Способ получения вирусов венесуэльского энцефаломиелита лошадей и марбург
Использование: биотехнология, вирусология , производство вирусных препаратов. Сущность изобретения: повышение термоустойчивости вирусов венесуэльского энцё- фаломиелита лошадей и Марбург, при культивировании в стандартной питательной среде в присутствии биологического стабилизатора. В качестве стабилизатора используют 1-хлорметилсилатран или 1- этоксисилатран в концентрации 110 .%. 2 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 7/00
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
6 (21) 4901884/13 (22) 11.01.91 (46) 23.03.93. Бюл. N. 11 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт молекулярной биологии Научнопроизводственного объединения "Вектор" (72) В.Н,Зеленков, В.В,Солодкий, Т,В.Шелкова, В.С.Перзашкевич, В, Б. Казимировская, B.M,Äüÿ ков и В.П.Барышок (56) Blough Н.А., Tiffany L.M, Advances in
Lipid Res, 1973, vol, 11, рр. 267-339.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения PHK — содержащих почкующихся вирусов, В изобретении это достигается за счет использования в качестве биологического стабилизатора 1-хлорметилсилатрана или 1этоксисилатрана.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Готовят питательную среду для культивирования вирусов ВЭЛ и Марбург на основе стандартной среды Игла
МЕМ с 10% сывороткой крупного рогатого скота (СКРС).
В среду добавляют 1 — хлорметилсилатран (ХМС) в концентрации 1 10 — 110 мас,%. Далее в полученную среду вносят клетки Vего в концентрации 2 10 кл/мл, которые подращивают до состояния монослоя в течение 2 сут при 37 С, Затем монослой заражают суспензиейвирусов ВЭЛ и МарЯЛ 1803425 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУСОВ ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА
ЛОШАДЕЙ И МАРБУРГ (57) Использование: биотехнология, вирусология, производство вирусных препаратов, Сущность изобретения; повышение термоустойчивости вирусов венесуэльского энцефаломиелита лошадей и Марбург, при культивировании в стандартной питательной среде в присутствии биологического стабилизатора. В качестве стабилизатора используют 1-хлорметилсилатран или 1этоксисилатран в концентрации 1 10 2
1 10 мас.%, 2 табл. бург из расчета 1":10 БОЕ/клетку. После адсорбции вируса в течение 40 мин при комнатной температуре монослой заливают поддерживающей средой Игла МЕМ с 2% ются процессы термоинактивации микроорганизмов, что позволяет в относительно сжатые временные сроки определить уровень деградации биологического материала, При испытании по предложенному способу вирусосодержащие суспензии (ВЭЛ, СКРС, После инкубации при 37 С в течение 2 сут вирус (ВЭЛ) и в течение 7 сут (вирус
Марбург) образцы полученной вирусной суспензии испытывают на термочувстви-,Ы тельность методом ускоренного хранения. фь
Суть теста ускоренного хранения заключается в выдерживании (экспозиции) вирусо- (Л содержащих суспензий при 37 и 20 С, где во времени определяются биоактивности испытуемых образцов, При повышенных температурах ускоря1803425
Таблица 1
Биологическая активность вирусов ВЭЛ и Марбург после культивирования в питательной среде, содержащей 1-хлорметилсилатран и после термоинактивации
Биоактивность вируса, 1g БОЕ/мл + Е/р = 0,95
Состав среды (термоинактивация )
5 сут, 20 С вирус вирус яеЕеее .Веееее I после культивирования вирус
Марбург после храениния
20 С 30 сут вирус вирус
Марбург
37 С вирус
ВЭЛ
37 С, ви рус
ВЭЛ
12 сут вирус вирус
ВЭЛ
Среда Игла МЕМ.+
+10 з ХМС
3,8 0,2 3,1 0,2
0е 5- Ое2 2е l 0 2
4,9ЭО, 1
4,820,2
6 4Е0,21
4,8 0,2
7,9 0,2
7,6 0,2
4,7 0,1
3,9-0,3
Известная среда
Срера игла МЕМ +
+ 10 XlC
5,7 0,2
3,9е0,2
0,5 0,2
3,8 0,3
3,7- 0,3
7,8 0,2
7,6. 0,2
2,8 0,3
2,0 0,3
4,8 0,3
Известная среда
Среда Игла МЕМ ч
+ 10 ХМС
4,5 0,3
4,0е0,3
7,420,2
6,9 0,2
Известная среда
Т а б л и ц а 2
Биологическая активность вирусов ВЭЛ и Марбург после культивирования в питательной среде, содержащей l-этоксисилатран, и после термоинтактивации
Биоактианость. вируса, 18 GOE/ìë Е (р = 0,95) Состав среды после хранения (термоинактивации) (1.":::1 --.::-:- (после культивирования вирус вирус
ВЭЛ 11арбург
37 С вирус
ВЭЛ
2 сут вирус
Марбург
Среда Игла М М
+ l0 ЭТС
7,8е0,2
5,4 0,2
4,6 0,2
3,5 0,5
3, 7 0,3
3,4 0,1
2,0 0,3
Известная среда 7,8 0,2
Среда Игла MEN
+ 10 - ЭТС
Известная среда
4,4-+0,23,0 0,2
7,5 0,2 4,9 0,1
4,7 0,1
3.9 0,3
4,820,2
7,5 0,2
Марбург) разливают в пенфлаконы (по 1 мл) и хранят до 9 сут (37 С) и до 30 сут (20 С).
Периодически во времени извлекают испытуемые образцы и определяют их биоактивность стандартным методом десятикратного разведения и титрования на монослое эмбриональных фибробластов кур (для вируса ВЭЛ) и на монослое клеток
Чего (для вируса Марбург).
Биотитры вирусных суспензий выражают в БОЕ/мл.
Аналогично в этих же условиях испытывают контрольный образец — суепензию вируса, наработанную по стандартной методике. Результаты исследований представлены в табл, 1, Пример 2. Культивирование вирусов
ВЭЛ и Марбург, а также определение их термоустойчивости проводят как описано в примере 1. В составе питательной среды используют 1-этоксисилатран (ЭТС), Результаты исследований приведены в табл, 2.
Результаты, приведенные в табл. 1 и 2, свидетельствуют о том, что при использовании 1-этоксисилатрана и 1-хлорметилсилатрана в концентрации 1 10 — 1 10 мас,% в составе питательной среды термоустойчивость вирусов ВЭЛ и Марбург существенно
5 повышается.
Это имеет большое значение для сохранения биологической активности вирусов на этапах создания и хранения вирусных препаратов.
Формула изобретения
Способ получения вирусов венесуэльского энцефаломиелита лошадей и Марбург, предусматривающий выращивание перевиваемых клеточных культур до состояния монослоя в стандартной питательной среде в присутствии биологического стабилизатора, добавление к монослою вируссодержащего материала с последующей инкубацией и выделением вирусов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения термоустойчивости вирусов, в качестве биологического стабилизатора используют 1-хлор-метилсилатран или 1-этоксисилатран в концентрации 1 10 — 1 10 мас.%.
