Способ получения концентрата гема

 

Изобретение относится к медицине и касается способа получения концентрата гема. Целью изобретения является повышение концентрации гема в концентрате. Способ осуществляется расщеплением гемоглобина или геминовой пасты, содержащей глобин, дегидратирующим агентом, доведением PH до 7,5-8,0, экстракцией целевого продукта этанолом или метанолом, или пропанолом или смесью пропанола и изопропанола в равных соотношениях в концентрации 40-70% по объему при PH 8,0-10,7 или с добавлением имидазола при PH 6,5-8,5 при температуре от 0 до -20°С в присутствии солей хлорида, цитрата или сульфата натрия или аммония.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 61 К 37/14

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР м, } p уее е те а

1ту. .

В J т» т K, (." е е ь „

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 3359217/14 (86) РСТ/FI 18-1/00026 (01,04,81) (22) 30,11.81 (31) 8002591-9 (32) 03,04.80 (33) SE (46) 30.06.91. Бюл. ¹ 24 (76) Пол Геран Сигвард Линдроос (SE) (53) 615.361,018,51/.55 (088.8) (56) Патент ФPГ ¹ 2656157, кл. С 07 G 7/00, 1977. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРАТА

ГЕМА (57) Изобретение относится к медицине и касается способа получения концентрата

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности и касается способа получения концентрата гема.

Цель изобретения — повышение концентрации гема в концентрате.

Согласно данному способу производят извлечение концентрата гема из смеси гема с кровяным веществом, получаемой при расщеплении гемоглобина, при этом концентрат гема отделяют от глобина таким оЬразом, что концентрат гема превращается в растворенную форму, в то время как остальное вещество находится в нерастворенной форме, Пример 1, Взятую из организма кровь с добавкой в нее цитрата натрия в качестве коагулянта разделяют путем центрифугирования, в результате чего получают плазму и раствор красных кровяных клеток, К жидкому раствору красных кровяных клеток до„„5U ÄÄ 1660573 АЗ гема. Целью изобретения является повышение концентрации гема в концентрате. Способ осуществляется расщеплением гемоглобина или геминовой пасты, содержащей глобин, дегидратирующим агентом, доведением рН до 7,5-8,0, экстракцией целевого продукта этанолом или метанолом, или пропанолом или смесью пропанола и изопропанола в равных соотношениях в концентрации 40-70 Р по объему при рН 8,010,7 или с добавлением имидазола при рН

6 5 — 8,5 при температуре от 0 до — 20 С в присутствии солей хлорида, цитрата или сульфита натрия или аммония. бавляют хлорид натрия и этанол в таком количестве, чтобы получилось 2,2 г смеси,. красных кровяных клеток, содержащей 0,34 .r белка, 0,16 г хлорида натрия, 0,26 г 100 $- О ного этанола, 1,44 г воды и растворимые вещества, присутствующие в крови. Белок, главным образом гемоглобин, определяется посредством осаждения этанолом. 2.2 r смеси кровяных клеток содержат 11,1 мг геми- 4 на, что определено методом по пиридину. Сд

Смесь 4 мл 96 7-ного (по объему) этанола и 0,8 мп 1 М HCI при температуре — 8 С, та вводят по каплям при одновременном пере- GL) мешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -5 С. После этого введения величина рН составляет 3.1 и температура составляет -5 С. В смесь вводят 3 мл ледяной воды и 1,8 мл 0,5 М Na0H в

707-ном (по объему) этаноле при одновременном перемешивании и охлаждении; температура смеси составляет -5 С, и величина

1660573 рН составляет 7,5. По прошествии 5 мин в смесь вводят 10 мл 96 -ного (по объему) этанола, 10 мл 70/,-ного (по объему) этанола, 1 мл 1 M глицина в водном растворе и 2,2 мл 0,5 М NaOH, при одновременном пере-, 5 мешивании и охлаждении. После этого смесь содержит 67% (по объему) этанола, величина рН составляет 10,3 и температура ее -50С. Смесь центрифугируют при 3000 g в течение 5 мин, в результате чего получают 10 всплывший слой красного цвета и коричне, вато-красную пасту. Всплывший слой со держит 0,18 мг гема/мл (61,5 содержания гема от содержания его в исходном матери, але), 15

