Штамм вируса ласса для получения иммунобиологических препаратов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Ы2 1789560 А1 (5ц5 С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ "иБлиотккА

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4899515/13 (22) 03.01.91 (46) 23,01.93. Бюл. М 3 (71) Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (72) А.B.Òîðoï, А.Г.Красько, А.С.Владыко и

А.А,Шемер (56) Candurra N.A„Damonte Е,В., Cato С.Е.

Antigenic relationships between attennated

and pathogenic stralns of Junin virus. l med.

Virology, 1989, v, 27, р. 145-150.

Brayton РЯ.. Maassab Н.F. Characterization

of à nonvirulent variant of Lymphocytic

Choriomenlngitls Virus. Arch. Virology, 1982, у. . 74, р.85-89. (54) ШТАММ ВИРУСА ЛАССА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано, например, для создания средств специфической диагностики и профилактики такого высокопатогенного заболевания, как лихородка Ласса, Вирус Ласса, являющийся этиологическим агентом одноименной геморрагической лихорадки, относится к семейству

Arenaviridae, Это заболевание распространено в Африке (до 300.000 случаев в год). однако не исключена возможность заноса его на территорию СССР. Средства специфической профилактики в настоящее время не разработаны, и данное заболевание не контролируется. Учитывая высокую контагиозность и летальность прй лихорадке Ласса, разработка диагностических препаратов и средств специфической профилактики (вакцин) является весьма актуальной. Попытки создать вакцину на основе убитого концен(57 Использование: вирусология. Сущность изобретения; вирус Ласса, штамм Josiah, клонирован трехкратным перекалыванием из бляшек arapoeoro покрытия и затем последовательно пассирован в присутствии 1 ф анти-Ласса сыворотки морской свинки, Проведено 25 пассажей с контролем их патогенности для мышей линии СВА, чувствительных к данному вирусу. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов под номером 872, непатогенен для лабораторных животных, используется для создания средств специфической диагностики, профилактики данного заболевания, изучения его патогенеза, 1 ил. трированного и очищенного вируса не увенчались успехом, так как йрепарат оказался иммуногенен. С другой стороны, изолированы штаммы так называемых Ласса-подо- Со бных вирусов — Мопейя (Мозамбик), Мобала, Иппи, имеющих значительное антигенное родство с вирусом Ласса, однако непатоген- Л ных для человека. Иммунизация лаборатор- О ных животных вирусом Мопейя С) предотвращала развитие летальной инфекции. В связи с этим вызывает интерес получение аттенуированного варизнтгг вируса

Ласса для изучения патогенеза данной инфекции и разработки средств специфической диагностики и профилактики.

К настоящему времени получено значительное количество аттенуированйых (непатогенных) штаммов вирусов. Некоторые из них являются вакцинными: например, известны штамм 17D вируса желтой лихорадки, 1789560 штамм Сабина полиовируса и др. Все эти е;акцинные вирусы Способны к репродукции и в организме привитых стимулируют выработку иммунного ответа, предотвращая раавитие заболевания при проникновении в организм хозяина патогенного вируса. Природа аттенуирования изучена недостаточно. В частности, известно, что аттенуированные штаммы 17Р желтой лихорадки, ТС-83 штамм вируса Венесуэльского энцефалита лошадей и4р, имеют несколько аминокислотнйх замен в структурных и неструктурных белках. Однако зти замены, повидимому, являются критическими для проявления вирусами патогенности.

Для вирусов рода Arenaviridae ранее был описан аттенуированный штамм XJC13 вируса Хунин, полученный путем пассирования патогенного вируса на культуре клеток МА-111. Вирус Хунин, являющийся этиологическим агентом аргентинской геморрагической лихорадки, относится к аренавирусам Нового Света (Латинская

Америка), имеющим значительные антигенные отличия от вирусов Старого Света— лимфоцитарного хориоменингита, Ласса и др. Путем пассирования на клетках L929 при температуре 25 С получен вариант вируса лимфоцитарного хориоменингита (прототипный вирус семейства Arenavirldae),íåïàтогенный для чувствительных к вирусу ЛХМ . лабораторных животных (мыши линии SNl4-6). Аттенуация была достигнута на 17 пассаже вируса. Однако аттенуированный вариант вируса Ласса не описан, что сдерживает получение средств специфической профилактики и индикации данного особо опасного заболевания, Цель изобретения — получение штамма вируса Ласса, непатогенного для лабораторных животных используемого для получения специфических антисывороток и антигенных препаратов.

Цель достигается rlyTeM многократного пассирования предварительно клонированного перекалыванием из бляшки агарового покрытия вируса Ласса (штамм Josiah) e присутствии 1 анти-Ласса иммунной сыворотки.

Предложенный новый штамм в патентной и научно-технической литературе не описан. Аттенуированный штамм вируса

Ласса депонирован в Государственной коллекции вирусов (ГКВ) Института вирусологии им. Д.И. Ивановского AMH СССР, г.

Москва. Номер депонента ЁКВ -872.

