Способ отбора вакцинных штаммов энтеробактерий антропозоонозной природы для получения ассоциированной вакцины

 

Использование, медицинская и ветеринарная микробиология. Сущность изобрегения: из коллекций микроорганизмов отбирают штаммы, обладающие комплексом факторов вирулентности: адгезинами., энтероток синами, гемолизинами, которые определяют с помощью известны.) методов 1 табл. ел с

СО1ОЗ СОВЕТС <1СОЦ1.1АПИСТИЧЕСКИК

РЕСПЮПИК

1Я i С 12 И 7/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

Е1ЕДОМСТ8О СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

V. ПАТЕНТУ (21) 4844860/13 (22) 29 05.90 (46) 30 12,92 Бюл, М 48 (71) Нижегородский научно-исследовательсний инстигут эпидемиологии и микробиологии и Мосновсная ветеринарная академия им К11 Скрябина (72) И.,Н..Блокина, В M.Лавровская, Н Ф Бруснигина, Е.С Воронин, Л А Поздышева и О М Черневская (73) Нижегородсн ий научно-исследовательский институт змидемиопогии и микробиологии (56) Игнатьева Р,В. и др Специфическая профилантина колибактериаза телят В кн;

Эпизоотология, диагностика и меры борьбы с инфеьционными болезнями, M., 1987, с 72—

76„

Соболева С,В, и др Экспериментальное иэучение защитного действия иммунного копи-протейного пактогпобупина, B I H. Актуальные вопросы иммунологии, алпергопогИи и молекулярной биологии, 1,,рэснодэр, 1978, с 118-121

Изобретение относится медицинс ой и ветеринарной микробиологии, в частности к рациональному подбору ванциннык штаммов бактерий., Цепью и.зобретения является повышение эффективности вакцины:33 счет расширенин спентра действия, Это достигается тем, что из знтеробактерпй используют Escherichia coll 09);99, Escherlchla coll 0138:) 88, Escherichla соИ

Ol l9 69-,Н5 М 200, )".,)еЬз!еЦа pneumoniae, Proteus I.ulgarfs, Proteus mlrabllis, SalmoпеПа typhimurium, Satmonel)a enteritidls L1

Salmonella dublin, а в качестве фи зиопогическик признаков оценивают адгезивность, „„5U„„1785531 АЗ (54) CllGCG5 GTBQPA ВИ ЦИННЫ." . ШТАМMGB ЭНТЕРОБА1 ТЕРИЙ АНТРОПОЗООНОЗНО(! ПР11РОДЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

АССОЦИИРОВАННОЙ ВАЩИНЫ (57) Использование", медицинская и ветеринарная микробиология. Сущность изобретения. из кол.лекций т1икроорганизмов отбирают штаммы, Обладающие но 1ппексом факторов вирупентности адгезинами, энтеротонсинами, гемопизинами, которые

Опредепянзт с помощью известны методов

1 табл знтератоh.cLl÷ность и способность вы 3LIDэть

ГЕМОПИЗ

Предложенный способ отбора вм цинны . штаммов способствует обогащен111О иммунны препаратов дпя профила ти и Ll печения острыи кишечнык заболеваний паroreHerLIweI:l: значимыми I омппе сами микробной клетки, индуцирующи1IL выработну саответствующик антител, необ.одимых дпя нейтрализации пусь овы» 3Eleньев инфекциОннОГО процесса

СПОсоб осуществляется следующи11 о0разом

П р и и е р i Определение фа1торов н опонизации бактерии

1485531

Идгеэины типов I 88, 1,99, 907Р, F41, К20, ("FA1, CFAH 13предепч от и реакции аггпи3тинации н,3 стегflp с антиадгеэипными сывороткah141 проиэводства BHI,(И пр4п.падIlI3L4 1Ith робРtollorL tvILIHhtepl ttth роб lonpoС С С Р l1 с nohtt3 lpb IQ pea 4 U I IL4