Данную пасту в третий раз обрабатывают так, как указано выше, в результате чего достигается содержание гема 0,06 мг/мл (5,4 содержания гема от содержания в исходном материале). Общий выход концент- 20 рата гема составляет 78,6 . Данная паста имеет коричневый цвет и вес ее в сухом состоянии составляет 0,27 г (выход белка

79 5%)

Пример 2. Осуществляя процесс 25 таким же образом, как в примере 1, величину рН понижают до 3,1, после этого доводят величину рН до 7,5, Смесь экстрагируют таким же образом, как и в примере 1, но вводя одновременно 1 мл 2 М имидазола в 70 - 30 ном (по объему) этаноле. Величину рН доводят до 8,4. Повторяют операцию еще двукратно. Всплывшие на поверхность слои содержат соответственно 79, 12 и 4 гема от содержания его в исходном материале. 35

Общий выход концентрата гема составляет

95%. Данная паста имеет светло-коричневый цвет и содержит 85 белка от содержания в исходном материале..

П р и ме р 3, Смесь 2 мл воды и 0,7 мл 40 соляной кислоты (1 М) при температуре 1 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -8 С. После этого величину рН доводят до 3,2 и температуру 45 доводят до -5 С. Затем в эту смесь вводят 4 мл 967ь-ного (по объему) этанола, 10 мл

70%-ного (по объему) этанола, 1 мл 1 М глицина в виде водного раствора, 1 мл 2 молярного имидазола в 70 -ном (по объе- 50 му) этаноле и 1,5 мл 0,5 малярного NaOH в

700 -ном (по объему) этаноле, рН 8,0 при одновременном перемешивании и охлаждении; температуру смеси поддерживаюто

«5 С. содержание этанола составляет 55 примерно 56 об, Смесь центрифугируют по прошествии 5 мин, как и в примере 1, и получают -всплывший слой, содержащий

590 гема от исходного материала, и коричневую пасту. Пасту экстрагируют двукратно

10 мм 70 — ного (по объему) этанола каждый раз при величине рН 8,0 и получают всплывшие слои, содержащие соответственно 18 и

8 гема от содержания в исходном материале, Общий выход концентрата гема 85 .

Паста имеет коричневый цвет и содержание белка составляет 72 от содержания в исходном материале.

Пример 4. Смесь 3 мл 96 -ного (по объему) этанола и 0,35 мл 0,5 М NaQH в

70 -ном (по объему) этаноле при -10 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 r смеси кровяных клеток при -10 С. После этого величина рН составляет 10,2 и температура составляет -10 С. К данному раствору добавляют смесь 2 мл ледяной воды, 3 мл

50 -ного (по объему) этанола и О, I5 мл 1 М

HCI при -10 С. Величина рН смеси составляет 7,5 и температура -10 С. К этому раствору добавляют смесь 5 мл 96 -ного (no объему) этанола, 5 мл 70 -ного (по объему) этанола и 2 мл 0,5 М NaOH в 70 -ном (по объему) этаноле при -10 С. Величина рН полученной смеси составляет 10,3, температура -10 С,содержание этанола примерно

64% (по объему), По прошествии 5 мин смесь центрифугируют, как и в примере 1, и получаЮт всплывший слой с содержанием гема 46 от содержания в исходном материале и темно-коричневую пасту. Пасту два раза экстрагируют10-ю мл 65%-ного (по объему) этанола, каждый раз при величине рН

10,3 и при -10 С, и получаются всплывшие слои, содержащие соответственно 14 и 7

reMa от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 67 . Получаемая паста коричневого цвета и имеет содержание белка 71% от содержания в исходном материале.

Пример 5. Осуществляя процесс таким же образом, как и в примере 4, величину рН смеси кровяных клеток повышают до 10,2 и температуру поддерживают 0 С. В этот раствор вводят смесь 3 мл 50 -ного (по объему) этанола и 0,2 мл 1 М HCI npu OOC.

Величина рН смеси составляет 8,2 и температура составляет 0 С. Затем в этот раствор вводят смесь 5 мл 96 -ного (по обьему) этанола и 10 мл 70 -ного (по объему) этанола при.0 С. Величина рН получаемой смеси составляет 8,2, температура составляет 0 С и содержание этанола составляет бб (по объему), По прошествии 5 мин смесь центрифугируют, как и в примере 1. Получают всплывший слой с содержанием 52 гема от его содержания в исходном материале и темно-коричневую пасту. Пасту два раза экстрагируют 10-ю мл 65 -ного (по объему) этанола и 0,2 мл имидазола в 70 -ном (по

1660573 о объему) этаноле, каждый раз при величине рН 8,2 и при 0 С, и получаются всплывшие слои с содержанием гема соответственно 28 и 12 от его содержания в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 92 . Получаемая паста имеет коричневый цвет и содержит 85 белка от исходного материала.

