Способ микроклонального размножения безвирусного картофеля

 

Использование: сельское хозяйство, картофелеводство, биотехнология, семеноводство . Сущность изобретения: безвирусный картофель размножают путем выращивания на стерилизованной прокаливанием почвенной смеси при 10 - 15 клк и обеспечении водного режима поливом или подтоплением субстрата дистиллированной водой растений, полученных из меристем, после чего проводят их черенкование и укоренение .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ (21).4819567/13 (22) 28.02.90 (46) 07.06.92. Бюл. 1Ф 21 (71) Калининградский государственный уни- . верситет (72) А. С. Гуревич (53) 57.086.83(088.8) (56) Бутенко P. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. — М,: Наука. 1984. с. 272.

Авторское свидетельство СССР М

1015868.

Трофимец Л. H.. Остапенко Д. П„бойко

В. B. и др. Оздоровление и ускоренное размножение семенного картофеля. — М.: Издво ВАСХНИЛ, 1905,35 с.

Изобретение относится к области биотехнологии, s частности к области микроклонального размножения растений.

В практике микроклонального размножения для культивации растений используют стерильные искусственные. питательные среды, что делает технологию трудоемкой, дорогостоящей и материалоемкой. Доращивание растений производят в теплицах при искусственном освещении, Наиболее близким способом тиражирования безвирусного картофеля является технология, заключающаяся в укоренении микрочеренков в приборочной культуре на искусственной питательной среде, состоящей из элементов минерального питания, пластических веществ и регуляторов роста.

Однако для приготовления сред используются химически чистые. дорогостоящие реактивы,специальноеоборудование. Культивирование мериклонов проводится в режиме жесткой стерильности, для чего

„„SU „„1738170A1 (54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ БЕЗВИРУСНОГО КАРТОФЕЛЯ (57) Использование: сельское хозяйство,. картофелеводство, биотехнология, семеноводство. Сущность изобретения: безвирусный картофель размножают путем выращивания на стерилизованной прокаливанием почвенной смеси при 10 — 15 клк и обеспечении водного режима поливом или подтоплением субстрата дистиллированной водой растений, полученных из меристем. после чего проводят их черенкование и укоренение.! используется автоклавирование сред. Это делает технологию трудоемкой, материало- ф емкой и дорогостоящей.

Цель изобретения — упрощение технологии микроклонирования безвирусного картофеля, снижение ее материало- и трудоемкости. (лЭ

Способ осуществляется следующим об-. ф) разом. реей

Искусственная питательная среда заменяется продезинфицированной термическим путем почвенной смесью, употребляемой для горшечных культур. Для полного уничтожения бактериальных и вирусных частиц почву выдерживают 2ч в термостате при 200ОС.

Обеспечение растений водой достигается увлажнением субстрата до йолной влагоемко сти при трансплантации черенков в пробирки, а также дополнительным поливом на 6 — 8-й день культивирования. Дополнительного полива можно избежать, положив на дно пробирки, под субстрат, ватный тампон и, 1738170

10

40 ивают 30- 40 мин. заполнив этот объем водой, что создаст достаточный для культивации мериклона запас. Водоснабжение мериклона обеспечивается поливом дистиллированной водой. Отсутствие в среде пластических веществ делает необходимым усиление фотосинтетической деятельности мериклонов.

В связи с этим освещение в культивационном сооружении увеличивают до 10 — 15 клк, Освещение варьирует, так как мериклоны по разному удалены от источника света.

Через 18 — 23 дня мериклон формирует 5 междуузлий и заполняет весь объем пробирки. Заготовку черенков проводят, не извлекая маточного растения из пробирки, нарезая их скальпелем для микрохирургии глаза. Пенек с корневой системой оставляют в пробирке для получения второй генерации черенков. С одного маточного растения можно получить 3 — 4 генерации черенков.

Таким образом в сравнении с известным, предложенный способ исключает применение реактивов, в том числе дефицитных, используемых для приготовления искусственных питательных сред, в частности: агар, сахароза, ряд минеральных солей, витаминов, гормональных регуляторов роста.

