Способ разделения и выделения кумаринов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 30/90

ГОСУДАРСТВ Е HHblA KOMVITET

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4840869/25 (22) 23.04.90 (46) 23.10.92. Бюл. N 39 (71) Кемеровский государственный медицинский институт (72) П,В,Кузнецов и В.В,Шкаренда (56) Микаберидзе K,Ã., Мониава И.И. Умбеллиферон из листьев чая // Хим. природ, соед., 1974, ¹ 1, с, 84.

Henke 1.Н. Praparative adsorpsion—

chromatographische Trennung organischer

Verbindungen an Sephadex 2Н-20 mit Aceton

// Labor. Praxis, 1986, V. 10, N 6, S. 668 — 679.

Гончаров Н.Ф., Ступакова Э.П„Комиссаренко Н.Ф., Гелла Э.В. Кумарины надземной части Potentiila erecta // Хим. приро . соед„1978, N. 2, с. 299-300.

Kumar V., Peiseh 1., Wlckremaratue

D.Â.М. Gleinene and gleinadiene, 5,7dumethoxycoumarins from Murraya bleinee

Root // Phytochemistry, 1987, v. 26, р. 511—

514, Изобретение относится к химии и фармации, а именно к фитохимическому исследованию кумаринов.

Известны способы выделения и разделения кумаринов на сефадексах, полиамиде, в том числе и методом ВЭЖХ, Недостатками данных способов являются невозможность аналитического разделения смесей кумаринов, использование токсичных, пожароопасных реагентов.

Известен способ разделения и выделения кумаринов, включающий разделение анализируемой пробы путем пропускания при атмосферном давлении подвижного растворителя через колонку с полимерным адсорбентом, спектрометрическое детектирование разделенных компонентов в обла„„ „„1770897 А1

I

I (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ И ВЫДЕЛЕН И Я КУМАРИ Н О В (57) Сущность изобретения: для разделения, выделения кумаринов и их производных используют полимерный абсорбент аффинно. го типа — KX-т, с иммобилизированным лигандом полифенольной природы. Хроматографический процесс проводят с небольшим объемом адсорбента в режиме жидкостной хроматографии низкого давления, подвижная фаза — дистиллированная вода. водно-органические смеси; детектирование — спектрофотометрическое. 2 ил. сти 250 — 345 нм и их выделение в виде фракций элюата.

Недостатками известного способа являются; низкая устойчивость кремнеземной матрицы сорбента при рН>8, применение значительного количества адсорбента (около 160 см ), длительность во времени, применение в качестве подвижной фазы органических растворителей.

Цель изобретения — повышение селективности и упрощение способа выделения кумаринов, Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, включающему разделение пробы смеси кумаринов путем пропускания при атмосферном давлении подвижного растворителя через колонку с полимерным сорбентом, спектрометричеi770897 ское детектирование разделенных компонентов в области 250-345 IIM и их выделение в виде фракций элюата, подвижный растворитель, в качестве которого используют дистиллированную воду, или буфер- 5 ные растворы, или 10-60% раствор этанола в воде, пропускают через колонку с полимерным сорбентом аффинного типа — (+) катехин-азобензгидразидо-orñèo ропил-то йопалом. 10

На фиг. 1, 2 приведены хроматограммы, иллюстрирующие возможности предложенного. способа, Способ осуществляется следующим образом. 15

Анализируемую пробу разделяют путем пропускания подвижного растворителя, в качестве которого исгзользуют дистиллированную воду, или буферные растворы, или

10 — 60 раствор этанола в воде, через ко- 20 лонку с полимерным сорбентом аффинного типа — () катехин-азобензгидразидо-оксипропил-тойопалом, разделенные компоненты детектирую1 спек грофотометрически в области 250-345 нм и выделяют в виде 25 фракций апКаТВ, Пример 1. Разделение смеси неодикумарин-нитрофарин состава 1:1 на (+) катехин-азобензгидразидо-оксип ропил-тойог anе (КХ-т). 30

Подготовка модельной смеси, Смешивают 1,5 мл 0,01 раствора нитрофарина (в

6% водном диметилформамиде, ДМФА) с

1,5 мл 0,01% раствора неодикумарина (в 4 водном ДУЛА. или диметилсульфоксиде). "5

Полученную смесь (3 мл) наносили а стекл. иную хроматографическую .,олонку (15х1 см), заполненную 2,0 мл (t=55 мм) геля

КХ-т и специально подготовленную, Подготовка хроматографической колон- 40 ки. После упаковки 2 мл геля сорбента в хроматографическую колонку ее промывают последовательно 5 мл дистиллированной воды, 3 мл 2 M раствора натрия хлорида и огмывают хлорид-ионы дистиллирован- 45 ной водой до отрицатсльной гробы с нитратом серебра (25-30 мл).

Хрома ографирование модельной смеси, Пробу объемом 3. мл хроматографируют на подготовленной колонке, используя в ка- 50 честве подвижной фазы дистиллированную воду. Злюат собирают фракциями по 3 мл, скорость хроматографирования 1,1 — 1,3 мл/ч, детектирование при длине волны 275 нм (спектрофотометр СФ-26).

Хроматографический профиль разделения иллюстрируется графиком на фиг. 1— хроматограммой разделения смеси неодикумарина (I) и нитрофарина (It) на КХ-т. Подвижная фаза — дистиллированная вода.

Пример 2. Разделение смеси эскулин-кумарин-эскулетин-метилумбеллиферон на () катехин-азобензгидразидо-оксипропил-тойопале.

Подготовка модельной смеси, Смешивают 0,5 мл 0,04% раствора эскулина (в

16% водном диметилсульфоксиде: 0,2 мг), 0,325 мл 0,04 раствора (в 16% водном диметилсульфоксиде; 0,13 мг) кумарина, 0,2 мл

0,04 раствора {в 16% водном диметилсульфоксиде; 0,08 мг) эскулетина с 0,2 мл такого же раствора метилумбеллиферона. Полученную смесь (4 мл) хроматографируют на

КХ-т, Хроматографическую колонку готовят по примеру 1.

Условия хроматографирования. Скорость хроматографирования 0,3 мл в минуту, обьем фракции 2,5 мл, упакованный объем геля 5 мл, детектирование при длине волны

320 нм, Хроматографический профиль разделения иллюстрируется графиком на фиг. 2— хроматограммой разделения смеси: эскулин (!), кумарин (tl), эскулетин (И1) и метилумбеллиферон (И) на КХ-т. Подвижная фаза— дистиллированная вода.

Формула изобретения

Способ разделения и выделения кумаринов, включающий разделение анализируемой пробы путем пропускания при атмосферном давлении подвижного растворителя через колонку с полимерным сорбентом, спектрометрическое детектирование разделенных компонентов в области 250345 нм и их выделение в виде фракций элюата, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности и упрощения способа. подвижный растворитель. в качестве которого используют дистиллированну1о воду или буферные растворы, или

10-60%-й раствор этанола в воде, прогускают через колонку с полимерным сорбентом аффинного типа — (+) катехин-азобензгидразидо-оксипропил-тойопалом.

1770897

У 115

М dII

1 О 50 (Рыб/

05 г5 50 75 ос

Фог8

Составитель П. Кузнецов

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор H. бучок

Редактор Г. Бельская

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 3740 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5