Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и острой пневмонии

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике туберкулеза и острой пневмонии. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для этого из 2 мл венозной крови выделяют эритроциты, получают тени эритроцитов путем их гемолиза с последующим отмыванием мембран от гемоглобина и определяют содержание ТБК-активных продуктов в мембранах эритроцитов. В другой порции теней эритроцитов определяют активность супероксиддисмутазы (СОД). Для этого к теням добавляют смесь этанол-хлороформ-вода, встряхивают и отстаивают до разделения фаз. Затем в водно-спиртовой фазе определяют супероксиддисмутазную активность по торможению восстановления НСТ. При значениях ТБК-активных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) 8,9-9,5 нМ на 1 мг белка и активности СОД 171-174 ЕД диагностируют туберкулез, а при значениях продуктов ПОЛ 7,0-7,5 нМ и активности СОД 179-180 ЕД - острую пневмонию. Использование изобретения позволяет установить диагноз в более ранние сроки и повысить точность дифференциальной диагностики до 92%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (gl)g С 01 N 33/68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЛ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГНКТ СССР (21) 4417021/30-14 (22) 09.03,88 (46) 30,12.90. Бюл. М 48 (71) Ереванский государственный медицинский институт (72) M.Д, Сафарян, К,l., Карагезян и Э.Т. Карапетян (53) 612.475(088.8) (56) Ткач Е.A. Значение клинико-рентгенологических и энзимологических методов исследования при дифференциальной диагностике туберкулеза легких и неспецифическои пневмонии, Автореф, дис.к.м.н, Киев, 1987, с. 1-20. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА И ОСТРОЙ ПНЕВМОНИИ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике туберкулеза и острои пневмонии. Целью изобретения является повыщение точности и ускорение способа. Для этого из 2 мл

ВрНо3НоН крови выгцеляют эритроциты, 1

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики туберкулеза и острой пневмонии.

Цель изобретения — повышение точности способа и его ускорение °

Способ осуществляют следующим образом.

Из локтевой вены забирают 2 мл крови в пробирку с цитратом натрия, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, „„SU„„1617382 А 1

2 получают тени эритроцитов путем их гемолиза с последующим отмыванием мембран от гемоглобина и определяют содержание ТБК-активных продуктов в мембранах эритроцитов. В другой порции теней эритроцитов определяют активность супероксиддисмутазы (СОД), Для этого к теням добавляют смесь этанол-хлороформ-вода, встряхивают и отстаивают цо разделения фаз, Затем в водно-спиртовой фазе определяют супероксиддисмутазную активность по торможению восстановления НСТ. При значениях ТБК-активных продуктов перекисного окисления липидов (110Л)

8,9-9,5 нМ на 1 мг белка и активности

СОД 171-174> ЕД диагностируют туберкулез, а при значениях продуктов ПОЛ

7,0-, 7,5 нМ и активности СОД 179- 180 EP острую пневмонию. Использование изоб- („ ретения позволяет установить диагноз в более ранние сроки и по гысить точность дифференциальной диагностики до 927.

Оиа

Далее плазму, лейкоцитарный слой и верхнюю 1/4 часть зритроцитарного осадка отбрасывают, а оставшиеся эритроциты суспендируют визотоническом растворе и сновз центрифугируют. llpoводят гемолиз добавлением раствора, содержащего этилендиаминтетраацетат, хлористыи Na, бикарбонат Na (рН 7,5) в отношении 1: 50. 1 емолизат интен HB но взоалтывают на холоде и цснтри.4угируют втечение 20 мин при

15000 oo/ìèí. Суспернатант оторасы1617382 вают, осадок отмывают 3 раза и оса, док эритроцитарньЫ мембран матового ! цвета используют в опытах.

Суспензию эритроцитарных мембран инкубируют в стандартной смеси, состоящей из 0;3 мл 12 х 10 М соли Мора, 0,3 мл 2 х 1l3 4М пирофосфата и

0,,3 мл 1 мМ НАДФН . Реакцию запускают добавлением О, 1 мл суспензии мембран )0 эритроцитов. Инкубацию проводят в во; дяной бане при t = 37 C в течение

20 мин. Реакцию останавливают добавлением f мл 30%-ной трихлоруксусной . кислоты (ТХУ). Осадок удаляют центри- 15 фугироваиием в течение 10 мин при