Д-f4BHI II3 3I3 peal,ICTPHTHOI1 ГеР1агГП!Оти!!а Ции с эригроци- таР1и чепосв О, барана, бы4а, Рлорской1 cEIL4Hh и, цыппен4 а Метод Д-ftaillfoзоэависиР П3й гемаггпют4п акации Р toцифицирОван н а 1111 использован е г о попукогпIBecTEIeHIIk вариэнгпри по TBIIQDI:,е в попистироповь!: ппаншета с помощью автоматичес4 и: ми4 родоэагоров с набором формапиниэированны; эритроцитов и отличие от прототипа r Ien3t(3 (Лопе"., G.МII, PuUer

Л М, 1971, Леп Р1(сРОЬ(о! 8.1, р I. 35-144), 4:оторый 3al,ïloчаетсll в llocTBItool е его на сте4:па flit l робиопогичес ой петлей с суспенэией све 43г. эритроцитоп, что не поэвоlt÷åã дозировать соотношение 4 clf1nol feHTQEI и требует постачнного обновпен IFI эр ITpoцито в.

l1 р и ht е р 2 Опредепение Ргмопитичес4ой Bh.тивисти шг3Р1Рпoв энтероба4.герий

lef1oï41ãè÷åñê(ю а4тив ность штз(tf (Ов энтеробакrep1й вычвпчюг «Ра чэш4а.. мегадоР I укопа ипи бпчшек п попугоподнуlo среду с агароР I Диф4го и 3 ", h poel1 При этоР1 18часовые hyftbTypbl энтероба терий, выращенные на агариэованной среде (Л-9, содерчкащий 0,6 Р". f(а1!РО,I, 0,37; („Н.РС14, 0,1 /, Ин,l(,:I, 0,05% (label, 0,02% t195t:Iq, i,5 f(, arBpa Диф4о, 0,5;, rnlohoakl, пан 3счт

I3 э TP,(3noïог! I Iec 4 GLI бlгпОй у ко и ОР-1 I.! пи бпчш ой II3 павер I1ость среды (Л-9 с 1;ь

4".poEIlt Чаш4и с lll31 eoaf111 I IHI ó(3tlðf Iîr при

37+1 С в течение (0- .(I О гемопитической акTLIOltOCTL1 UJTaf- IOE t::,Ifä÷ò по образован Ilo эоны просветпенич (ге loftLI3al EIQI руг виpoI3uII, 4 опон ий

П р и lt е р 8 Опредепение Tol cnrelllloсти ван .цинны штаР lf toft.

То4.сигенность 0,34:цинны.: штаРнп3в опредепчют ин витро по подавпе4п1ю дегидрогена зной а4 т IEIIIQGTI- уй мутанта эолотистого стафипококh;B (H А Пастернан, Е А ЕедьР1ина, L1.T ЛндрусеРН о и др, 1983) и по вычвпени10 Eo: -гена, контролирующего продукцию термопабипьного BHrepl3TohcLIна hheTognfh Р1опе4 улчрной ДНЕ-ДНЕ гибридиэации In: Itu (IflatlttBTI Фрич, СэР1бру4, 1984) с испопьэованием pST фрагмента ре4омбинатной ппаэР1лды р1ТЗйВ, noflptellHQ1,4 от A П i L|нэбурга и Г Б Смирнова НИ(;1ЭМ им Н Ф Гамапей

П р и hhе р 4 L l3 коппе4 ции о арактериэованнык по 4омппе4су telloTL4nLI ferh« и генетически; свойств (био . иР141чес431е, се5

1О

55 рологичес4-,ие сво IcTBB, чувс1витепьность к антибиоти4ам и специфичес4им бантериофагам, геРРопитичес4ач и адгеэивнач а4тивность, нукпоотидный состав, ппаэмидный профипь, энтеропатогенность LIH витра и ин

BLItto) Р упьгур (110 шгам41ов) отбирают в 4ачестве вагцинны 10 ппэзмидсодер34:ащик шгаммов знгоробактерий, выдепенны4 кav, отчепове4а, та4-. и 4ивотны, »Bpal териэующи сч попирезистентностью 4. антибиоти«аР1, наличием hofi nftehca +ah TGpott патогенности и выра+ енными пере4 рестныР1и антигенаРги свчэчми с другиРи1 видами энте ро ба 4 терий1,.