Характеристика штамма. Название вируса. штамма: Вирус Ласса, 25-й пассаж.

Место в универсальной системе: семейство

ArenaviridaeÄ pop Arenavlrus, аренавирус

Ласса.

Штамм получен в 1988 году путем клонирования патогенного вируса Ласса, 5 штамм Josiah, трижды с перекалыванием из бляшки агарового покрытия в бляшку, а затем пассирования на клетках перевиваемой линии Чего в присутствии 1 ) анти-Ласса иммунной сыворотки морской свинки. Про1 0 ведено 26 пассажей с контролем титров реп роду кции на кул ьтуре клеток и патогенности для лабораторных животных, чувствительных к исходному вирусу Ласса, штамм Josiah, мышей линии СВА, В резуль15 тате пассиравания вирус утерял способность вызывать летательную инфекцию у лабораторных животных, Выделен; СССР, Белорусский НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ БССР, То20 роп А.В., Красько А.Г., Владыко А.С„Щемер А.А.

Физико-химические свойства: размер вирионов колеблется от 100 до 300 нм, РНК одноцепочечная.

Антигенные свойства: в тестах иммуноферментного и иммунофлюоресцентного анализов полученный вариант вируса Ласса связывался с иммунными поликлональными сыворотками к вирусу Ласса, штамм Josiah, Генетические признаки: геном сегмен-30 тированный, имеется большой (L) и малый ($) сегменты РНК. Сравнение электрофореграмм вирионной PHK пассированного вируса, 25-й пассаж, и вируса Ласса, штамм

Josiah., не выявляет различий в подвижно35 сти S и б сегментов — см. фиг.

На злектрофореграмме приводится вирионная PHK вируса Ласса, непатогенного для лабораторных животных (25-й пассаж) в сравнении с в РНК исходного вируса Ласса, 40 штамм Josiah, и других аренавирусов: дорожка 1 — в PHK вируса Ласса, штамм

Сьера-Леоне, дорожка 2 — в РНК вируса Ласса, непатогенного для лабораторных животных, 2545 пассаж, дорожка 3 — в PHK исходного вируса

Ласса, штамм Josiah, дорожка 4 — в PHK вируса Мачупо.

Прочие свойства: штамм адаптирован к

50 культурам клеток Чего и L929, ;àûçûâàåò бляшкообразование на 6-7 сутки после заражения на монослое клеток Чего С размером бляшек 2-4 мм.

Свойства полученного штамма иллюст55 рируютея следующими примерами.

П р и и е р 1. Группе (й1) из 6 мышей линии СВА, 100 j(, чувствительных к вирусу

Ласса при внутримозговом введении, вводили аттенуированный вирус Ласса, 25-й пассаж, в мозг 1000 БОЕ/мышь. Другой

1789560

Таким образом, получен непатогенный штамм вируса Ласса который, как видно из вышеприведенных примеров, возможно использовать для получения вирусспецифических антисывороток и антигенных препаратов на чувствительных к вирусу Ласса лабораторных животных (мыши, морские свинки и др,);;в исследованиях патогенеза аренавирусов; для генетических иследований аренавирусов.

Формула изобретения

Штамм вируса Ласса ГКВ 872 для получения иммунобиологических препаратов.

Составитель А;Тороп

Техред M,MoðãåHòàë Корректор И.Муска

Редактор

Заказ 329 Тираж Подписное

В НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 группе (N 2) из 6 мышей данный вирус вводили внутрибрюшинно, 1000 БОЕ/мышь.

Третьей группе (N3), 6 мышей, вводили высоколетальный исходный вирус Ласса, штамм Josiah, 1000 БОЕ/мышь. Через семь 5 дней животным всех групп, а также контрольной группы (6 мышей) ввели в мозг летательную дозу 1000 БОЕ/мышь исходного вируса Ласса, На 7 — 8 сутки после заражения все животные в контрольной группе по- 10 гибли с характерной клинической картиной.

В группах N 1-3 все животные выжили и были выведены из опыта через 21 день после заражения (3 инкубационных периода).

Таким образом, полученный штамм вируса 15

Ласса, 25-й пассаж, не вызывает гибель мышей чувствительной линии СВА при введении внутрибрюшинно и интрацеребрально, предотвращает летальную инфекцию при введении летальной дозы вируса Ласса, штамм 20

Josiah.

Пример 2. Две группы беспородных морских свинок из 6 и 10 животных иммунизировали подкожно 10000 БОЕ/животное

25 аттенуированным вариантом вируса Ласса, 25-й пассаж, затем через 28 дней ввели внутрибрюшинно 100000 БОЕ/животное.

Все животные выжили и использовались для получения специфических анти-Ласса сывороток. В двух контрольных группах из 20 и

8 животных при аналогичной схеме введения вируса Ласса, штамм Josiah, погибли 11 (55 ) и 6 (75 ) животных соответственно.

Следовательно, полученный штамм вируса

Ласса, 25-пассаж; не вызывает гибели беспородных морских свинок, высокочувствительных к "дикому" вирусу Ласса.