Способ определения гомеостатичности форм ярового ячменя
Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений. Целью изобретения является повышение точности определения. Способ прогнозирования гомеостатичности форм ярового ячменя включает выращивание растений до молочно-восковой спелости зерен в контрастных почвенных условиях, выделение ДНК, обработку BAMH 1 рестриктазой и блот-гибридизацию по Саузерну с меченым зондом рибосомальной ДНК (рДНК), который представляет собой последовательность размером 4,1 т.п.н, включающую часть 25 S и 18S рДНК. Сканирование радиоавтографа производят на денситометре. В качестве наиболее гомеостатичных генотипов отбирают те формы, у образцов которых, выращенных в сосудах с песком при недостатке почвенного азота, зафиксированы наименьшие изменения количественного содержания участков рестриктированной рДНК по сравнению с образцами, выращенными в сосудах с черноземом при подкормке азотно-фосфорно-калийными удобрениями. Способ может найти применение в селекционно-генетических исследованиях, при изучении молекулярных основ гомеостатичности растений, в селекции ярового ячменя для отбора гомеостатичных форм. 1 табл.
COtO3 СОBEТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕ СКИХ
r-ЕСПУБЛИК (st)s С 12 Q 1/68
ГОСУДАРCTВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИРМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4400756/13 (22) 30.03,88 (46) 23,07.91. Бюл. ¹ 27 (71) Всесоюзный селекционно генетический институт (72) Ю.M. Сиволап и Е.В. Бойко (53) 575.224,2 (088.8) (56) Володин B.Ã. Изучение активности пероксидазы у растений с разной степенью гомеостаза. — В с5. Экологическая генетика растений и животных. Тез.докл, Всесоюзной конф. Кишинев, 1981, ч. li, с, 38. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОМЕОСТАТИЧНОСТИ ФОРМ ЯРОВОГО ЯЧМЕНЯ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений.
Цель изобретения является повышение точности определения, Способ прогнозирования гомеостатичности форм ярового ячменя включает выращивание растений до молочно-восковой спелости зерен в контрастных почвенных условиях, выделение ДНК, обраИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции сельскохозяйственных растений.
Целью изобретения является повышение точности определения.
Предлагаемый способ прогнозирования.гомеостатичности сортов, основан на оценке по показателю, который характеризут изменчивость самого генома, а именно рибосомальной ДН К (рДН К) — участка, количественные характеристики которого тесно связаны с состоянием внешней и внутренней среды организма, „„. Ж„„1664846 Al ботку Bam Н1 рестриктазой и блат- гибридизацию по Саузерну с меченым зондом рибосомал ь ной ДН К (рДН К), который представляет собой последовательность размером 4,1 т,п,н, включающую часть 25S и 18$ рДНК. Сканирование радиоавтографа производят на денситометре. В качестве наиболее гомеостатичных генотипов отбирают те формы, у образцов которых, выращенных в сосудах с песком при недостатке почвенного азота, зафиксированы наименьшие изменения количественного содержания участков рестриктированной рДНК по сравнению с образцами, выращенными в сосудах с черноземом при подкормке азотно-фосфорно-калийными удобрениями. Способ может найти применение в селекционно-генетических исследованиях, при изучении молекулярных основ гомеостатичности растений, в селекции ярового ячменя для отбора гомеостатичных форм. 1 табл.
Пример. Семена (контрольного гомеостатичного) и испытываемых сортов (форм) высевают по двум вариантам опыта в сосуды (10 сосудов на вариант): благоприятные условия — чернозем, NPK по 17 Д; неблагоприятные — песок, среда Прянишникова с 1/8 содержания азота. Растения выращивают до получения зерен молочно-восковой спелости, выделяют из них тотальную ДНК, которую разрезают рестриктазой BGm Hl.
Фрагменты ДНК фракционируют с помощью электрофореза в агарозном геле, переносят на нитроцеллюлозные фильтры,.