1 Е, со! 09:I .99

2 Е. col 0188;I попуче 1ы из h:Gïëåh ции ветеринарного контрольного института

8 Е. со(0119.1..89 Нб И:. 200

4,, 1 le(3.-(et(a pneumoniae tl.". 201

5, (leb 3(ella рпецгпоп!ае tl".. 202

6, Proteu; 4РР3(айаг(э Ц.". 198

7. ProEeu » ntlra(3ills И".: 199

8 Salmonella тур(31п3ог(оп4 И- 195

9. Salmonella enrer(tidls Гй 197

1G Salmonella i1uI3lIn Cl" 196 депонированы в Г(ICE, им Л А Тзрасеви Рз I nl3attha припагаетсч

Свойствадесчти Отобранны попредпагаеР1341у 4 ОР1п Itch су .ара4теристик штаммов эн гера(3актерий дпч попученич ассоциироI3al lH011 l3B4 L1LlHkl n pLfBeQeHbl в Tamil, 1, П р м е р 5. Стабипьн ость cEIOLIGTEI GTQбранны шта 4f IQI3 при «ранении и на этапа производства па4цины гпубинноР4 купьтивиравании и ина4тивации hhtlhpol3Hblh взвесей

Отобранные ва4 цинные штаммы,кранят в ампупа. в пиофипиэированном состочнии и I3 прабиРрка«с 0,7;ь мчсо-пептонным

arapQhh при температуре 4+1 C. При проверке GcHGEII- .:свойств 4упьгур при ранении установпена стабипьность ис однык

rlpl,1э на4 Ов.

Гпубинное Р,упьтивирование и инактивацию РР414pQGHII»: взвесей проводчт Ilo

pe3h:иР1ам "Регламента по производству

EBt цРРны (3ptoUJHG-тифозной cnL4pTGBQL1, обогащеHHI311 Би-антигеном t k 329 — 85, утверчкденного МинэдравоР4 СССР 05.1985 г.. (B h дый ва4цинныВ1 штзмР1 (эшерики41„ сапьмонепп, клебсиепп, прР3теев) выращиваIoT отдельно EL 34:ид4:ой белково-гидропиэатной питательной среде в ферментере с непрерывной аэрацией воэду4ом (1 объем на 1 обьем питательно41 среды в и44нуту) и перемешиванием (400-500 оборотов мешапки в минуту) при температуре 37ч-1 С.

Через 8 ч культивированич получают микро17855:11 бные взвеси с концентрацией»-ипробны: кпетак 58+10 r tnpptt" »1it

11накгиваци о к1и»рабнык взвесей осуществпяютоднО» раткой1 обработ»ь7й1 эганапа»1 в соотношении ми» poGHBA в звесь:этакая

14, При проверке основнык свойств аэрировакны7! икактивираеанкы.к взвесей, включая факторы вирупенткости, падтвергкдают ик идентичность с исходными свойствами ва».цикнык штаммав

Ппрпц нпенц

wawrn

Ната»вне н на«ар

«та«на

Внп ITILwTIIUL Lean«T«

Гt.caaarw41СПН«

: I«I I т. те I

FtNttt l«ltt4liKwwL сапцстаа

Canаппп"

Р ц

Ганн«-10«тт 1»н- Рат

11 - С

I4 I Пнт (1

IПН 14 tattnt11i !1!«1411

fat с11"

Г«нппнтн4«

n% Гп цп«

n«It« 1

Гаа«!