В связи с этим отпадает необходимость в оборудовании для растворения. внесения реактивов и стерилизации сред:стеклянная посуда, магнитные мешалки, нагреватели, дозаторы, рН-метр, автоклав и т. д.

Приготовление почвенной смеси требует значительно меньших трудозатрат, чем приготовление искусственных питательных сред.

Все зто вместе взятое снижает себестоимость единицы продукции с 0,8- 1,3 руб до

20 — 25 коп, П р и и е р 1. Для культивации мериклонов готовят почвенную смесь, состоящую иэ деревной почвы, песка и торфа в соотношении 2:1:1.

Пробирки, ватные пробки, тампоны, и почвенную смесь стерилизуют в термостате в течение 2 ч при 200 С. В стерильном боксе на дно пробирки помещают ватный тампон, объемом 1 5 — 1,8 см, заливают этот объем э .свежим дисциллятором и доливают еще 2,2

-2,5 мл дистиллированной воды, Затем насыпают 3,5 — 4 г стерильного субстрата.(2,8

-3 см"). Закрывают ватной пробкой и настаМатеринские растения сорта "Адрвтта" нарезают на черенки посередине междуузлия. Нижний узел оставляют на материнском растении, доливают 1,7 - 2,3 мл дистиллята и материнские растения оставляют для поворотной генерации черенков.

Черенки длинным пинцетом помещают в субстрат так, чтобы узел находился на глубине 3-5 мм, пробирку закрывают пробкой.

Пробирки с черенками устанавливают на световые стеллажи с комбинированным освещением: вертикальный ряд люминисцентных ламп и расположенную сверхулампы MIX-Г. Освещенность 15 клк, освещение круглосуточное. Температура воздуха в период вегетации 18- 20 С, влажность 50- 60 .

$. Уко реня емость черенков составилэ 84, Пример 2; Почвенную смесь готовят из перегнойной земли, песка и торфа в соотношении 2:1:1. Стерилизацию проводят описанным выше способом. В пробирки насыпают 3,4 — 4 r сухого субстрата, заливают

2,2 — 2,5. мл дистиллированной воды, закрывают пробкой и настаивают 30 — 40 мин.

Использовали мериклон сорта "Невский". Технология черенкованияи выращивания растений аналогична описанной выше, освещенность 10 кяк. Укореняемость черенков составила 90 .

Пример 3. Стерильная почвенная смесь применялась также в широкодонной посуде. в частности, в трехлитровых склянках. В стерильную посуду насыпают субстрат — окультуренный чернозем с песком (2:1) высотой до 5- 7 см, поливают из расчета 0,65 — 0,75 мл дистиллята нэ 1 г субстрата.Черенки сорта "Изора" высаживают по схеме 2.5 х 2,5 концентрическими окружностями. Отверстие. склянки закрывают ватно-марлевым фильтром. Культивируют в тех же условиях, за исключением освещенности 12 клк, укореняемость черенков повышается до 95 %, что обуславливается улучшением условий аэрации субстрата.

Имуноферментный анализ показывает сохранение безвирусности мериклонов при

on исэн ных способах тиражирования.

Время формирования мериклонами пяти междоузлий составляет 18 — 20 дней, что соответствует прототипу.

Использование предлагаемого способа тиражирования безвирусного картофеля обеспечивает Ао сравнению с известными способами следующие преимущества: значительно снижается материалоемкость технологии; уменьшаются трудозатраты; снижается себестоимость продукции; упрощается технология..

Формула изобретения

Способ микроклонального размножения безвирусного картофеля, включающий выращивание на стерильном субстрате полученных из меристем растений, их черенко1738170

Составитель

Техред M.Ìîðãåíòàë

Корректор Н.Король

Редактор В,бугренкова

Заказ Ф Тираж . Подписное .

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 вание и укоренение полученных черенков, отличающийся тем, что, с целью упрощения технологии микроклонирования, снижения ее материало- и трудоемкость, в качестве субстрата используют стерилизованную прокаливанием при

200 С в течение 2 ч почвенную смесь, выращивание осуществляется при освещенности 10 — t5 клк при обеспечении необходимого водного режима поливом или

5 подтоплением субстрата дистиллированной водой,