Штамм гриба реniсilliuм canescens продуцент @ - фруктофуранозидазы

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению нового штамма-продуцента /3-фруктофуранозидазы. используемой в пищевой промышленности и сельском хозяйстве . Цель изобретения - получение штамма /3-фруктофуранозидазы с более высокой активностью . Штамм Penicillium canescens ВКПМ F-418 получен путем обработки исходного штамма ультрафиолетом, депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика. При глубинном культивировании на среде, содержащей соевую муку и минеральные соли, штамм продуцирует/5-фруктофуранозидазу с активностью 80 ед/мл (72 ч). Активность очищенного фермента 240 ед/мл. Помимо /3-фруктофуранозидазы продуцент синтезирует/3-галактозидазу 20ед./мл бг-галактозидазу - 3.5 ед./мл. ксиланазу - 5 ед./мл. (Л С

СО>ОЗ СОВЕ TСКИХ

СОЦИА 1 ИСТ ИЧ Е С К ИХ

Р Г .> IУ БЛИК

Is11s С 12 М 9/26, 9/14

I ССУЛАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

II0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРБIТИЯM

flPVI ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ6СТВУ

М (21) 4763459/13 (22) 28.11.89 (46) 07.01.92. Бюл. N. 1 (71) Институт биохимии растений АН ГССР и Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного (72) Э.Т.Ломкаци, А.К.Церетели. Т.И.Билай.

А.T. Ø êîë üíûé, M.М. Гомартели. Г.И. Квеситадэе и М,Д.Джобава (53) 577,15 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1221900. кл. С 12 N 9/26, 1984.

Алексанян Е.Р, Прикладная биохимия и микробиология. 1986. т. XXII. вып. 2. с. 163176. (54) ШТАММ ГРИБА PENICILLIUM

CANES C EN S — П РОДУ ЦЕ Н Т/3 -Ф РУКТОФУРАНОЗ ИДАЗ Ы

Изобретение относится к ферментной промышленности, в частности к получению нового штамма, продуцента фермента/3фруктофуранозидаэы. используемой в пищевой промышленности и сельском хозяйстве.

Цель изобретения — получение штамма с более высокой активно,";..>aj -фруктофура>.>Оэидазы.

Для получения высокоактивного штамма был использован штамм Penicillium

canescens Sopp. 20171 (с активностью 7.0 ед/мл), который обработан ультрафиолетовыми лучами в дозе 200 Дж/м .

Штамм депонирован в Центральном му3ее пpомышленчыx микрооpãàниэмов

"ВНИИгенетика". коллекционный номер

ВКПМ F-418.

„„Я2„„1703689 Al (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению нового штамма-продуцента

/З-фруктофуранозидазы, используемой в пищевой промышленности и сельском хозяйстве. Цель изобретения — получение штамма

Д-фруктофуранозидазы с более высокой активностью. Штамм Penicillium canescens

ВКПМ F-418 получен путем обработки исходного штамма ультрафиолетом. депонирован в Центральном музее промыwëåH÷ûх микроорганизмов "ВНИИгенетика". При глубинном культивировании на среде, содержащей соевую муку и минеральные соли, штамм продуцирует р -ф рук тофура н оз идазу с активностью 80 ед/мл (72 ч). Активность очищенного фермента 240 ед/мл. Помимо

/>-фруктофураноэидазы продуцент синтезирует/3-галактозидаэу 20 ед./мл г. -галактоэидазу — 3.5 ед./мл, ксиланазу — 5 ед./мл.

Морфологические признаки. Штамм атоксичен, быстрорастущий, характеризуется умеренным спороношением. Образование конидий начинается на один день позже. чем в исходной кул1Гтуре. Конидии

2.2 — 2.5 мкм, яйцевидные. потом шарогидные. шероховатые, в цепочках соединяющиеся в колонке, но потом более или менее растопыренные при старении. Коло> . и на агаризованном сусле. агариэованной среде

Чапека, агаризованной среде с сахарозой пушистые, состоящие из плотного баз;1льного войлочного и рыхлого сплетения воздушного мицелия со слабо выраженной радиальнобороздчатостью с обильным спороношением, превосходящим исход>>ую культуру по урожайности спор на 10-15%.

Колонии с растущим краем 2-3 мм ширины.

1703689

55 белые до бледно-серого цвета, затем при старении дымчато-серые, Конидиеносцы отходят от субс1рата до 350-500 х 3-3,5 мкм или как короткие веточки воздушных спор с разнообразно расположенными растопыренными 1,2-3 мутовчатыми структурами с метулями обычно около 10-20 х 2,5-3 мкм, несущими стеригмы 8 х. 2,3 мкм с четкой конидиеносной шейкой, узкой, но сравнительно короткой.

