Способ размножения растений in viтrо

 

Использование: сельское хозяйство биотехнология для ускоренного размножения посадочного материала. Сущность изобретения: размножение растений в культуре ткани осуществляют путем культивирования эксплантов на агармаованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов, после чего от них отделяют листья, помещают их в культивационный сосуд с жидкой питательной средой и культивируют до получения адвентивных почек при постоянном перемешивании среды. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4783519/13 . (22) 18.01.90 (46) 07.06.92. Бюл. N- 21 (71) Научно-исследовательский зональный институт садоводства нечерноземной полосы (72) В. А. Высоцкий и И. А. Шершень (53) 581.143.6(088.8) (56) Earle Е. D, Langhans R. W. Carnatlon

propagatIon from shoot tips cultured 1п Пдц!б

Medium — Hort. Science, 1975, vol. 10, Nb, Sect. 1, р. 608-610.

Высоцкий В. А., Попов Ю. Г., Трушечкин

В. Г. Способ размножения древесных растений. Авторское свидетельство СССР N.

626728, кл. А 01 6 7/00, 1978.

Попов Ю. Г. Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методом культуры меристематических верхушек- М„ . Методические указания, 1979.

Изобретение относится к области сельского хозяйства. а именно к области культуры изолированных тканей и органов, и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала.

Известны способы размножения растений в жидкой питательной среде в состоянии вращения на аппаратах роллерного типа. При этом, в качестве вторичных зксплантов используют развившиеся из пазушных меристем побеги или почки.

Однако данные способы не позволяют увеличить коэффициент размножения растений до требуемых величин.

Наиболее близким к предлагаемому является способ размножения плодовых и ягодных культур, согласно которому проводят поверхностную стерилизацию исходно„„SU „„1738169 А1 (54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ

IN VITRO (57) Использование: сельское хозяйство, биотехнология для ускоренного размножения посадочнего матерэала. Сущность изобретения: размножение растений в культуре ткани осуществляют. путем культивирования эксплантов на агаризованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов. после чего от них отделяют листья, помещают их в культивационный сосуд с жидкой питательной средой и культивируют до получения адвентивных почек при постоянном перемешивании среды. 2 табл. го материала, изоляцию зксплантов, культивирование их на периодически обновляемых искусственных питательных средах до образования конгломератов почек и побегов, разделение последних на субъединицы. последующее субкультивирование и укоренение и адаптация к нестерильным условиям. Однако, в .качестве вторичных эксплантов в этом способе используют только развившиеся побеги и почки. Многочисленные крупные листья при пересадках отсекают и выбрасывают, что приводит к непроизводительным потерям посадочного материала, Целью изобретения является увеличение коэффициента размножения растений, Предлагаемый способ позволяет увеличить коэффициент размножения в 6-7 раз.

1738169

30

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что после развития конгломератов почек и побегов, производят отсечение развившихся листьев, которые помещают в культивационные сосуды с непрерывно перемещающейся жидкой питательной средой и культивируют до образования адвентивных почек или побегов. Последние могут быть использованы для дальнейшего культивирования или непосредственного укоренения.

Изобретение осуществляется следующим образом, Пример 1. Развившиеся в процессе клонального микрораэмножения листья нарцисса отсекают и помещают в культуральные сосуды с жидкой питательной средой, В качестве питательной среды используют среду, предназначенную для размножения нарцисса следующего состава, мгlл: МНоИОз f650, КИОз 1900. СаС!2

2Н20 440; MgS04 7Н20 370, КН2Р04 170, НзВОз 6,2, MnSO4 4Н20 22,3, ZnS04 7Н20

8,6, KI 0,83, NaMo04 2Hz00,25, CuS04 5Hz0

0,025, СоС!2 6HzO 0,025; тиамин 0,5, пиридоксин 0,5, никотиновая кислота 0,5. аскорбиновая кислота 1.0, сахароза 30000, 6-бензиламинопурин 10,0, а-нафтилуксусная кислота 1,0; FeSO4 55,6, ЕДТА йа2 74,6.

Поскольку питательная среда использовалась в жидком виде, концентрацию хелата железа для предотвращения развития хлороза увеличивали в два раза. Сосуды с эксплантами, для обеспечения непрерывного омывания листьев питательной средой, устанавливали на аппарат роллерного типа, где культивировали 1,5-2 месяца. Результаты по индукции адвентивных образований на листьях нарцисса приведены а табл. 1.

Сравнение между агаризованной аеательной средой, жидкой средой и условиями культивирования (стационарные и обеспечивающие непрерывное омывание листьев) показывает статистически достоверную разницу в частоте индукции адвентивных образований, причем наибольший процент

20 регенерируется при использовании жидкой питательной среды в состоянии вращения.

Пример 2. Развившиеся в процессе размножения In vitro листья земляники (фаза пролиферации) отрезают и помещают на питательные среды разных видов(жидкая и агаризованная). Появление адвентивных образований фиксировали спустя месяц после культивирования, которое осуществляли как в стационарных условиях, так и на аппарате роллерного типа. В качестве питательной среды использовали среду, предназначенную для размножения земляники следующего состава, мг/л: ЙН4ЙОз 1650, КМОз 1900, CaCb 2Н20 440, MgS04 7H20

370, KHzP04 170, НЗВОз 6,2, MnS04 4Н20

22,3, ZnS04. 7Н20 8,6, К1 0,83, NaMo04 2Н20

0,25, FeS04 27,8. ЕДТА Nag 37,3, тиамин 0.5, пиридоксин 0,5, никотиновая кислота 0,5, аскорбиновая кислота 1,0, сахароза 30000, 6-бензиламинопурин 1,0.

Результаты по индукции адвентивных почек на листьях земляники приведены в табл. 2..

Как видно из полученных результатов, оптимальным для образования адвентивных почек является вариант с использованием жидкой питательной среды в состоянии вращения. Коэффициент размножения в этом варианте, по сравнению с прототипом, увеличивался у нарцисса в 7,2 раза, у земляники в 6,8 раз.

Формула изобретения

Способ размножения растений in vitro, включающий изоляцию эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов, разделение их на отдельные субъединицы и последующее культивирование их на питательной среде до образования растений-регенерантов, о т л ич а ю щи и с я тем, что, с целью увеличения коэффициента размножения, после образования конгломерата почек и побегов от них отделяют листья и помещают их в культивационный сосуд с непрерывно перемешивающейся жидкой питательной средой и культивируют . до образования адвентивных почек.

1738169

Таблица1

Твблица2

F 7,2 *

Редактор В.Бугренкова

Заказ 1944 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 среды

Евращ. 20,74* *

Составитель С. Куваева

Техред M.Моргентал Корректор Н.Король