6000 об/мин. Для.развития окраски пробирки со смесью надосадочной жидкости и тиобарбитуровой кислоты (ТБК) помещают в водяную баню при 20

t = 100 С и инкубируют 10 мин. Измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при Я = 535 нм. Скорость перекисного окисления выражают в нана.— молях на 1 мг белка. 35

Для определения активности супероксиддисмутазы (СОД) в эритроцитах из 1 мл гепаринированной венозной крови выделяют эритроциты путем центрифугирования 5 мин при 1000 об/мин „"0 при t = 2 С. Плазму отбрасывают, эритроциты промывают 10 мл холодного физиологического раствора, отделяют повторным центрифугированием при

3000 об/мин в течение 5 мин. Гемо3 лиз проводят добавлением 5 мл дистиллированной воды с последующим взоалтыванием в течение 5 мин, К супернатанту добавляют двухзамешенный фосфат калия, смесь этанол:хлороформ:вода, интенсивно перемешивают: и оставляют до расслоения на две фазы: верхнюю — водно-спиртовую и нижнюю — хлороформную. Водно-спиртовый слой имеет отчетливую желто- 45 зеленую окраску, обусловленную зритрокупреином, проявляющим супероксиддисмутазную активность. В полученном препарате определяют ферментативную . активность по методу, основанному на измерении степени торможения скорости окрашивания нитротетразолия синего, Реакционная смесь объемом ,5 мл содержит, мкмоль: пирофосфатная смесь 16; ЭДТА 7, нитротетразолий синий 50, феназинметасульфат 4,5, НАДФН 50 и экстракт с исследуемым

° ферментом. 3а единицу активности СОД принимают такое количество фермента, которое тормозит степень обесцвечивания нитротетразолия синего иэ 50%, Активность фермента СОД выражают в единицах на 1 мл крови.

Пример 1. Больная А, при поступлении отмечала фебрилитет, небольшую одышку в покое, частые воспалительные заболевания дыхательных путей в прошлом, При физикальном исследовании легких отмечалось притупление перкуторного звука, звучные влажные и сухие хрипы. Процесс рентгенологически имел верхнедолевое расположение„ структура корня легкого была изменена, Проба Манту — 6 мм, Микробактерии туребкулеза не были обнаружены, При иммунологическом исследовании; уровень Е-РОК составлял 19,2% процент бластовно РБТЛ на фитогемагглютинин

267., на туберкулин 1,3%. При специальном биохимическом исследовании установлено: уровень ПОЛ равен 7,2 нМ, активность СОД составляет 179,1 ЕД (в пределах нормы). На основании клннико-рентгенологических, биохимических, иммунологических показате:IVIII была диагностирована острая пневмония. Через 20 дней после пробной антибактериальной терапии препаратами широкого спектра действия наблюдалось полное рассасывание инфильтративных изменений.

Пример 2, Больная Т, при поступлении отмечался субфебрилитет, кашель, слабость. При физикальном исследовании — притупление перкуторного звука, единичные влажные хрипы.

Процесс имел верхнедолевое расположение в S, S . Реакция Манту — .

10 мм. При иммунологическом исследо" вании: уровень Е-РОК 33%, процент бластов по РЬТЛ на фитог магглютинин

35%, на туберкулин 1,7%, Уровень ПОЛ составлял 9,1 нМ, активность СОД

172,5 ЕД (ниже нормы), На основании клинико-рептгенологических и лабораторных данных был диагностирован инфильтративный туберкулез легких.

Назначена противотуберкулезная терапия, на фоне которой наступило улучшение, уменьшились явления .интоксикации. Рост 1икробактерий туберкулеза через 2 мес выявил положительные результp ы °

Пример 3, Больной Д,, 28 лет„

Состояние больного при поступлении в клинику среднетяжелое. Жалобы на кашель с небольшим. количеством мовременное адекватное лечение.

Способ прост в исголнении, Ф о р м у л а и з о б р е т ения

Способ дифференциальной диагнос"ики туберкулеза и острой пневмонии путем биохимического исследования крови больного, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точ5

161738 кроты, слабость, потливость, повьппение температуры до 37,5пС. При физикальном исследовании легких отмечалось некоторое ослабление дыхания, единичные влажные хрипы. Реакция йа пробу Манту с 2 ТЕ - папула 6 мм. В мокроте методом посева микробактерии не обнаружены, Рентгенологически: полиморфные спивающиеся тени в области верхней доли правого легкого. Для проведения дифференциальной диагностики проводились дополнительные биохи" мические исследования: уровень ПОЛ

8,9 нМ, активность СОД.172,0 ЕД. На основании клинико-рентгенологических исследований, а также данных специального биохимического исследования на 5-й день поступления бып поставлен диагноз инфильтративный туберкулез 20 верхней доли правого легкого. Проведено противотуберкулезное лечение.

