Способ внутригрупповой дифференциации есно-вирусов

 

Использование: вирусология, медицина . Сущность изобретения: предложенный способ позволяет произвести предварительную пиутригрупповую дифференциацию вирусоп ECHO. Добавление трипсина в концентрации 50,0 мкг/мл о питательную среду переоиплемой культуры FL позволяет дифференцировать ЕСНО-вирусы на ECHO 2,3,6,8,9,11,12.,13.19,20,25 и ECHO 1.5,7,16,21,22,24,27. Остальные серотипы, не вызывающие цитопатический эффект в присутствии и отсутствии трипсина (при их репродукции в фибробластах эмбриона человека ) относят к вирусам ECHO 4,14,15,17,18,23,20,29,30,31 и 32.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ сОциАлистиче ских

РЕСПУБЛИК (я)ю С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (fOCflATEHT CCCP) tl".l 6,ll 3

;-:-;а 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

jOo ЬЭ ф

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4917600/13 (22) 07.03.91 (46) 30.06.93, Бюл. N. 24 (71) Молдавский научно-исследовательский институт профилактической и клинической медицины (72) К.И.Спыну, ВЛ,Вуткарев и Т.П.Грушко (56) )Кданов В,М., Гайдамович С.Я.„Вирусология. М.: Медицина, 1966, с.256-275. (54) СПОСОБ ВНУТРИГРУГ)ПОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ECHO-ВИРУСОВ (57) Использование: вирусология, медицина. Сущность изобретения: предложенный

Изобретение относится к ледицинской вирусологии и может быть использовано для внутригрупповой дифференциации Bll" русов ECHO.

Цель изобретения — изыскание нового способа, позволяющего проводить предварительную внутригрупповую дифференциацию вирусов ECHO на отдельные серогипы.

Для реализации поставленной цели штаммы, принадлежащие к вирусам ЕСНО, культивируют в перевиваемой культуре клеток амниона человека Fl в отсутствии и при наличии трипсина в концентрации 50,0:"6,6 мкг/мл в питательной среде клеток, с последующим выявлением цитопатического эффекта.

При наличии цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 2. 3, 6, 8. 9, 11, 12, 13, 19, 20 и 25, а при отсутствии его культуру дополнительно инкубируют в присутствии трипсина в вышеуказанной концентрации и при появлении цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 1, 5, 5Ы 1824442 А1 способ позооляет произвести предварител «yio о«утригруппооую дифференциацию вирусов ECHO. Добавление трипсина s концентрации 50,0 мкг/мл о питательную среду переоиоэемой культуры FL позооляет дифференцировать ЕСНО-вирусы на ECHO

2,3,6,0,9,11,12,,13,19,20,25 и ECHO

1.5,7,16,21.22,24,27. Остальные сдротипы, не оызыоэ ощие цитопатический эффект в присутствии и отсутствии трипсина (при их репродукции в фибробластах эмбриона человека) относят к вирусам ECHO

4,14,15,17,18,23,26,29,30,31 и 32.

7, 16, 21, 22, 24 и 27, а пр«отсутствии его— к группе ГСНО 4, 14, 15, 17, 10, 23. 26, 29.

30,31, 32, Пример. Исследованию подвергали стандартные штэммы ЕСНО-вирусов (ECHO

1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 0, 9, 1 1, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 10, 19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,31, 32), э также 47 штамл1оо энтеровирусов группы ГСНО, выделенных от детей, больных серозным менингитом, э также из водных обьектов (сточных вод, воды открытых водоемов, систелы питьеоого водоснабжения) окружающей среды, Индикацию вирусов химическим соединением проводили в культуре клеток амниона человека (FL).

Клетки амниона человека выращивают в среде Игла (рН 7,2) с глутамином, с добавлением 7,0 ), телячьей сыворотки или сыворотки крупного рогатого скота. За 3 часа до внесения вируса клетки отмывают средой

199, затем проводят смену на среду того же состава без сыворотки. но с добаолениелл аморфного трипсина, о конечной концент1824442

Составитель К.Спыну

Техред M.Ìîðãåíòaë

Корректор А Мотыль

Редактор

Заказ 2216 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 рации 50,0 мкг/мл. Вируссодержащий материал вносят на монослой после удаления среды иэ расчета 0,1 мл х 10 ЦПД о/мл на э

250 тыс. клеток и после часового контакта культуру заливают средой. содержащей трипсин в такой же концентрации (50,04-6,6 мкг/мл}, и инкубируют при 37,0Ю,1 С. Аналогичным образом инфицируют культуру Fl, в питательную среду которой не добавляют трипсин, Инфицированные пробирки инкубируют при 37 С в течение 48-72 часов.

Результат оценивают по ЦПДэо вируса, в случае его развития в ЕЕбез добавления к питательной среде трипсина исследуемые штаммы относят к вирусам ECHO 2. 3, 6, 8, 9, 11, 11, 12. 13. 19, 20, 25, а при развитии цитопатического эффекта в культуре клеток, куда предварительно был внесен трипсин, штаммы относят к ECHO 1, 5, 7, 16, 21, 24 и

27.

В случае отсутствия цитопатического эффекта в культуре клеток Е,неподвергнутых протеолитической обработке, а также содержащих в питательной среде трипсин, их относят к серотипам ECHO 4, 14. 15, 17, 18, 23, 26, 29, 30, 31, 32. Аналогичным образом проводили предварительную дифференциацию 46 штаммов ECHO-вирусов, выделенных от больных детей серозным менингитом, а также из водных объектов окружающей среды. Это позволило выделить их в 3 подгруппы (! подгруппа: ECHO 2 — 1 штамм, ECHO 6 — 10 штаммов, ЕСНО 12 — 1 штамм, ECHO 13 — 1 штамм: II подгруппа:

ECHO 1 — 6 штаммов, ECHO 7 — 12 штаммов, ECHO 21 — 1 штамм; И! подгруппа: ECHO 4 — 1 штамм, ECHO 17 — 9 штаммов, ECHO 29

5 — 2 штамма. ЕСНО 32 — 2 штамма). что в последующем было подтверждено в реакции нейтрализации, выполненной в культуре клеток фибробластов эмбриона человека.

Таким образом, предлагаемый способ в

10 отличие от известного позволяет провести предварительную внутригрупповую дифференциацию ECHO-вирусов. Технология предложенного способа несложна по выполнению, экономически выгодна. т.к. не

15 связана с дополнительными материальными затратами, доступна для любой вирусологической лаборатории, Формула изобретения

Способ внутригрупповой дифференциа20 ции ECHO-вирусов, включающий выращивание клеток FL, их заражение с последующим определением цитопатического эффекта, и вынесением на основании этого сужения, отличающийся тем, что

25 при наличии цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 2, 3. 6; 8, 9, 11, 12, 13, 19, 20, 25, а при отсутствии его культуру дополнительно инкубируют в присутствии трипсина в концентрации 50% 6,6 мкг/мл и

30 при появлении цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 1, 5, 7, 16, 21, 22, 24, 27, а при отсутствии его к группе

ECHO 4, 14, 15, 17, 18, 23, 26, 29, 30, 31, 32.