Способ определения биозараженности винограда и виноматериалов

 

Изобретение относится к пищевой промышленности , в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья. Цель изобретения - повышение точности определения жизнеспособности плесеней. Это достигается за счет выбора вещества, характеризующего наличие такого поражения. В качестве такого вещества используют рутин

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s G О1 N 33/02

ГОСУДАРСТВЕН.ЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4472680/13 (22) 08.08.88 (46) 15.03.91. Бюл. N. 10 (71) Научно-производственное объединение по виноградарству "Виерул" (72) А.Н. Постная, Б.Л. Дорохов и А.Е. Вайсман (53) 663.1(088.8) (56) Notermans S. and oth. Immunological

detection of moulds 1и food relation between

antigen production and growth;- 1пб. I Food

Mlcroblolagy, 1986. 3, М 5. р. 253-261. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЗАРАЖЕННОСТИ ВИНОГРАДА И ВИНОМАТЕРИАЛОВ

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья.

Цель изобретения — повышение точности определения жизнеспособности плесеней.

Сущность способа заключается в следующем.

Виноград перерабатывают, меэгу прессуют, отделяют суслосамотек и первое давление и в среднюю пробу сусла вводят рутин, инкубируют с последующим определением изменения концентрации рутина.

Среднюю пробу сусла берут в количестве

50 см, вводят 5 мг рутина и делят пополам по 25 см . Одну часть пробы стерилиэуют при 1000С в течение 10 мин, а другую инкубируют при 37 С в течение 30 мин.

В результате инкубирования происходит расщепление рутина до дисахарида ру Ы 1635132 А1 (57) Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья. Цель изобретения — повышение точности определения жизнеспособности плесеней. Это достигается за счет выбора вещества, характеризующего наличие такого поражения. В качестве такого вещества используют рутин (3-0-рутинозид кверцетина), который обладает способностью под воздействием специфического грибного фермента рутинаэы расщепляться до дисахарида рутинаэы и агликона-кварцетина. 2 табл. тиназы и агликона под действием специфического формента плесеней — рутиназы.

Пробы фильтруют через мембранный фильтр и определяют концентрацию рутина высокоэффективной жидкостной хроматографией. При снижении концентрации рутина выше 10 сырье признается пораженным плесенями, Отсутствие различий в концентрации рутина в контрольном и исследуемом образцах, по величине не превышающих 10-",ь, служит основанием для признания сырья "здоровым".

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. Виноград сорта "Фетя-. ска" сортируют на здоровый и пораженный плесенями, перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе. мезгу прессуют, отделяют сусло-самотек и первое давление и отбирают среднюю пробу по

ГОСТ 14137-74. Средние пробы от каждой партии переработанного винограда в трех

1635132

55 повторностях в количестве по 50 см каждой з помещают в колбочки, в которые вводили по

5 мг оутина. Образцы делят пополам по

25 см, одну половину стерелизуют кипячением при 100 С в течение 10 мин, а другую половину каждой пробы оставляют беэ изменений. Стерилизованные образцы — контроли помещают вместе с испытуемыми в термостат и инкубируют при 37 С в течение

0,5 ч, Отбирают из каждой пробы 5 см обз разца, фильтруют через мембранный фильтр 0,45 мкм и определяют концентрацию рутина на жидкостном хроматографе

"Милихром" на колонке 62х2 мм, с сорбентом "Силасорб С1в". В хроматограф вводят

15 мкм мембранно отфильтрованного образца и элюируют смесью ацетонитрила и воды в соотношении 20;30 (по объему) при рН 2,8, доведенной ортофосфорной кислотой. со скоростью 30 мкл/мин потока подвижной фазы. Детектирование ведут при

360 нм с идентификацией пика рутина путем сопоставления приведенного времени удержания образца с приведенным временем удержания раствора чистого рутина, анализируемого в тех же условиях, Концентрацию рутина определяют по калибровочному графику, Сопоставляя концентрации рутина в контрольной и исследуемой пробе судят о пораженности сырья плесенями.

В табл. 1 приведены данные, характеризующие концентрацию рутина в контрольных и исследуемых образцах "здорового" и пораженного винограда сорта "Фетяска".

