Способ определения нарушений обмена фосфолипидов при заболеваниях легких у детей

 

Изобретение Относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано в клинической практике для контроля за состоянием липидного комплекса конденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей. Целью изобретения является упрощение способа и уменьшение его инвазивности. Способ состоит в отборе конденсата выдыхаемого воздуха с последующей экстракцией липидов в конденсате выдыхаемого воздуха из подкисленных растворов хлороформа. После метилирования определяют спектр жирных кислот липидов и уровень свободного холестерина из одной биологической пробы . В случае снижения содержания жирных кислот С 18:2 и С 20:4, а также содержания свободного холестерина в липидном экстракте ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена фосфолипидов. Способ значительно проще известного и отличается атравматичностью. 1 табл. Ј

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (39) (11) (я)5 G 01 N 33/50 Р0 QL.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Фр „", ь (21) 4785108/14 (22) 22.01.90 (46) 15.04.92 Бюл. N. 14 (7.1) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) В.М,Сидельников, E.Â.Ðûáàêîâà, Т.С.Брюзгина, 3.Я,Кравченко и Л.И.Скрипка (53) 612,015 (088.8) (56) Педиатрия, 1976, N 11; с. 27-30. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ФОСФОЛИПИДОВ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЛЕГКИХ У ДЕТЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано в клинической практике для контроля за состоянием липидного комплекса

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано для контроля за состоянием липидного комплекса конденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей.

Цель изобретения — упрощение и уменьшение его инвазивности.

Пример 1. Больной С., 8 лет, диагноз: бронхиальная астма, смешанная форма, средней тяжести, период нестойкой ремиссии. С 2-месячного возраста проявления экссудативного диатеза на молочные смеси, в настоящее время. эпизодически проявления пищевой аллергии по типу крапивницы, В 4-летнем возрасте появились впервые приступы удушья после перенесенного бронхита, B дальнейшем приступы провоконденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей. Целью изобретения является прощейие способа и уменьшение его инвазивности. Способ состоит в отборе конденсата выдыхаемого воздуха с последующей экстракцией липидов в конденсате выдыхаемого воздуха из подкисленных растворов хлороформа. После метилирования определяют спектр жирных кислот липидов и уровень свободного холестерина из одной биологической пробы. В случае снижения содержания жирных кислот. С 18:2 и С 20:4, а также содержания свободного холестерина в липидном экстракте ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена фосфолипидов.

Способ значительно проще известного и отличается атравматичностью. 1 табл. цировались острой респираторной инфекцией, резкими запахами, контактом с собакой. При постановке скарификационных аллергопроб положительные результаты с домашней пылью (++), шерстью собаки (+++), яйцом курицы (++).

2 мл конденсата выдыхаемого воздуха поместили в.пробирку с притертой пробкой объемом 10 мл, подкислили 2 — 3 каплями соляной кислоты концентрацией в соотношении 1:1, затем экстрагировали 5 мл хлороформа в течение 1 мин осторожно встряхивая. Нижний хлороформный слой отделили с помощью пипетки Пастера после

30 мин выдержки на холоде(при 40 С). Для полноты реакции пробу экстрагировали 3 раза при тех же условиях. Объединенные хлороформные экстракты концентрировали

1727070

10 отделения, 15

25

55 фосфолипидов. упариванием воздуха в токе азота при 4550 C на водяной бане, Сухой осадок подвергли метилированию по известному методу для проведения газохроматографического анализа.

Анализ метиловых эфиров проводили на газовом хроматографе серии Цвет-500 с пламенно-ионизационным детектором в изотермическом режиме.

Условия анализа спектра ЖК липидов: стеклянная колонка размером 2 м и диаметром 3 мм, заполненная 5 ПЭГС на хроматоне N-AW-HMDS (зернение 0,125—

0,160 мм), температура, С: колонки 186; испарителя 270, расход, мл/мин: газа-носителя (азот) 35; водорода 35; воздуха 200, скорость диаграммной ленты — 240 мм/ч, шкала чувствительности — 10 А, обьем т ., пробы 1 — 2 мкл, продолжительность анализа 15 мин.