Пример 6. Смесь,1 мл воды и 0,8 мл

0,5 M NaOH при 10 С вводят по каплям при одновременном перемешивании в 2,2 гсмеси кровяных клеток при температуре 10 С.

После этого величина рН составляет 11,0 и температура 10 С. В получаемый раствор вводят 4 мл 96 -ного (по объему) этанола, 1 мл 2 М имидазола в 70 -ном (по объему) этаноле, 1 мл 30 -ного цитрата натрия в виде водного раствора и 0,5 мл 1 М HCI.

Величина рН полученной смеси составляет

7,5 и температура 10 С. После этого вводят в смесь 3 мл 9б -ного(по объему) этанола и 10 мл 70 -ного (по обьему) этанола. Величина рН смеси составляет 7,5, температура составляет 10 С, и содержание этанола составляет примерно 64 (по объему). По прошествии 5 мин смесь центрифугируют, как и в примере 1, и получают всплывший слой с содержанием 53 гема от содержания его в исходном материале и темно-коричневую пасту. Пасту экстрагируют два раза 10 мл

65 -ного (no обьему) этанола и 0,1 мл 2 М имидазола в 70%-ном (по объему) этаноле, каждый раз при величине рН 7,5 и при 100С, и г олучаются всплывшие слои, содержащие соответственно 26 и 13 гема от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 92 .

Паста имеет коричневый цвет и содержит

74 белка от содержания его в исходном материале.

Пример 7. Смесь 5,5 мл 96%-ного (по объему) этанола и 1,0 мл 1-малярной HCI при температуре -18"С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в смесь 2,2 г смеси кровяных клеток, 0,1 мл 1 M глицина в виде водного. раствора, 0,1 мл 2 М имидазола в 70 -ном (по объему) этаноле и 2 мл 50 -ного (по объему) этанола при -18 С. После этого величина рН составляет 3,0 и температура-18 С. B полученный раствор вводят 3 мл

40 -ного сульфата аммония в виде водного раствора при одновременном перемешивании и охлаждении. По прошествии 5 мин в раствор вводят смесь 10 мл 96 -ного (по объему) этанола, 20 мл 70 ного {по обьему) этанола и 4 мл 0,5 M NaOH в 70 -ном (по объему) эта ноле и ри -18 С, и ри одновременном перемешивании и охлаждении. После этого величина рН составляет 7,5 и темпе5

55 ратура -18 С, содержание этанола примерно 69-,,ь (по обьему), Смесь центрифугируют так, как в примере 1. Полученную пасту экстрагируют два раза 20 мл 707ь-ного (по обьему) этанола, 0,1 мл 1 М глицина в виде водного раствора и 0,1 мл 2 M имидазола в

70 -ном (по объему) зтаноле каждый раз при величине рН 7,5 и при -18 С. Содержание гема во всплывшем слое составляет соответственно 69, 14 и 5 от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 88 . Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и имеет содержание белка 81 от содержания его в исходном материале.

Пример 8. Смесь В мл 96 -ного (no объему) этанола и 0,8 мл 1 M HCI при -5 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,2 г смеси кровяных клеток при -5 С. После этого величина рН составляет 3,1 и температура

-5 С. В данную смесь вводят 0,8 мл 0,2 М

NaOH в 50 -ном (по объему) этаноле и 10 мл

50 -ного (по объему) этанола, после чего величина рН смеси составляет 3,5 и температура -5 С. Смесь центрифугируют при

90009 в течение5мин, после чего получаются желтый всплывший слой и черная паста. Из всплывшего слоя после ввода в него

8 мл воды пои величине рН 7.5 осаждается серый белок, содержащий 0,21 г сухого вещества. Гемовую пасту черного цвета перемешивают со смесью 30 мл 70 — ного {по обьему) этанола, 0,5 мл M глицина в виде водного раствора, 0,5 мл 2 M имидазола в

70 -ном (по объему) этаноле и 2,5 мл 0,5 М

Na0H в 70 -ном (по объему) этаноле. Величина рН смЕси составляет 8,6, температура

-5 С и содержание этанола примерно 70 (по объему). Смесь центрифуги руют п ри

30009 втечение 5 мин и получают всплывший слой с содержанием гема 72 от его содержания в исходном материале и коричневую пасту. Пасту экстрагируют два раза

30 мл 70 -ного (по обьему) этанола и 0,1 мл

2 М имидазола в 70 -ном {по объему) этаноле, каждый раз при вели ине рН 8,6 и при о

-5 С и получают всплывшие слои с содержанием reMa соответственно 19 и 8 отсодержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 99; .

