Штамм бактерий аgrовастеriuм rаdiовастеr для получения удобрения под овощные культуры

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новый штамм бактерий для получения удобрения под овощные культуры. Целью изобретения является создание нового штамма бактерий Agrobacterlum radiobacter для получения удобрения под овощные культуры. Штамм позволяет увеличить величину надземной массы рассады овощных культур на 5-15% по сравнению с известными штаммами, 7 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4665197/13 (22} 23.03.89 (46) 23.08.92. Бюл. N 31 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) В,Ф. Павлова, Г,С, Муромцев и О.И. Гетманская (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1266027, кл. А 01 N 63/00, 1984.

Авторское свидетельство СССР

N" 1359272, кл, С 05 F 11/08, 1985.

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой штамм бактерий; предназначенный для повышения урожая овощных культур и улучшения его- качества, Известны . штаммы А2отоЬастег

chroococcum ВНИИСМ-20 и ЦМПМ В-3344, стимулирующие рост овощных культур., бднако прибавка урожая в случае их использо.вания недостаточно высока.

Цель изобретения — штамм, способный к более значительному повышению урожая овощных культур и улучшению его качества

В. качестве такого штамма предлагается штамм Agrobacterium radiobacier 10 из коллекции ВНИИСХМ, : Штамм имеет следующие морфологокультуралъную и физиолого-биохимическую характеристики.

Морфолого-культуральные призйаки;

Бактерии представляют собой палочки размером 0,8х(1,5-3,0) мкм, подвижные с

ЬЦ, 1756318 А1 (Й)л С 05 F 11/08, С 12 Й 1/20. -. -: --::.=.:.": 2 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ АОРТОHACTERIUM

RADIOBACTER ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ УДОБРЕНИЯ ПОД ОВОЩНЫЕ КУЛЬТУРЬ1 (57) Изобретение отйосится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новый штамм бактерий для riîë ÷åíèÿ удобренйя" под о>вощнь1е культурь . Целью изобретения является :создание нового штамма бактерий АдгоЬастегШв radiobicter для получения- удобрения -под овощные культуры. Штамм позволяет увеличить вели-,. чину надземной ма ссы" р а с сады овощных культур на 5 — 15 j по сравнению с йзвестны- ми штаммами. 7 табл . " с

Ф.а перитрихиальными жгутиками, неСпорообразующие, Колонии на МПА размером 2 — 5 мм, бесцветные, круглые, слизистые, гладкие, блестящие, с ровными краями. На кар- . тофельном агаре колонии размером 2 — 4 мм, ® полупрозрачные, круглые, несколько при- © поднятые в центре, слизистые, гладкие, бле- р стящие. На картофельном косяке — штрих коричйевый, слабо блестящий; рост средний, Н8 мясо-пептонном бульоне через 72 ч при 28 С образует муть с пленкой на поверхности; " " "": . :, -.,: д

На средах с углеводами (сахароза, глюкоза) образует обильйые полисахаридные слизи, -Физиолого-биохимическйе признаки, Аэроб, Оптимум темпера уры 25-30 С, оптимум рН 5,8 — 9,0, - Усваивает глюкозу, сахарозу, фруктозу, арабинозу, галактозу, маннит, салицин, глицерол, маннитол, лймоннокислый натрий, 1756318

Использует минеральные (нитраты и соли аммония) и органические(аминокислоты)

" источники азота, На безазотистай среде Виноградского фйксирует азот атмосферы, Крахмал и казеин не гидролизует. Желатину не разжижает. На молоке через 7 сут после термостатирования при 28"С образуется зона просветлеййя, через 21 сут молоко становится полупрозрачным, буреет и под, щелачивается, Образует ферменты каталазу и оксидазу. Маркерйых признаков штамм не имеет, Признаки штамма устойчивы. Штамм не патогенен для человека и теплокровных животных. Не образует галлы на растениях, Штамм выделен из-под монокультуры пшеницы, выращен.lol1 на Краснодарском черноземе, Идентифицирован по ойределителю Бердже, Хранится на-картофельном агаре и на

МПА при 4 С с пересевом через 3 м"ес и на тех же средах под вазелинавым маслом при

20 С без пересева.