«ta

:1нт

nnr« tN11«

ntttIwт»н и с

« 1Р11п

«I I aa

П«п н ца»а н«Н

ILtTа нат

IIí« епГ«1Пспс

««1«

Р» п»тл натПнт нпс т °

NN l t a«a wN ннасн

a NrN

1Нта рнт I 4 тна

НП С T «

° нпр»Г"

4W i

Feh«rtcta «alt

ПЧ КЧЧ 1

ЧПП ГЧЧ епп Fnn

t Faehertrhla r»li,ПИП ГГП

4! Fah«rtLhla rail

D! 1Ч tttn Ila IÃ 200 а пl Iч аач Rл .*.1,! сГ«!

Crt II

Frat««a 1«ГЕ«т!е

Р !ЧП

rn,r nIt ПП.F

Itl0 П! ПЧ.F

r! n ча .ю

0 1 а! FFÂ

Ь Г«»с al Е»ьье !

Г 1ЧЧ

tn0 сГЛ!

6 It«tat ° tta рп«1в«а!е F П"0010

r l ч

СГЛ1!

Ч Ft«ttatett ° раанrttmtae !Г ьИ апп ere!

Э -" ° !аппп !.Ь ° етрhtaitrl4ю F !ЧЬ

П 1,1 12 lt l

П I ! n0

СГЛ

СГЛ I!

F net«a«« 1! ° 1!«Ььсп « ьее

tD р«1««п«!! ° «ntartttata r Чт

ГЧ! Пар ЧЧ

ПЧ I:I Ilt а it

tj0 Ь тнп +!

00 1 тнп +

Составитель В, Лавровс»ая

Те» ред М,Моргектап ;oppewrop Н Буча»

Редактор

Зака.з 4376 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и ат»:рып1ям при П HT С(СР

113035, Москва, Ж-35, Раушс»ая наб, 4/5

Производсгвенна-издатепьский1» амбинат "Патент", r. Ужгарад, у и Гагарина 101

Предло»енный информативный»омппекс по»азатепей»ара»теристики вакциннык штаммов д.пя приготое.пения ассоциированной вакцины, включая еирулентные свойства, осуществляется современными методами исследования опредепение ппазмидного профиля, адгезиенай и гемолитической активности и модифицированными авторами методами, энтерато»сигенности ин витра по выявпению 1ок-гена

ДН1 -ДН1! гибридизацией1п situ и по подавпению дегидрогеназнай активности мутакта золотистого сгафипокакка Установленная идентичность оснавны» свойств энтероба»терий, выдеяенны» от чеповека и»ивотнык, свидетельствует аб абщн17сти источников заболеваний и целесообразности использования эти«: данные при no+FIG ре в,з» цинны» штаммав

Предло!»енный:пасаб атбара еа» цинны, штаммов для попучения ассаци lpQBBH5 най ва»цины способствует ус!7еершенстеаеанию сосгаеа иммуннык препаратов дпя профила»ти»и и печения астры< »ишечнык забопеваний путем расширения еапентности и обогащения и» патогенетически значиf0 мыми»омппексами микрабньэй клетки., спОсобствующими нейтралиэа4ии пускавы к ме»анизмав заболев,зния

Формула изобретения

Способ отбора ва»;цикньгк штаммое эн15 гер!7бактерий антропо зоонозной природы дпя попучения ассоциированной вакцины путем оценки физиолагичес»ип призна оВ, а т л и ч а ю шийся темт что, с целью повышения эффе»тиенасти еа»цины за счет

20 расширения спе»тра действия, из энтерабактерий испапь уют Scherlchia coll09,:99, Eschterlchla со1! 0138.1 ;88, Escherlchla coIl

0119.:69.HG 1. Г! 200, lebsielia pneumonial, Proteus vufqarlв, Proteus mIrabilIs, 25 Ба1гпапе! 1а typhimuri, Salmonella enterltidl и

Salmonella dublin, а в качестве фиэиопагичес»и» призна»ое оценивают адгезивность, энтерато»:сичнасгь и спосабнасть вызывать

ГЕ-ГЮЛИЗ