Получаемая паста имеет зеленовато-коричневый цвет и содержит 0,1 г сухой массы.

Общий выход белка 91%.

Пример 9. а, Осуществляя процесс так, как в примере 8, происходит отделение черной гемовой пасты при использовании в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток, Пасту смешивают с 30 мл

50%-ного (па обьему) этанола и величину рН

1660573 доводят до 8,5 посредством 0,5 M NaOH в

70 -ном (по объему) этаноле при -1 С, Содержание этанола составляет примерно

50% (по объему). Смесь центрифугируют так, как в примере 8 и получают всплывший слой, в котором содержание reMa составляет 33% от содержания его в исходном материале, и темно-коричневую пасту. Эту пасту экстрагируют три раза 30 мл 50%-ного (по объему) этанола, каждый раз при величине рН 9,0 и при -1 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно

24, 13 и 9% от содержания его в исходном материале, Общий выход концентрата гема составляет 79%. Данная паста имеет коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0.1 г. Общий выход белка 91, б, Осуществляя процесс так, как в. примере 8, происходит отделение черной гемовой пасты при использовании в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток, Пасту смешивают с 30 мл 40%-ного (по объему) этанола и величину рН доводят до 10,7 посредством 0,5 M NaOH в 70 -ном (по объему) этаноле. Температура составляет -4 С и содержание этанола примерно

40 (по объему). Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 71% от содержания его в исходном материале и коричневую пасту. Эту пасту экстрагируют два раза 30 мл 40%-ного (по объему) этанола, каждый раз при величине рН 10,7 и при -4 С, и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 7,2 и 4,8% от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 83%.

Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержит 0,08 г сухой массы, Общий выход белка 85%.

Пример 10. Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 r смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 60 -ного (по объему) этанола, 0,2 мл 2 M имидазола в

70%-ном (по объему) этаноле и 1 мл 40%-ного (no весу) сульфата аммония в виде водного раствора. Величину рН доводят до 6.8 посредством 0,5 М NaOH в 70 -ном (по объему) этаноле. Температура составляет

25 С, и содержание этанола примерно 60% (по объему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 63% от содержания его в исходном материале, и коричневато-красную пасту. Пасту два раза зкстрагируют

60 -ным (по объему) этанолом, имидазолом и сульфатом аммония в указанных количествах, каждый раз при величине рН равной 6,8

10 ют два раза 90%-ным (по обьему) этанолом

25 и глицином в укаэанных количествах, каж30

40 в 70%-ном(по объему) этаноле. Величину рН доводят до 7,0 посредством 0,5 M NaOH в

70%-ном (по объему) этаноле. Температура составляет -5 С и содержание этанола в смеси примерно 42% (по объему). Данную

45 смесь центрифугируют, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 58% от содержания его в исходном материале, и темно-красную пасту. Эту пасту экстрагируют два раза 70%-ным {по обь50

20 и при температуре 25 С и получаются всплывшие слои с содержанием гема соответственно 14 и 8 от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 85 . Получаемая паста имеет коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,07 r. Общий выход белка 83%.

Пример 11. Осуществляя процесс так, как описано в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток.

Эту пасту перемешивают со смесью 30 мл

96%-ного (по объему) этанола и 0,2 мл 1 M глицина в виде водного раствора. Величину рН доводят до 10,4 посредством 0,5 M NaOH в 70%-ном (по объему) этаноле. Температура составляет -20 С, содержание этанола примерно 90; (по объему). Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 61 от содержания его в исходном материале, и темно-коричневую пасту, Пасту экстрагирудый раз при величине рН 10,4 и при -20 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 20 и 9% от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 90 . Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет

0,1 г. Общий выход белка 91%

Пример 12. Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток, Эту пасту перемешивают со смесью 30 мл 40 -ного (по обьему) этанола и 0,2 мл 2 М имидазола ему) этанолом и имидазолом в указанных количествах, каждый раз при величине рН 7 и при -5 С и получают всплывшие слои, содержащие соответственно 26 и 5% гема от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет

89%. Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0.1 г. Общий выход белка 91 .