В пробах сусла, полученного иэ здорового сырья, и в стерилизованном образце концентрация рутина не изменилась, отклонения не превышают ошибку метода анализа. В процессе стерилизации происходит инактивация ферментов плесеней и внесенный в образе путин не подвергается расщеплению, его содержание не меняется, В образце пораженного плесенями винограда концентрация рутина снизилась, он разрушился под дейл, вием ферментов, присутствующих в пораженном плесенями винограда.

Пример 2. Виноград сортов "Рислинг", "Рейнский", "Пино", "Траминер", "Алиготе", "Амур" перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, не сортируя на здоровые и пораженные плесенью ягоды, Мезгу прессуют, отделяют сусло-самотек и первое давление и отбирают среднюю пробу по ГОСТ 14137 — 74. Средние пробы каждого сорта переработанного винограда в количестве 50 см помещают в колбочки, в каждую иэ которых вводят 5 мг рутина. Образцы делят пополам по 25 см, одну полоз вину стерилизуют кипячением в течение 10

35 мин, а другую половину каждой пробы оставляют без изменений. Стерилизованные образцы — контроли помещают вместе с испытуемыми в термостат и инкубируют при

37 С в течение 0,5 ч. Иэ каждой пробы отбирают по 5 см образца, фильтруют через з мембранный фильтр 0,45 мкм и определяют концентрацию рутина на хроматографе

"Милихром" на колонке 62х2 мм с сорбентом "Силасорб С 1а", В хроматограф вводят

15 мкл мембранно отфильтрованного образца и элюируют смесью ацетонитрил — вода в соотношении 20. 80 по объему при рН 2,8, доведенной ортофосфорной кислотой, со скоростью потока подвижной фазы, равной

30 мкл/мин. Детектирование ведут при

360 нм с индентификацией пика рутина путем сопоставления приведенного времени удерживания образца с приведенным временем удерживания раствора чистого рутина, анализируемого в тех же условиях, Концентрацию рутина определяют по калибровочному графику. Уменьшение концентации рутина в контрольных и исследуемых пробах через 0,5 ч свыше 10 позволяет признать сырье пораженным плесенями. Если же уменьшение концентрации рутина не превысило 10 (,, то проводят определение концентрации рутина через каждый час, Но не более 4,5ч в сумме.

При отсутствии различий в содержании рутина в контрольной и исследуемой пробах по прошествии 4,5ч сырье признавали "здоровым".

В табл. 2 приведены данные характеризующие концентрацию рутина в исследуемых образцах винограда по отношению к контрольным.

В образцах сусла "Рислинг", "Рейнский" и "Алиготе" после 0,5 ч инкубации происходит заметная убыль рутина (по отношению к контролю), что позволяет утверждать факт пораженности этих партий винограда плесенью. Сортообрацеэ сусла

"Пино" поражен плесенью, что подтверждено 3,5ч инкубирования.

В образцах сусла "Траминер" и "Амур" не обнаружено изменений концентрации рутина (по отношению к контролю) íà протяжении всего времени инкубирования, что позволяет установить факт отсутствия поражения сырья плесенью, сырье "здоровье".

Представленные примеры показывают воэможность использования определения рутиназной активности в пораженном плесенью исходном сырье, предназначенном для переработки. Рутиназа является специфическим форментом плесеней, активность которого обнаруживается по расщеплению

1635132 рутина, добавляемого в пробу, а рутин может служить индикатором для определения плесеней в сырье.

Таблица 1

Таблица 2

Составитель Г.Богачева

Техред М.Моргентал Корректор Т.Малец

Редактор А.Ревин

Заказ 754 Тираж 411 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Предлагаемый способ (в отличие от известного) обеспечивает: специфичность определения; большую точность определения при различной степени пораженности сырья; воэможность контроля за ходом процесса пастеризации, обработки бентонитом и других технологических операций, связанных с удалением ферментов иэ обрабатываемого материала.

Формула изобретения

Способ определения биоэараженности винограда и виноматериалов по наличию продукта метаболизма грибов, о т л и ч а ю5 шийся тем, что, с целью повышения точности определения жизнеспособности плесеней, в пробу исследуемого продукта вводят рутин с последующим делением ее на две части, одну из которых стерилиэуют.

10 измеряют концентрацию рутина в этих частях и сравнивают их между собой. а определение наличия продукта метаболизма осуществляют по результату сравнения.