Количественную оценку проводили по методу нормировки площадей и определили доли кислот в %. Погрешность определения

w100k.

Условия анализа свободного холестерина (СХС): стеклянная колонка размером

1 м и диаметром 3 мм, заполнения 57, $Е-30 на хроматоне Й-AW-HMDS (зернение 6,125 — 0,160 мм), температура, С: колонки 270; испарителя 290, расход, мл/мин: газа-носителя (азот) 45; воздуха 200; скорость диаграммной ленты 240 мм/ч, шкала чувствительности 10 А, обьем,, пробы

3 — 5 мкл, продолжительность анализа 5 мин.

Количественную оценку содержания

CXC осуществляли методом калибровки.

Индентификацию и количественный расчет проводили с помощью стандартного раствора холестерина с концентрацией

1 мг/мл, чувствительность определения

0,2 мкг/мкл.

После расшифровки хроматограмм получили. ЖК : С 16:0-39;4; С 18:0-21,6; С

18:Π— 31,1; С 18:2 — 7,9; С 20:4 — следы, СХС следы, Пример 2, Больная М., 5 лет, диагноз: астматический бронхит, ремиссия; рецидивирующая крапивница. У ребенка проявления экссудативного диатеза с б-месячного возраста. После приема цитрусовых отек

Квинке и проявления крапивницы в 2 года.

С 4 лет проявления затрудненного дыхания на резкие запахи (впервые на запах ацетона), Затрудненное дыхание связано с цветением трав. Диагноз установлен впервые.

Исследования по предлагаемому способу проводили как в примере 1.

После расшифровки хроматограмм получили. ЖК $: С 16:0 — 49,7; С 18;0-23,3; С

18:1 — 23,3, С 18:2-0,5; С 20:4 — следы, СХС следы.

Пример 3. Группа здоровых детей (5 чел;) в возрасте 5-7 лет в анамнезе которых отсутствовала бронхиальная астма, была набрана из травматологического

Условия. анализа спектра ЖК липидов и

СХС по примеру 1.

После расшифровки хроматограмм получили. ЖК : С 16:0 — 35,3; С 18:0 — 12,3; С

18:1 — 23,8; С 18;2 — 18,6; С 20:4 — 2, СХС 0,2 — 0,5 мг/мл.

В таблице представлены результаты реализации предлагаемого способа на группах детей с заболеваниями легких и контрольной группе здоровых детей.

Преимущества предлагаемого способа; упрощение стадии экстракции общих липидов (исключение этапа выделения фосфолипидов) позволяет сократить. время на этапе подготовки проб к газохроматографическому анализу, что обеспечивает экспрессность способа; атравматичность способа позволяет проводить многократные отборы конденсата у детей для осуществления контроля в процессе лечения; способ исключает трудоемкий метод тонкослойной хроматографии, может быть использован и для выявления лиц с повышенным риском развития бронхолегочной патологии, способ прост и легко выполним средним медицинским персоналом.

Формула изобретения

Способ определения нарушений обмена фосфолипидов при заболеваниях легких у детей, включающий отбор биологической жидкости, получение экстракта общих липидов и анализ жирокислотного состава фосфолипидов, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и уменьшения

его инвазивности, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, в экстракте дополнительно определяют содержание свободного холестерина и при снижении содержания жирных кислот С 18:2 и С 20:4, а также содержания холестерина ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена

Жирокислотный спектр липидов и содержание холестерина в липидных экстрактах конденсата выдыхаемого воздуха у детей

+Достоверные отличия от контрольной группы при р < 0,01, Составитель Н. Гуляева

Редактор Л. Пчолинская Техред М.Моргентал Корректор Н, Король

Заказ 1276 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101