Пример 13. Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую

1660573

45

50 пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 70%-ного (по объему) метанола и 0,2 мл 2 М имидазола в 70%-ном (по объему) этаноле. Величину рН доводят до 8,5 посредством 0,5 М NaOH в

70 -ном (по объему) этаноле, Температура составляет -5 С, содержание метанола примерно 60% (по объему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой, содержащий 67% гема от содержания его в исходном материале, и коричневато-красную пасту. Пасту экстрагируют два раза 70 -ным (по объему) этанолом и имидазолом в указанных количествах каждый раз при величине рН 8,5 и при температуре -5 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно18 и 7 от содержания его в исходном материале.

Общий выход концентрата гема составляет

92%. Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержит 0,1 г сухой массы.

Общий выход белка 91%.

Пример t4. Осуществляя процесс так, как в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток. Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл 70%-ного (no объему) пропанола и 0,2 мл 2 M имидазола в 70 -ном (по объему) этаноле. Величину рН доводят до 8,0 посредством 0,5 M йаОН в 70 -ном (по объему) этаноле. Температура составляет -5 С, содержание пропанола примерно 60% (по объему). Смесь центрифугируют, как описано в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием

66% гема от содержания его в исходном материале и коричневато-красную пасту.

Пасту экстрагируют два раза 70 -ным (по объему) пропанолом и имидазолом в указанных количествах каждый раз при величине рН 8,0 и при температуре -5 С, получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 16 и 9 от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 91%. Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет

0,1 г. Общий выход белка 91 .

Пример 15. Осуществляя процесс так как описано в примере 8, выделяют черную гемовую пасту, используя в качестве исходного материала 2,2 г смеси кровяных клеток.

Эту пасту перемешивают со смесью 20 мл

70%-ного (по объему) изопропанола, 0,2 мл

1 M глицина и 0,2 мл 2 M имидазола в 70 ном (по обьему) этаноле. Величину рН смеси доводят до 7,5 посредством 0,5 M NaOH в

70 -ном (по объему) этаноле, Температура составляет -10 С, содержание изопропано10

40 ла составляет примерно 60% (по объему).

Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой с содержанием гема 69% от содержания его в исходном материале и коричневато-красную пасту.

Пасту экстрагируют два раза 70%-ным (по объему) изопропанолом глицином и имидазолом в указанных количествах каждый раз при величине рН 7,5 и при температуре-10 С и получают всплывшиеслои с содержанием гема соответственно 17 и 9% от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата reMa составляет

95%, Получаемая паста имеет светло-коричневый цвет и содержание в ней сухой массы составляет 0,1 r. Общий выход белка 91 .

Пример 16. Смесь 6 мл 96%-ного (по объему) этанола и 1 мл 1 M HCl при -8 С вводят по каплям при одновременном перемешивании и охлаждении в 2,7 г крови при

0,5 С. После этого величина рН составляет

3,0 и температура -5 С. Затем в эту смесь вводят 2 мл 40%-ного сульфата аммония в виде водного раствора и смесь 20 мл 70%ного (по объему) этанола, 0,2 мл 1 М глицина в виде водного раствора и 0,2 мл 2 M имидазола в 70%-ном (по объему) этаноле при-B С при одновременном перемешивании и охлаждении. Величину рН доводят до 8,0 посредством 0,5 М NaOH в ?0%-ном (по объему) этаноле. Температура составляет

-8 С и содержание этанола примерно 65% (по обьему), Смесь центрифугируют так, как в примере 8, и получают всплывший слой, содержащий 66% гема от содержания его в исходном материале и коричневато-красную пасту. Эту пасту экстрагируют два раза

70%-ным (по объему) этанолом, сульфатом аммония и имидазолом в указанных количествах, каждый раз при величине рН 8,0 и при

-8 С и получают всплывшие слои с содержанием гема соответственно 16 и 7% от содержания его в исходном материале. Общий выход концентрата гема составляет 89%, Данная паста после промывки ее 50 -ным (по объему) этанолом имеет серовато-коричневый цвет и общий выход белка 85 .

