Штамм вируса гриппа а(h3n2) для приготовления диагностических препаратов

 

Использование: штамм вируса гриппа А (НЗ N 2) - А (Караганда) 398/90, применяемый для приготовления диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм (Ш) вируса гриппа А/Караганда/398/90 представляет собой дрейф-вариант прото-. типного штамма А/Сычуань/2/87 (НЗ N 2). Вирус хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37° С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 Ig ЭИДбо/0,2 мл. Ш хорошо агглютинирует эритроциты кур, слабее - морской свинки, совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади и крупного рогатого скота, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей , обладает низкой гемагглютинируеющей активностью и высокой иммуногенностью. Ш А/Караганда/398/90 - ингибиторезистентный. В состав гемагглютинина входят Н3.10 и Н3.16 детерминанты. Положительный эффект: Ш Ф/Караганда/398/90 может быть использован для производства диагностических препаратов , предназначенных для идентификации вновь выделенных вирусов гриппа и обнаружения антител. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 1

iJQ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4911849/13 (22) 13.02.91 . (46) 23.01,93. Бюл, N. 3 (71) Институт микробиологии и вирусологии

АН КазССР (72) М.Х.Саятов, Л,И,Шахворостова, И,Л. Колыванова, Е.И. Исаева и M,È;Öâåòêoâa (56) Luzyanlna Т.Y. Golubev D.B. Ivanova N,A.

et al. Ann, Microbiology, 1975, — 126  — P.

461-470 Styk В., Kostolansky F. et ai„Acta

virol., 1986, М 3, P 220 — 226, (54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А (H3 N 2)

ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование: штамм вируса гриппа А (H3 N 2) — А (Караганда) 398/90, применяемый для приготовления диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм (Ш) вируса гриппа А/Караганда/398/90 представляет собой дрейф-вариант протоИзобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения диагностикума вируса гриппа.

: B настоящее время особое внимание обращает на себя все усиливающаяся гетерогенность вирусной популяции сероподтипа А (H3 N 2) на фоне длительной циркуляции его в популяциии человека (Гендон IO.3., Климов А.И., Дреннер Л: и др. . Сравнительный анализ геномов эпидемических штаммов вирусов гриппа // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1984, М 12, с. 24-29; Лузянина

Т.Я., Гринбаум Е.Б., Юхнова Л.Г. и др. Лабораторная характеристика вирусов гриппа А (НЗ N 2) возбудителей эпидемии 1983 r. s

„,. Ж„„1789561 А1 типного штамма А/Сычуань/2/87 (H3 N 2).

Вирус хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37 С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 lg ЭИДБо/0,2 мл.

Ш хорошо агглютинирует эритроциты кур, слабее — морской свинки, совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади и крупного рогатого скота, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой гемагглютинируеющей активностью и высокой иммуногенностью, Ш А/Караганда/398/90

- ингибиторезистентный, В состав гемагг-. лютинина входят Н3.10 и Н3.16 детерми- нанты. Положительный эффект:

Ф/Караганда/398/90 может быть использо ван для производства диагностических пре паратов, предназначенных дл идентификации вновь выделенных вируса гриппа и обнаружения антител, 5 табл.

Ленинграде // Acta virol, 1986, N 4, с, 294301, Нарастание гетерогенности вирусов А (НЗ N 2) может предшествовать появлению нового антигенного варианта данного подтипа возбудителя (Luzyanina Т.Ya., Goiubev

D.Â., Ьапоча N.À. et ai. Characteristic of

antigenic and biological properties of

influenza А viruses isolated different

epidemic of the same cycle // Ann

Microbiology, 1975, 126 b; р 461 — 470). В связи с этим прогностическое значение может иметь установленные направленности процесса изменчивости антигенной структуры возбудителя, а также оперативно выявление новых антигенных вариантов (Stuk В., Rostoiansky F., et al. Характеристика эпиде1789561 мических штаммов вируса гриппа А 1983 года с помощью поликлональных и моноклональных антител и выявление двух одновременно циркулирующих антигенных вариантов // Acta vtrol., 1986, М 3, с. 220226). Изоляты эпидемий 1990 r. относились к сероподтипу А (Н3 К 2), в основном были близки международным референс-штаммам А/Сычуань/2/87 и А/Гуандрнг/39/89.

Пред лагаемый штамм А/Караганда/398/90 является дрейф-вариантом проютипного штамма А/Сычуань/2/87. Штамм

19 выделен из н/гл смыва больного человека при пассировании на куриных эмбрионах в феврале 1990 r. во время эпидемической вспышки гриппа в Караганде (Казахская

ССР) и хранится в коллекции Института вйрусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР (депозитор И. 2264).

Целью изобретения является получение 20 штамма вируса гриппа А/Караганда/398/90 (НЗ N 2), обладающего специфи- ческой иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов при идентифика-.25 ции вновь выделенных вирусов гриппа, Антигенную структуру штамма изучали согласно рекомендациям В03 в РТГА (реакция тормо>кения гемагглютинирующей активности) с использованием набора 30 лоликланальных крысиных сывороток к эталонным штаммам А (НЗ N 2) и в РПНА(реакция подавления нейраминидазной активности с кроличьими иммунными сыворотками к рекомбинантным вирусам Р19 35 (HeqlNI), Р9 (HeqlN2) и P17 (Heq!N2). Дополнительно проводился тонкий иммунологический анализ штамма а РТГА с моноклональными антителами к вирусу

А/Филиппины/2/82. Кроме того, в иммуно- 40 логическом анализе были использованы моноспецифические антитела к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина.

