистеина в О,! М натрий„„SU,„, %883,Í А 1

O 54) СПОСОБ ПОГ!У>!Е1!!!Я I!F. (!КО!! > МЕЧЕ1!1:!Х И .(ОТОПОМ !!ОЛ-1 25 (57) 1!зобретение относится (с биохимии н медицине, в члс.тностн к радиоffAJ(ffp()Bанию беятков иэотоном нод-125.

Целью изобретения является но«ышенне .. стабильности обрлзуьн(егося комплекса(. бс лкл н рлднолктнвпой мс ткн, что достнглетс Я введением в Hf!KY6ffpA(fRf(Hую среду, содержащую рлдиолктпвную метку, белок и;хлорамин.Т,лзилл плтрия

« концентрации 0,3-5,0%. !!(Ямунореактннпость полученного (сомпч> ксл после

40 /(н. храпения состлвл«с.т 65, 3%а фосфа тном буфере . Выделяют цс ле вой продукт хромато(рэфией нл «ефлдексе G.-50. Рлдиохнмичсскнй я(ход 86,6%.

Связывание избытком лнтител 95%, не" специфическое связывание 3,3%.

Пример 2. Получение иод-125альфа-субъединицы хориопического гонадотропина.

В ампулу с 0,5 мКи натрий-иод-125 вносят !.мкг (3,55 нмоль) хлорлмина Т> 5 мкг (0,33 нмоль) лпьфа-.субьединицы хорионичеокого гонадотропина. Реакцию проводят в О,I М натрийфосфатном буфере, содержащем 5% ази- да натрия. Перемешивают 15 с. Остатанавливают реакцшо приба«ленном

20 мкл (0,68 мкг) метлбисульфнта натрия в 0,1 М натрийфосфлтном буфере. Выделяют целевой продукт хроматографией на сефадексе G-50. Радиохимический выход 75,3%. Связывание!

58814!

40 избытком антител 97-99,3 . Неспецифическое связывание 3,5Х.

П р и и e q 3. Получение иод-125 орнопического 1.онадотропина.

В ампулу с 1 мКи натрий-иод-125

5 вносят мкг (3,55 нмоль) хлораминз Т, 7 мкг 0,18 нмоль хорионичес" кого гонадотропинв. Реакцию проводят в 0,1 М натрийфосфатном буфере, со" 10 держащем О,ЗХ аэида натрия. Перемешивают 10 с. Останавливают реакцию прибавлением 20 мкл (0,5 мкг1 цистеина в О,I М натрийфосфатном буфере.

Выделяют целевой продукт хроматогра- 1.5 фией а сефадексе С-100. Радиохими" ческий выход 62Х ° Связывание избыт- . ком антител 94, неспецифическое связывание З,б .

Радиоиодирование хорионического 20 гонадотропина человека хлораминовым методом известным способом не поэво" лило получить стабильный меченый белок: при хранении маркер теряет способность связываться с антителами, 25 эа первые 10 дн. на 15-20Х, эа 3 недели на 30-45%. Такая метка не могла быть использована для создания радиоиммунологического набора, срок годности которого установЛен 30 дн.

Предлагаемый способ радиоиодирования в присутствии азида натрия позволил получить стабильный меченый гормон: иьмунореактивность на день получения

94, а после 40 дней хранения соста вила 65,3,. Стабильность такой метки, Жпользуемой в РИА-наборе, подтверждена с помощью контрольной сыворотки фирмы "ORIS" (Франция) с деклариро-; : ванной концентрацией хорионического гонадотропина человека 78 гмоль/л.

Стабильность набора определяется ста4 бильностью используемого маркера -. более продолжительные сроки годности антител и стандартов не лимитируют срок годности набора. Процент открйтия после 40 дн ° хранения составил

102,6+3,1 (п11). Поскольку для данного вида анализа коэффициент вариации допустим.в пределах +IОХ, то определенная концентрация контрольной сыворотки подтверждает. качество и стабильность метки, полученной предлагаемым способом.

Формула изобретения

Способ получения белков, меченых изотопом иод-12 путем составления инкубационной смеси из О, 5-1,0 мКи натрий-иод-125, О,l М фосфатного буфера с рН 7,4, 1;0-8,0 мкг хлорамина Т, 4,0-40,0 мкг белка, инкубации с перемешиванием в течение 10-30 с при комнаткой температуре, остановки реакции добавлением в инкубационную смесь 0,68-5,4 мкг метабйсульфита . натрия или 0,3-0,5 мкг цистеина, затем ,0,1 М фосфатного буфера, содержаще го 200 мкг KI 200 мкг бычьего сывороточного альбумина и 0,02Х аэида натрия, последующегохроматографирования на колонке с сефадексом С+50-100 и элюирования целевого продукта раст,вором, содержащим 0,1 М фосфатного буфера, 0,1Х бычьего сывороточного . альбумина и 0,02 аэида натрия, о тл и ч а ю щ И и с я тем, что, с целью повышения стабильности образующегося комплекса белка и радиоактивной метки, в инкубационную смесь азид натрия вносят в концентрации

0,3-5,0Х.

Составитель О. Кононова

Редактор Л. Лашкова Техред М.Дидык Корректор М. Шароши

«а вй

Заказ 3724 Тираж Подписное

ВНИИПИ Гцсударственного комитета по изобретениям и открытиям при.ГКНТ СССР

113035, москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

«б

Производственно-издательс кий комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101