Штамм выращивают на питательной среде следующего состава, мас.%: меласса

1,0;;укуруаный экстракт 1,0; (NHp)>S0< 0,1;

КН2РО 0,05; К2ИРО4 0,05; М ЯО4 0,03; мел 0,1; дистиллированная вада — — остальное, рН 7,6, Препарат для инокуляции семян овощных культур готовят следующим обрйзом.

В полиэтиленовые г1акеты помещают па

300 r гамма-стерильного (доза 25 Мрад) мелкадисперсного торфа, обогащают его

48 мл 80%-ной мелассы; 24 мл 20%-ного кукурузного экстракта, добавляют 60 мл стерильной воды и инокулируют(уколом) жидкой 1-суточной культурой штамма 10, выращенной на среде указаннбгб вьппе состава, Препарат тщательно перемешива,ат и помещают в термастат при 20 С на 7 сут для доращивания, Окончательный титр — не менее 10 млрд. клеток в 1 г препарата.

Способ применения, В условиях закрытого грунта препарат вносят при посеве по 2 г в лунку под семя или перед посадкой рассады, где корневую систему погру>кают на 2-3 с в суспензию торфяного препарата (20 r препарата на 100 мл воды).

В условиях открытого грунта семена смачйвают раствором прилипателя в количестве 2-3% от их массы; на увлажненные семена йаносят йрепарат (600 — 900 г на гектарную норму семян), тщательно перемешивают и высевают в тот же день.

Пример 1. Испытание штамма

Agrobacterium radiobacter 10 (в сравнении с известным ранее штаммом Agrobacterturn

radiobacter В6) проводили в вегетацианнам опыте на верховом хорошо разложившемся известкованном тсрфе, отличавшемся низким содер>канием азота, фосфора и калия, поэтому с помощью минеральных удобре5 ний создан оптимальный для испытуемой культуры (салата) уровень основных питательных элементов, соответствующий: N

43,4; РрО 32,0; К20 130,0 мг/100 r торфа, Семена салата трех сортов "Дерсу", 10 "Крупнокачанный", "Сатрап" инокулировали препаратами, приготовленными на

30 >5

45 штаммах Agrobactertum radiobacter 10 и В6, Контролем служили необработанные семена, Семена высевали в торфяные горшочки размером 5х5 см, Повторность опытов 5кратная. Через 30 сут после посева рассада высаживалась на постоянное место в пленочные теплицы, Плошадь питания растений 25х25 см, Уборку урожая проводили через 2 1ес после посева. Учитывали зеленую массу растений и массу корней.

Результаты представлены в табл. 1, Как видно из табл, 1, предлагаемый штамм обеспечил значительную прибавку ура:-кая зеленой массы салата всех трех сортов (на 47,8-69,7%) по сравнению с неинокулированным контролем, Инокуляция штаммом В6 обеспечила прибавку всего на

8,0-21,7 g,, причем по сортам "Дерсу" и Сатрап" прибавка была статистически недостоверной.

Пример 2, В вегетационном опыте было изучено влияние культуральных >кидкостей штаммов АцгаЬас егшя radlobacter

10 и Azotobacter chroococcum ВНИИСМ-20 и ЦМПМ В-3344 на надземну а массу томата сорта "Русич", огурца сорта "С арприз-66" и салата сорта "ТСХА-117", Через 10 дней после посева сеянца пикировали в торфяные горшочки 10х10 см, наполненные торфяным субстратом, предварительно обмакивая корневую систему растений в культуральные жидкости исследуемых культур с одинаковым титром 10х10 клетокlмл, Опыты

g ставились в четырехкратной повторности.

После 30-дневной вегетации определяли массу надземной части растений.

Полученнь.е данные представлены в таблице 2.

Данные табл. 2 свидетельствуют о преимуществах использования штамма

Agrobacterturn radiobacter 10 по сравнению са штаммами Azotobacter chroococcvm

В НИИСМ-20 и Ц1ЛПМ В-3344 на всех исследованных культурах. Масса растений увеличилась на 15 — 40% па сравнению с контрольным вариантом, Пример 3. В производственных условиях изучена влияние торфяных форм бактериальных удобрений на рассаду томата

1756318 таблица l

Эффективность" инокуляции семян салата разных сортов ет штанмами Agrobacterium radiobact а и

««»ььнвнк» аи«асаа ьь э

5 сорта нРеанто". При посеве семена смачивали водой и обваливали в препарате, а за. тем высевали в грунт. Учет надземной массы проводили через 60 сут.