Эти фильтры с иммобилизованными на них
1664846
Мол. масса фрагмента т.п.н, Сорт и его гомеостатичность хп
xn — х, хг — 1,7
+ 0,2 — 0,5 — 0,5 — 0,4
+1,5 — 0,8 — 0,4
+ 0,4 — 0,1
+1,5
10,2
7,0
4,4
5,4
9,2
2,1
10,2
13,1
2,0
11,9
23,7
8,5
7,2
3,9
4,9
8,8
3,6
9,4
12,7
2,4
11,8
25,2
9,9
8,8
7,8
7,1
6,0
5;5
4,8
4,0
3,4
3,0
2,0 — 1,7
Южный гомеостатичн ый
Донецкий — 4 гомеостатичный
+ 0,9
+ 0,3
+1,0
+0,6
+0,1 — 0,8
+ 0,4 — 1,0
+ 0,6 — 1,2
+ 2,6
10,3
10,6
4,5
5,5
8,9
1,2
11,3
8,2
2,0
9,6
27,9
9,4
10,3
3,5
4,9
8,8
2,0
10,9
9,2
1,4
10,8
25,3
9,9
8,8
7,8
7,1
6,0
5,5
4,8
4,0
3,4
3,0
2,0 в 1,7
Магниф — 105 негомеостатичный
+ 2,5
+ 3,1*
15,1
8,8
12,6
5,7
9,9
8,8 фрагментами ДНК гибридизируют с меченым фрагментом рДНК, который представляет собой последовательность размером
4,1 т.п.н., включающую часть 25S — 18S (блат-гибридизация по Саузерну) и экспонируют с рентгенографической пленкой. Для оценки различий по количеству фрагментов рестрикции рДНК между вариантами опыта определяют площадь полос рДНК с помощью радиоавтографа при сканировании на денситометре. Сравнение рДНК образцов, выращенных в разных почвенных условиях; делают в 5 повторных опытах по рестрикции ДНК, электрофорезу, блот-гибридизации и сканированию радиоавтограмм, Площадь полос фрагментов рДНК образцов, выращенных на черноземе (Хг) и на песке (Хл), представлена в таблице.
Из таблицы видно, что образцы сортов
Южный и Донецкий-4, выращенные в контрастных условиях, практически не различаются по содержанию фрагментов рДНК, исключение составляет фрагмент размером
6,0 т.п.н, сорта Южный. Выявлены достоверные различия между образцами сорта
Магниф-105 по количеству фрагментов размером 8,8, 6,0, 4,0, 3,0 и. 2,0 — 1,7 т.п.н.; и между образцами сорта Карат, фрагменты
8,8, 7,8, 6,0 и 2,0-1,7 т,п,н. Таким образом рДНК гомеостатичных сортов (Южный, Донецкий-4) не претерпевает изменений под
5 воздействием неблагоприятных почвенных условий, в то время как у негомеостатичных сортов (Карат, Магниф-105) зафиксированы изменения количества некоторых фрагментов рДНК, 10 Формула изобретения
Способ определения гомеостатичности форм ярового ячменя, предусматривающий выращивание растений до молочно-восковой спелости зерен, выделение и коли15 чественный анализ биохимического компонента, о т л и ч а ю щ и и с;я тем, что, с целью повышения точности определения, растения выращивают в контрастных почвенных условиях, а выделению и анализу
20 подвергают тотальную ДНК из зерен, путем обработки ее рестриктазой, блот-гибридизации с зондом рДНК, сканирования радиоавтографов на денситометре и определения размеров фрагментов ДНК образцов, при
25 этом форму считают гомеостатичной в случае отсутствия достоверных различий между размерами фрагментов у растений, выращенных в контрастных условиях, Пло а ь полос агментов P НК, 1664846
Продолжение таблицы
* Различия достоверны (P = 0,95).
Составитель Е.Кузнецова
Техред М,Моргентал Корректор M.Êó÷åðÿâàÿ
Редактор Н.Рогулич
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Заказ 2366 Тираж 364 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