Пример 4, Больной Г., 46 лет. .Состояние больного при поступлении в клинику было удовлетворительным, . 25 температура в пределах нормы. М(алобы на сухой кашель. При физикальном исследовании легких на фоне ослабления дыхания выслушивались единичные влажные хрипы. Реакция на пробу Манту З0 с 2 ТЕ 10 мм. В мокроте методом посева микробактерии туберкулеза не обнаружены. Рентгенологически: неоднородное затемнение верхней доли правого легкого.

Специальное биохимическое исследование выявило повьппение активности

ПОЛ до 9,5.нМ и снижение активностиСОД до 173,0 ЕД.

На основании клиника-рентгенологи40 ческого исследования, а также дополнительных биохимических исследований на 3-й день бьл поставлен диагноз: инфильтративный туберкулез верх- . ней доли правого легкого, 45

Пример 5. Больной А., 37 лет, Состояние среднетяжелое. Жалобы на кашель с мокротой, одышку в покое, повышение температуры до 38,2 С. При физикальном исследовании легких отмечалось притупление перкуторного звука, сухие влажные хрипы. Реакция на пробу

Мант„ с 2 ТŠ— папула 8 мм. Рентгенологически: гомогенное затемнение верхней доли правого легкого, изменение структуры корня легкого, При ,специальном биохимическом исследова- нии установлено; уровень ПОЛ равен

7,2 нМ, что значительно ниже значе2 б ния, полученного у больного туберкулезом, активность составляет 179,1 ЕД (в пределах нормы) .

Диагноз; острая пневмония (крупозная).

Пример 6, Вольная Г., 45 лет °

Состояние больной среднетяжелое; Жалобы на каыель с мокротой, одьппку.

При физикальном исследовании отмечается притупление перкуторного звука, влажные хрипы. Реакция на пробу

Манту отрицате .ьная °

Рентгенологически: гомогенное затемнение $ > правого легкого. При специальном биохчмическом исследовании наблюдалось говышение уровня

ПОЛ до 7,2 нМ, активность СОД равна 179,0 ЕД, Диагноз острая пневмония, Материал подвергали статистической ооработке методом вариационной статистики с использованием критерия

Стьюдента. На основе статистической обработки выбрали границы значений уровня ПОЛ и активности СОД. При пневмонии уровень ПОЛ = 7,3 + 0,14, Р (О, 001 активность СОД = 179,5

f. 0,1, Р . 0,05, При туберкулезе

ПОЛ = 9,2 + 0„16, Р с0.001,,СОД =

172,5 + 0,3, Р = 0,05. Контрольные величины (доноры) ПОЛ =* 4,3 + 0,18, .

СОД. = 180,0 < 0,59, где P — достоверность по сравнению с контролем.

Анализировали значения указанных показателей,у 79 больных туберкулезом и у 67 больных острой пневмонией.

По этим данным частота положительн-п-.. случаев, т.е. совпаден;.е диагноза, поставленного по предложенному способу, с окончательным диагнозом составляет 92 + 3? частота отрицательных случаев составляет 5 + 2/, процент ложноположительных — 3 «+ 2X. Точность прототипа составляет 63,5/.

Использование предложенного способа позволяет на ранней стадии с большой точностью установить диагноз заболевания и тем самым начать свое16173d2

Составитель А. Яхья ев

Техред Л, Сердюкова Корректор Т, Колб

Редактор М. Циткина

Заказ 4117 Тираж 509 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по иэобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óærîðîä, ул. Гагарина, 101

ИОСтй способа и его ускорения, в мембранах зритроцитов определяют содержание ТБК-активных продуктов перекисного окисления липцдов и активность супероксиддисмутазы и при значениях

ТБК-активных продуктов 8,9-9,5 нИ и активности супероксиддисмутазы

171,0-174,0 ЕД диагностируют туберку»

-лез, а при значениях продуктов перекисного окисления липидов 7,0-7,5 нМ и супероксиддисмутазы 119,0-180,0 ЕД.острую пневмонию.