Данные представлены в табл. 3. 5

Как видно из табл. 3, применение бактериальных удобрений дало значительный прирост надземной массы растений, однако .в случае использования штамма

Agrobacteiium radiobecter 10 он был на 10% 10 выше, -чем при использовании штамма

Azotobacter chroococcum ЦМПМ 8-3344.

Пример 4. Опыт ставился на белокочанной капусте сорта Тайнинская, При обработке семян их замачивали в течение 6 ч 15 в культуральной жидкости штамма 10 в разведении 1:3. При пикировке рассады препарат на основе штамма 10 вносилй в почву из расчета 0,1 r на 1 растение, Опыт ставился в 4 повторностях по 75 растений в каждой. 20

Результаты опыта и редста елены в табл. 4.

Как видно из табл. 4, инокуляция предлагаемым штаммом обеспечила повышение урожая капусты и улучшение его качества..

Пример 5, Перед посевом семян 25 огурца (сорт ТСХА-77) в торфопер«егнойные .горшочки вносили по 1,5 г препарата на штамме 10. Опыт ставился в 4-повторностях по 48 растений в каждой.

Результаты сведены в табл. 5,: 30

Как показывает табл, 5, инокуляция и редлагаемым" щтаммом повысила урожай-! ность огурца и улучшила его качество.

Пример 6; На культуре огурца соиртв

" TCXA-3707 были проведены производствен- 35 ные испытания предлагаемого штамма. Наклюнувшиеся семена пикировали в пленочные горшки, набитые торфом, В опытном варианте в каждый горшочек вносили по 1 г препарата на основе штамма 10 под семя.

Затем рассада была высажена в грунт.

Результаты опыта приведены в табл. 6.

Как видно из табл. 6, инокуляция семян превысила урожай огурца на 2 кг/м (11%).

Было достигнуто значительное увеличение раннего выхода готовой продукции (прибавка урожая за 1-й месяц сбора - - июнь— составила 1;9 кг/м (42%).

Пример 7. На культуре томата сорта нРакета" проводились испытания предлагаемого штамма 10. Опыты ставились в 4-повторностях. Препарат на основе штамма вносился одновременно с высадкой рассады.

Результаты приведены в табл. 7.

Как показывает табл. 7, инокуляция предлагаемым штаьммом обеспечила прибавку урожая томата на 83,2 ц/га (29,7 g,).

Таким образом, предлагаемый штамм бактерий Agrobacterlum гас11оЬастег10 обеспечивает значительную прибавку уромая ряда овощных культур — салата, капусты белокочанной, огурца, томата, что может найти использование в овощеводстве открытого и закрытого грунта.

Формула изобретения

Штамм бактерий Agrobacterium

radiobacter ВНИИСХМ-10 для полученйя удобрения под овощные культуры.

Массе корней одного растения> г

«»

"Дерсу"

Штамм 10 нКрупиокочанннд"

Штамм 10 лСат рапп

Штаны 10

НСРове

««

Сорт салата

Ва рианян опыта

Контроль беа ннокуляции Штамм В6!

1СРеяа

Контроль беа инокуляции

Штамм В6

Сре,95

Контроль беа инокуляции

Штанм В6

Зеленая масса одного растения, г

102,2

124,4 173.4

23,6

332,0

390,3

493,1

17,6

279 ° 0

301,3 412,4

52,6

Прибавка к контроле, г 2

22 ° 2 21,7

71,2 69,7

58,3 18,4

161,1 48,5

22,3 8,0

133,4 47,8

7,4

8,5

11,8

23 ° 5

26,0

31,1

20,6

21,4

26,8

Прибав ка к контротв

1, l l4,8

4ь4 59,9 1,7

2,5 10,6

7,6 32,3

11,8

В,В 3,В

6,2 30,1

7,4

1756318

Та блиц а 2

Влияние обработки семян купьтуральной жидкостью

Azotobacter chroococum ВНИИСИ" 20, ЦМПИ 0-3344 и АВгоЬасterium таЫоЬассer 10 на 30-дневную рассаду овощных культур

Культура

Вариант опыта

Масса растения, г, по повторностям

При ба в ка к контролю, Х

1 2 3 4 ср

24,4

23,6

25, 5:

28,1

24,3

21,6

22,2

28,5

Томат, сорт

"Русич"

1 0,4

15,2

Огурец, сорт

"Сюрприз 66"

16,6

15,6

18,9

19,6

18,9

15,7

17,6

20,5

f3,8

18,0.

