Способ диагностики атопической бронхиальной астмы

 

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в крови дополнительно определяют содержание кортизола или тиреоидстимулирующего гормона. Диагностику заболевания проводят по системе расположения точек этих показателей в системе координат. Способ позволяет отдифференцировать атоническую бронхиальную астму от неспецифических заболеваний легких .

СО!ОЗ CORI:. 1 СКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)s G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ KOMVII ET

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4314599/14 (22) 08.10.87 (46) 07,09.91. Бюл. N. 33 (71) Институт клинической иммунологии CQ

АМН СССР (72) С,Ю.Черкашин, З.Я.Гиэатулин и И,H.Нагорная (53) 616-0.89.9(088.8) (56) Чучалин С. Н, и др. Состояние клеточных мембран лимфоцитов у больных бронхиальной астмой. — Иммунология, 1983, М 4, с, 84-87. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ

Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для диагностики атопической (неинфекцион но-аллергической) бронхиальной астмы, не осложненной бронхолегочной инфекцией, и инфекционно-зависимых неспецифических бронхолегочных заболеваний, включающий хронический неаллергический бронхит.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет дифференциальной диагностики от неспецифических заболеваний.

Способ осуществляется следующим образом.

Больных с бронхоспатическим синдромом в анамнезе обследуют в период клинической ремиссии. Забирают 2-3 мл венозной крови в пробирку с антикоагулянтом и 0,3 мл в сухую пробирку для получения сыворотки. Из крови выделяют мононуклеарные клетки в градиенте плотности и отмывают общепринятым способом. Готовят

„„ Ц „„1675728 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в крови дополнительно определяют содержание кортизола или тиреоидстимулирующего гормона. Диагностику заболевания проводят по системе расположения точек этих показателей в системе координат. Способ позволяет отдифференцировать атопическую бронхиальную астму от неспецифических заболеваний легких, суспенэию клеток в среде 199 с концентрацией (10-12) 10 кл/мл, окрашивают(конечная концентрация красителя 25 мкм); перемешивают и экспонируют при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем каплю суспензии наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, сверху наносят каплю иммерсионного масла и помещают под объектив микроскопа, 4

Измерение интенсивности флуоресценции (Л красителя в лимфоцитах проводят на люми- ч несцентном микроскопе (например. серии ) цц,)

ЛЮМАМ) с фотометрической насадкой. (© . Максимум спектра возбуждения флуоресценции а лимфоцитах 400 — 420 нм, флуорес- 1 ценции — 520-540 нм. Измеряют интенсивность флуоресценции 50 — 100 лимфоцитов, рассчитывают среднюю величину свечения для данного больного.

В сыворотке крови больных параллельно определяют концентрацию кортизола или тиреоидстимулированного гормона или оба вместе радиоиммунным методом.

1675728

Составитель fl,ÑTåáàåaà

Техред M,Ìîðãeíòàë Корректор М,Максимишинец

"едактор Л.Волкова.Заказ 2996 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина. 101

В системе координа откладывают величины измеренных параметров, наносят точку пересечения на плоскость, Если эта точка лежит ниже заранее обозначенной раницы форм бронхоспастического синдрома, то диагностируют атопическую бронхиальную астму, а если точка лежит выше границы, то — неспецифическое заболевание.

Границу разделе ия форм бронхоспастического синдрома в указанной системе координат строят перед началом применения способа и используют во всей посг едующей диагностике при неизменном режиме работы приборов, Пример 1. Мононуклеарные клетки выделяют из гепаринизированной (10 ед,/мл) венозной крови больно о центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина при 400 g в течение 40 мин, затем отмывают трижды в физиологическом растворе с фосфатным буфером (рН 7,4) и один раз в среде 199 при

200 g по 5-7 мин, Клетки ресуспендируют в среде 199 до нужной концентрации. В стеклянной пробирке к 0,1 мл суспензии добавляют микрошприцом 1 мкл 2,5 м1 1 раствора красителя в диметилформамиде.

Измерение интенсивности его флуоресценции в лимфоцитах проводят на люминесцентном микроскопе. Освещение обьекта осуществляют сверху через опэк-иллюминатор и объектив.

В качестве стандарта л оминесценции используют эталонную флуоресцирующую пластинку из уранового стекла ЖС 19 толщиной 0,03 мм, входящую в комплект насадки. Эталонную пластинку ставят под объектив.

В сыворотке крови концентрация кортиЭола или тиреоидстимулирующего гормона определяют радиоиммунным методом. С помощью калиброво ной кривой, построенной на основании радиоактивности стандартов, рассчитывают значения концентрации гормонов в исследуемых пробах.

Для кортизола граница проходит через ось ординат в точке, равной 25 мВ, и под углом

11 к горизонтальной оси, для тиреоидсти5 мулирующего гормона — в точке, равной

41 мВ, под углом З, Клинический диагноз: бронхиальная астма инфекционного генеза 1 стадии легкого течения, фаза ремиссии, сенсибилизация к

10 аллергену домашней пыли.

Пример 2. Больной, 22 г, жалобы на приступы удушья с затрудненным выдохом, кашель с небольшим количеством трудноот- . деляемой мокроты. Более 2 г, клинико-анам15 нестические данные не позволяли уточнить диагноз. При исследовании функции внешнего дыхания выявлена положительная проба с бронхолитиком.

При измерении свечение красителя в

20 лимфоцитах равно 61,4 мВ, концентрация кортизола в сыворотке 540 нМ/л, гормона i,6 мМЕ/л, Точки пересечения этих координат на плоскостях для соответствующих гормонов расположены выше принятых линий

25 деления, следовательно, у больного предполагаюг наличие неспецифического заболевания.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявить хроническую бронхиаль30 ную инфекцию у больного атопического бронхиальной астмой, что существенно влияет на дальнейшую тактику лечения, Формула изобретения

35 Способ диагностики атопической бронхиальной астмы путем флуоресцентного исследования лимфоцитов крови, окрашенных

3-метоксибензатроном, 0; л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности

40 способа, в крови дополнительно определяют содержание кортизола или тиреоидстимулирующего гормона и при значениях кортизола 500 1,7 нМ/л или тиреоидстимулирующего гормона 2,5+ 0,15 мМЕ/л диаг45 носцируют заболевание,