Пример 17. Используя в качестве исходного материала 22 г смеси кровяных клеток, выделяют емовую пасту, в результате экстракции которой при величине рН

10,4, при -5"С и с использованием 70%-ного (по объему) этанола получают первый экстракционный раствор в количестве 199 мл с концентрацией гема 0,38 мг/Mn, что соответствует содержанию гема 68.1 от содержания его в исходном материале, второй экстракционный раствор в количестве 121 мл с концентрацией гема 0.17 мг/мл, что соответствует содержанию гама 1S,6% от

1660573

Саста вител ь С. Мел ьн икова

Редактор М.Недолуженко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор И,Муска

Заказ 1858 Тираж 456 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 содержания его в исходном материале, и третий экстракционный раствор в количестве 118 мл с концентрацией гема 0,08 мг/мл, что соответствует содержанию гема 8,5% от содержания его в исходном материале. Экстракционные растворы соединяют и подкисляют до величины рН 5,1, используя 87 мл 0,1 М HCI, при -5 С. Образующийся в результате этого черный хлопьевидный осадок отделяется путем центрифугирования при 3000 g, весовое количество этого осадка составляет 4,5 г. Эту пасту промывают три раза в 15 мл ледяной воды (в каждой промывке), суспензируют в 15 мл ледяной воды, доводят величину рН до 8,2 посредством 3 мл 0,2 M NaOH, замораживают и высушивают при температуре ниже 0 С. В результате получается 265 мг черного порошка с содержанием гема 36%. Общий выход концентрата гемэ составляет 86 .

Результаты анализа продукта, : С

46,17; Н 5,30; Cl 10,53; P 2,8; Fe 3,57; N 9,6;

К 35 и йа 4,1.

Пример 18. В результате экстракции гемовой пасты, выделенной из 50 г смеси кровяных клеток, при величине рН 8,2, при температуре+1 С и с использованием 60%ного (по объему) этанола и 4 мл 2 М имидазола в 70 -ном (по объему) этаноле получают первый экстракционный раствор в количестве 494 мл с концентрацией гема

0,32 мг/мл, что соответствует содержанию гема 62,8% от его содержания в исходном материале, второй экстракционный раствор в количестве 467 мл с концентрацией гема

0,11 мг/мл, что соответствует содержанию гема 20,4% от е1о содержания в исходном материале, и третий экстракционный раствор в количестве 479 мл с концентрацией гема 0,06 мг/мл, что соответствует содержанию гема 11,4 от его содержания в исходном материале. Экстракционные растворы соединяют и подкисляют до величины рН

4,0, используя 240 мл 0,1 М НО, при температуре 1 С, Образуемый осадок отделяют, как указано выше, количество этого осадка составляет 8,5 г. Пасту промывают три раза в ледяной воде, каждый раз по 25 мл, суспенэируют в 25 мл ледяной воды, величину рН доводят до 8,5 и суспензию заморажива5 ют и высушивают при температуре ниже

0 С. В результате получается 510 мг черного порошкообраэного продукта с содержанием гема 42 . Общий выход концентрата гема составляет 85%.

10 Пример 19. Осуществляя процесс так, как в примере 18, получают один экстракционный раствор, Последний отдельно подкисляют до величины рН 4,0 и полученный черный осадок отделяют, промывают и вы15 сушивают при температуре ниже 0 С тэк, как описано в примере 18. Полученный таким образом концентрат гема содержит

55 гема.

Согласно предложенному способу, по20 лучают концентрат гема, содержащий гем в количестве не менее 40 вес,%. Этот концентрат гема предназначен для использования в качестве фармацевтического средства против анемии, а также в качестве обога25 щенного железом средства в пищевых продуктах. Продукт, полученный по известному способу, содержит примерно 10 вес. гема.

Формула изобретения

Способ получения концентрата гема пу30 тем расщепления гемоглобина зритроцитов в присутствии дегидратирующего агента и разделения гема и глобина, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения концентрации гема в целевом продукте, до35 полнительно используют геминовую пасту, содержащую глобин, при этом после расщепления рН сначала доводят до 7,5-8,0, э затем целевой продукт экстрагируют этанолом или метанолом, или пропанолом, или

40 смесью пропанола и изопропанола в равных соотношениях в концентрации 40-90 об.% при рН 8,0-10,7 или с добавлением имидазола при рН 6,5-8,5 при температуре (0)-(-20) С и в присутствии солей хлорида, 45 цитратэ или сульфата натрия или аммония,