Салат, со рт

"ТСХА"117"

14,4

16,2

18,1

20,2

14,2

15,7

18,8

18,2

12,5 .

25,7

40,2

2,9

Табл ица3

Влйяние бактериальных удобрений на основе Azotobacter

chrococcum ЦИПИ В-3344 и Agrobacterium radiobacter 10 на рассаду томата сорта "Рсанто"

Надземная масса растения,г, по повторностям ь v

«»Ф «»» у

Прибавка к контро- . . лю

Вариант

° Ы ° » «Ф

67,2

94,6

1О!

40,8 . 50„6

НСРо 1д

«« ««» k

Таблица4

Влияние штамма Agrobacterium radiobabter 10 на белокачанную капусту .

»а» и ъ i» М»

Показатели

Агрзбакте- HCP рин на шт.10

Контроль! 0,2

1 5, О

0 25

Всхожесть, семян, 3

Энергия прорастаниями

Иасса 1О проростков,r

85,5

67,0

1 4

47,0

42,0

0,8

Пэраженность рассады

"черной ножкой", В

9, 3

27,5

8,3

Выход сеянцев с

1 мз, шт. урожайность,тlга:

1986 r.

756

52,2

26,6

59„8

29,6

1,6

0,8

1987 г.

Содержание нитратов, мгФ

141Ф3

8 85

204,2

7 12

25 5

0,86

Сумма сахаров,Ф

Контроль . 21,9 24,0

ВНЙЙСИ-20 23,9 22,2

ЦИПИВ-3344 24,2 25,4

10 26 7 29 9

НСРо

Контроль 15,0 17,5 ВНИИИСИ-20 !6,5 15,2

ЦМПМВ-3344 18,9 20,3

10 19,6 18 9

НСРо gg

Контроль 18,3 12,9

ВНМ!!СИ-20 16,5 15,9

ЦМПИВ-3344 1 7,2 8,1

10 24,2 17,7 опыта

1 2 3 4

««» «»»» °

Контроль 73,! 64,0 70,7 61,1

ЦИАМ В-3344 90,7 92,9 96,3 91,6

10 98,4 105,3 98,6 102,6

5,7

27,5

26,8

27,6

27,1

3,6

15,0

15,1

16,6

19,2

2,1

12,2

16,5

18,3

20,7

1756318 Таблица 5

Влияние штамма Agrobacterivm гай.оЬасгег 10на огурец юю»»

Показатели

«««» ю ю ю»«

Контроль

Препарат на НСР штамме 10 юю

«Ф «« »

Высота растений

28,5 .

2,7 (рассада), см

Обьем корневой системы, сммз 2,0

0,4

2,0

15,6

3,0

18,5

27"

Толщина стебля, мм 14,0

Площадь листьев, см .1 95

По раженност ь, ко рневы" ми гнилями, Ф 37 5

Урожайность, кгlм2 5 35

5,7 5,5

7,6б 0,72 таблица6

Влияние препарата на основе атамма 10 на урожай огурца

«» »еа а»» а ° «а аае ° »ааю»«» «юю« а «а» », е

Урожай, кг/ма... Прибавка к контролю г - — -"-" июнь июль август сентябрь обц м кг/иа I Ф

»

4,5 5,7 6,6 " 1,2 . E8,0

64 5у6 ., 613 1,7 20,0 2,0 . " . 11 ю» ««»«»юю«» ый»аеЬ»южй

Таблица7 штамма А@гоЬасйегхин radiobacter 10 на томат

l ююЮе»аЮаеюю«ааеа»»» ю« »ю»ю««ю« »ааеею ° ю еа ааеа

Площадь, на

Вариант

1 000

Контроль

Опыт Влияние

Прибавка к контролю

Варианты

Нагрузка .: Урожай, препарата:,: ц/га кгlкг

° а >е ю

279,8

0,5 363,0

«аееа.»юю«»« ц/га

» еею»«еа»«а»« а ю»

Конт роль

Штамм 10

29,7

59,0

НСРО qq «ю««Ю Ь»»» Й «юю«е» ю««юю « °

Составитель Л. Бахман

Техред M,Mî ãåíòàë - Корректор П, Герещи

Редактор Н. Рогулич

Заказ 3060 Тира>к,е....:. Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101