Культуральные признаки. На агариэованных искусственных средах (сусло-агар, картофельно-глюкоэный агар, картофельный агар) и синтетических агаризованных средах (средах Чапека, Сабура, Ролена-Тома. агариэованной среде с сахарозой) штамм растет хорошо, Линейный рост колоний штамма на агаризованных средах по дням: сусло-агаровой среде 5-й день 35-48 мм; 10-й день — до

85 мм; среда Чапека — 5-й день 30 мм; 10-й день 40 мм; агаризованная среда с лактозой — 5-й день 28-40 мм; 10-й день до 70 мм.

На отрубях в условиях твердо-фазной ферментации штамм растет хорошо.

Отношение к углеродному питанию. Хоpou . усваивает моносахариды: глюкозу, арабинозу, сахароспирты: сорбит, манит, дульцит, иэ дисахаридов: лактозу, сахарозу, мальтозу, а также крахмал и инулин.

Отношение к азотному питанию; усваивает нитратный азот, лучше аммонийный.

Иэ органических источников азота ассимилирует пептон, мочевину, дрожжевой автолизат, кукурузный экстракт.

Отношение к кислороду: облигатный аэроб.

Отношение к температуре: мезофил, оптимальная температура для роста и риосинтетической активности 26 — 27 С.

Отношение к кислотности питательной среды: растет в широких пределах рН от

2,0-9,0.

Для размножения штамма применяли модифицированную среду Чапека с сахароэой следующего состава. : сахароза 3 0;

МН4МОз 0,2; KHgPO< 0,1, MgS04 0,05; KCI

0,05; кукурузный экстракт 0,05, агар 2, исходное рН 5,8-6,0.

Питательной средой для ферментации служит среда следующего состава, : соевая мука 3,0; Ма2НР04 12Н20 15; (NH44S04

0,2; KCI 0,05, Mg S04 0.015, исходное рН 4,14,2.

Проверкой, проведенной в течение четырех лет, установлено, что при хранении в

50 пересевах уровень ферментативной активности Penicillium canescens AM3-85 не снижается, Продуцент образует богатую белком биомассу (до 30% от массы сухой биомассы).

Штамм Penicillium canescens АМЭ-85 поддерживают на агаризованной среде с сахароэой, мас.7: сахароза 3,0; МН4ЫОз

0,2; КН2Р04 0,1; KCI О,1; MgS0< 0,05, кукурузный экстракт 0,05; агар 2. Исходное рН среды 6,0.

Глубинное культивирование гриба проводят на жидкой питательной среде следующего состава, мас.7: соевая мука 3,0;

NagHP04 12Н20 1,5; (МН4)2504 0,2; KCI 0,05;

Mg S04 0,015; исходное рН 4,2.

Культивирование проводят в колбах емкостью 750 мл на термостатированной качалке, делающей 220 об/мин (уровень аэрации 1,4 Ог/лч) при 30 С в течение 72 ч.

Объем питательной среды в колбах составляет 100 мл. Засев питательной ср A производят 2 -ной суспензией конидий поверхностной культуры гриба, выращенной в пробирках на скошенном сахароэном агаре в течение 12 дней при 28 С.

Биомассу отделяют фильтрованием и в фильтрате определяют активность Р-фруктофуранозидазы по методу Самоджи-Нельсон. Реакционную смесь, состоящую из

0,7 мл субстрата, 0,5 мл 0,2 М ацетатного буфера рН 4,5, 0,3 мл раствора фермента, инкубируют при 50 С в течение 15 мин, затем добавляют 1 мл реактива Самоджи и кипятят на водяной бане в течение 20 мин.

После охлаждения добавляют 1 мл реактива

Нельсона, доводят водой до 5 мл и фотометрируют при 590 нм. Активность/3-фруктофураноэидазы составляет 80 ед./мл (известной

57 ед./мл), В фильтрате кроме активности /3-фруктофуранозидазы содержатся а -галактоэидаза (3,5 ед./мл), / -галактозидаза (20 ед./мл) и ксиланаза (5 ед./мл).

Полученный фильтрат подвергают разделению и выделяют -фруктофуранозидазу как отдельную фракцию, в которой определяют активность.

Активность очищенной /3-фруктофуранозидазы составляет 240 ед./мл.

Формула изобретения

Штамм гриба Penlcllllum canescens

В КП M F-418 — п родуцент /3 -фруктофура нозидазы.