Способ культивирования клубеньковых бактерий

 

Использование: микробиологическая промышленность, производство бактериальных удобрений. Сущность изобретения: клубеньковые бактерии, например Rhizoblum Japontcum, Rhlzobium trlfoli, культивируют на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимулятор роста, в качестве которого используют аммонийную соль никотиновой кислоты в количестве 0,0005-0,05 мас.% от объема среды. Использование аммонийной соли никотиновой кислоты позволяет увеличить выход биомассы бактерий с 3,3-3,5 до 6.2-6,9 г/я. 3 табл.

(I9) (11) союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4728910/13 (22) 11,08.90 (46) 07.06.92. Бюл. М 21 (71) Институт микробиологии и вирусологии

АН КазССР и Институт химических наук АН

КазССР (72) Н.В.Рослякова, З,Д.Ахметкалиева.

М.X.Øèãàåâà, Б.В.Суворов, Т,А.Афанасьева и А;Н.Молдабекова (53) 631.812:576.8 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 1039933, кл. С 05 F 11/08, 1983.

Авторское свидетельство СССР

М 874724, кл. С 05 F 11/08, 1981;

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения нитрагина для, бобовых растений, Известен способ регуляции клубеньковых бактерий перекисями щелочноземельных металлов. Известен способ использования аммонийной соли никотиновой кислоты в качестве стимулятора растений. Известная соль синтезирована новым методом в Институте химических наук AH КазССР, стимулирующий эффект на растениях доказан.

Целью изобретения является повышение выхода биомассы клубеньковых бактерий.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве стимулятора роста используют аммонийную соль никотиновой кислоты в количестве 0,0005-0,05 мас. Д от объема среды культивирования. (st)s С 05 F 11/08, С 12 N 1/20 (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ (57) Использование: микробиологическая промышленность, производства бактериальных удобрений. Сущность изобретения: клубеньковые бактерии, например Rhlzoblum

japonlcum, Rhlzobium trifoIl, культивируют на питательной среде, содержащей источники углерода. азота, минеральные соли и стимулятор роста, в качестве которого используют аммонийную соль никотиновой кислоты в количестве 0,0005-0,05 мас; от объема среды.

Использование аммонийной соли никотиновой кислоты позволяет увеличить выход биомассы бактерий с 3,3-3,5 до 6,2-6,9 г/л. 3 табл. ъм

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Пример .1. Клубеньковые бактерии сои Rhlzoblum japonlcurn 646. 634б, S-25 вы- ° ращивают в условиях аэрации периодическим способом.в колбах на качалке(Нрдб = ()

100 мл) на питательных средах, содержащих. Ср источники азота, углерода, минеральные соли, г/л: среда 1 — гороховая мука 20,0; глюкоза 5,0; сахароза 5,0; (NH4)zS04 0,5;

KHzP04 0;5; мел следы; К НРО4 0,5, среда 2 . — мвннит 10,0: дрожжевой ввтоливот 1.0;

NaCI 0,1; MgS04 7Н2О 0;2; К2НР04 0.5:

СаСОз следы.

В качестве стимулятора роста бактерий добавляют к среде аммонийную соль никотиновой кислоты в концентрациях 0.00050,05 мас, О >. Культивирование клубеньковых бактерий проводят. п(..и 27-29 С в течение 5 сут при рН 7,0-7,2

В табл.1 приведены данные динамики роста клубеньковых бактерийсои Rhizobium

1738807

Таблица1

Биомасса, г/л, в. с т

Штамм

Среда культививирования

3,6

3,2

2,5

2,0

4,3

4,1

2,1

1,8

3,9

3,6

1,8

1,4

0,9

0;9

0,46

0,35

0,72

0,65

0,42

0,30

0,70

0,62

0,38

0,26

2,1

1,9

1,05

0,85

2,0

1.8

1,1

0,9

1,7

1,5

0,92

0,7

4,6

4,3

3,2

3,0 .5,9

5,7

3,4

2,9

4,8

4.5

2,9

2,4

0.4

0,3

0,21

0,16

0,36

0,29

0,16

0,14

0,30 .0,27 . 0,13

0,11

634б

634б

634б

-634б . 646

646

646

646

S=25

S--25

$=25

$=25

1+ соль

2+ соль

1(контроль)

2(контроль)

1+ соль

2+ соль

1(контроль)

2(контроль)

1 +соль

2+ соль

1(контроль)

2(контроль) japonicum при добавлении 0,01%, аммонийной соли никотиновой кислоты.

Как видно иэ представленных в табл.1 данных, выращивание клубеньковых бактерий сои в присутствии аммонийной соли 5 никотиновой кислоты обеспечивает повышение биомассы на 44-96%. Титр бактерий сои составляет 15-22 млрд/мл.

Пример 2. Клубеньковые бактерии клевера Rhizoblum trlfoli 348 и 329б выращи- 10 вают в колбах на качалке(Чраб = 100 мл) на питательной среде следующего состава, г/л: среда 1 — горох (oreap) 100,0; сахароза

20,0; состав 2 аналогичен приведенному в примере 1, Культивирование клубеньковых 15 бактерий клевера проводят при 27-29 С и рН 7,0 в течение 48 ч. Биомасса клубеньковых бактерий клевера в среде с добавлением 0,01%-ной аммонийной соли никотиновой кислоты почти в 2 раза превы- 20 шает контрольный образец (табл.2). Титр бактерий клевера составляет 22-24 млрд/мл.

Пример 3. Влияние аммонийной соли никотиновой кислоты на азотфиксирующую, 25 симбиотическую активность клубеньковых бактерий сои и их конкурентоспособность изучалось в полевых опытах в Казахском НИИ земледелия, на опытном поле.

Бактеризацию семян сои сорта Эврика 30

357 проводят штаммами клубеньковых бактерий, выращенных на среде с добавлением аммонийной соли никотиновой кислоты, и контрольными образцами, Клубеньковые бактерии, культивированные на среде с стимулятором роста— аммонийной солью никотиновой кислоты, вступают в эффективный симбиоз с соей, активно фиксируют атмосферный азот, в результате чего улучшается развитие.растений; повышают урожай зерна на 1,2-1,4 ц/га.

Приведенные в табл.3 данные показывают, что эффективность симбиоза сои Эврика 357 с бактериями Rhlzobium japonlcum обеспечивает также улучшение качества урожая за счет более интенсивного накопления белка.

Таким образом, предлагаемый способ культивирования клубеньковых бактерий позволит увеличить выход инокулянтов для бобовых растений, повысить их симбиотическую эффективность, азотфиксирующую активность и конкурентоспособность.

Формула изобретения

Способ культивирования клубеньковых бактерий на питательной среде. содержащей источник углерода. азота, минеральные соли и стимулятор роста, о т л и ч à ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода биомассы, в качестве стимулятора роста используют аммонийную соль никотиновой кислоты в количестве 0;0005-0,05 мас.% от объема среды.

1738807

Таблица2

Таблица3

Составитель Т.Полянская

Техред М.Моргентал Корректор M. Демчик

Редактор И. Дербак

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород,.ул.Гагарина, 101

Заказ 1975 .. Тираж Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушокая наб„4/5