Результаты изучения антигенной струк- 45 туры даны в табл. 1-5.

Выделенный штамм А/Караганда/398/90 характеризуется широтой антигенного спектра при взаимодействии с сыворотками к эталлонным вариантам 50

А/Филиппины/2(82, А/Кен/1/84, А/Миссисипи/1/85, А/СССР/2/85, A/Ëåíèírрад/360/86, А/Виктория/7/87, до

1/4-1/16 гомологичного титра, а с А/Сычу.ань/2/87 до 1/2 гомологичного титра;

Использование в иммунологическом анализе монорецепторных сывороток к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической адсорбции, дало возможность получить объективную оценку новизны предлагаемого варианта вируса. Опыты показали, что штамм A/Êàраганда/398/90 имел своеобразное сочетание антигенных детерминант, характеризующееся наличием одной "старой" детерминанты Н3,10, встречающейся в составе вирусов бангкокской разновидности и новой — НЗ.16 — "сычуаньской" детерминанты, Применение моноклональных антител к вирусу гриппа A/Ôèëèïïèíû/2/82 позволило выявить своеобразие нового штамма.

Эпитопы его опознавались 6-7 из 13 использованных моноклональных антител.

Адапционные свойства. Выделенный от человека вирус А/Караганда/398/90 релродуцируется в системе куриного эмбриона при оптимальной температуре (37 С) до инфекционного титра 5 Ig ЭИД 50/0,2 мл.

Штамм обладает низкой геммагглютинирующей (1: 32-1: 128) и высокой иммуногенной активностью (титр антител в РТГА 1;

1280), Свойство агглютинации. Вирус обладает узким спектром гемагглютинирующей ак- . тивности. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур (в титре 1: 32-1: 128), слабее — морской свинки(1: 32-1: 64), в низких титрах эритроциты. белых крыс (1: 4 — 1: 8), совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади крупного рогатого скота.

Терморезистентность (Тм-признак).

Предлагаемый штамм обладает термостабильным гемагглютинином, активность которого сохранялась после прогревания при

56 С в течение 4 ч и утрачивалась при 62 С втечение 1 ч.

Ингибиторочувствительность, Вирус

А/Караганда/398/90 ингибиторезистентный.

Адсорбционно-элюирующая активность, Новый штамм обладает высокой сорбирующей способностью по отношению к эритроцитам кур (до 100 ) и практически не элюирует с эритроцитов.

Патогенные свойства. Вирус А/Караганда/398/90 проявляет слабопатогенные свойства для белых мышей;

Штамм, выделенный от человека (А/Караганда/398/90), предназначен для производства гриппозного антигена, который может быть использован при серологической диагностике гриппа. С этой целью штамм размножают путем заражения 9-10дневных куриных эмбрионов в аллантоис-. ную полость.

Пример. Лабораторные животные— белые полость, 1789561 антигеном вируса гриппа человека A (MI N 1) реакция отрицательна.

Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа A/Êàðàãàíäà/398/90 А (НЗ N 2), 5 изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты могут найти применение в вирусологической практике для- идентификации вновь выделенных штаммов и изуче10 ния популяционного иммунитета населения с целью осуществления надзора за распространением вируса гриппа в природе и процессом изменчивости возбудителей гриппозной инфекции.

Схема иммунизации. Иммунные сыворотки получают в результате 4-кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодержащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом, Животных обескровливают через 10 дней после последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы из нехолерного вибриона.

Титр иммунной сыворотки заявляемого препарата в РТГА с гомологичным антигеном составляет 1; 1280, с гетерологичным

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А (НЗ N 2) ГКВ

2264, для приготовления диагностических препаратов.

Таблица 1

Исследование антигенной структуры гемагглютинина вируса гриппа A/Êàðàãàíäà/398/90 в

РТГА

Тит в РТГА с ви сами

Подтип гемагглютинина

Иммунные сывороткй к вирусам гомологичным А/Караганда/398/90

П р и м е ч а н и е: Здесь и в последующих таблицах титры даны в обратнах величинах, А/свинья/Айова/15/3

А/Пуэрто-Рико/8/34

А/СССР /090/77

А/Сингапур(57

А/Гонконг/1/68

A/floрт-Чалмерс/1/7

А/Виктория/3/75

А/Техас/1/77

А/Филлипины/2/82

А/Кен/1/84

А/Миссисипи/1/85

А/СССР/2/85

А/Ленинград/360/86

А/Виктория/7/87

А/Сычуань/2/87

В/Сингап /222/79

Н1

Н1

Н1

Н2

НЗ

НЗ

Н3

Н3

НЗ

Н3

Н3

НЗ

Н3

Н3

Н3

640

<20

<20

<20

<20

<20

<20

<20

<20 40

<20

1789561

Табл ица 2

Анализ в РТГА иммунной сыворотки к вирусу гриппа А/Караганда/398/90

Таблица 3 Лсследование антигенной структуры нейраминидазы вируса гриппаА/Караганда/398/90 е

РПНА

1789561

Таблица 4

Определение антигенного состава гемагглютинина вируса гриппа А/Караганда/398/90

Таблица 5

Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа A/Êàðàãàíäà/398/90 с моноклональными антителами

Составитель M.Ñàÿòîâ

Техред М.Моргентал Корректор 3. Салка

Редактор

Заказ 329 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101