Способ повышения биологической активности вирусов гриппа

 

Использование: вирусология, биотехнология . Сущность изобретения: биологическую активность вирусов гриппа повышают путем пассирования в присутствии противовирусных препаратов. Для вируса гриппа А используют ремантадин в дозе 2 мг на эмбрион , а для вируса гриппа В - адапромин в дозе 5 мг на эмбрион. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧ Е С К ИХ

РЕСПУБПИК (st)s С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4921093/13 (22) 25.03,91 (46) 30.03.93. Бюл, М 12 (71) Одесский научно-исследовательский институт вирусологии и эпидемиологии им.

И.И.Мечникова (72) Г.С.Скрипченко, А,И.Пономаренко, Т.M.Ðûáýêîâà и И.M.Áåçáðîæ (73) Г.С.Г .рипченко (56) Сомина А,А, и др, В кн.: Молекулярная биология и генетик вирусов гриппа. Л., 1983, с. 153.

Вотяков В.И. и д р, R ïросы вирусологии, 1984, т, 4, с. 4Г,"..

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской вирусологии, и может быть использовано в научных исследованиях для повышения биологической активности вирусов гриппа и изучения коррелирующих с ней признаков, а также в научно-практической работе для получения высокорепродуктивных вакцинных штаммов.

Целью изобретения является повышение биологической активности (инфекционной и иммуногенной) вирусов гриппа типов

АиВ, Это достигается путем и редварительного r:àññèðîâàíèë в присутствии сублетальной дозы химиопрепарата специфического действия (ремантадина - для типа А и адапромина для типа В) вирусов гриппа.

Способ осуществляется следующим образом.

В куриные эмбрионы 10-дневного возраста вводят ремантадин или адапромин из расчета 200 мкг/мл (2 мг на эмбрион) ремантадина для вирусов гриппа А или 500 мкг/мл (5 мг на эмбрион) адапромина для вирусов

„„ЯЦ„„1806189 АЗ (54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ БИОЛОГИЧЕ,СКОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСОВ ГРИППА (57) Использование: вирусология, биотехнология, Сущность изобретения: биологическую активность вирусов гриппа повышают путем пассирования в присутствии противовирусных препаратов. Для вируса гриппа А используют ремантадин в дозе 2 мг на эмбрион, а для вируса гриппа  — адапромин в дозе 5 мг на эмбрион. 1 табл. гриппа типа В. Эмбрионы после этого выдерживают в термостате в течение 1,5 — 2 часов, затем вводят вирусы гриппа и инкубируют в термостате в течение 48 — 72 часов в зависимости от типа вируса гриппа.

Проводят 2 пассажа с интервалом 3 дня, Инфекционный титр определяют методом предельных разведений и выражают в

Ig ЭИД50.

Пример 1. Для повышения биологической активности вируса гриппа в куриный эмбрион вводится ремантадин для вируса гриппа типа А или адапромин для вируса гриппа типа В, через 1,5-2 часа проводят зара кение эмбрионов вирусами — по 0,2 мл десятикратных разведений вирусосодержащей жидкости, Инкубацию проводят в течеwe 48 часов при температуре 35,5 для вирусов гриппа типа А и 72 часа при темпе ратуре 33 для вирусов гриппа типа В. Полученную вируссодержащую жидкость титруют на куриных эмбрионах методом предельных разведений и определяют инфекционный титр в Ig ЭИД5о, Параллельно проводится титрование вирусов, пассиро1806189

Таким образом, пассирование вирусов гриппа в присутствии химиопрепаратов можно применять для получения высокоиммунных сывороток лабораторных животных, используемых при проведении научных исследований, а также при подготовке вакцинных штаммов для повышения их инфекционной и иммуногенной активности, Влияние культивирования вирусов в присутствии химиопрепаратов на их инфекционно -ь

Ин ек ионные тит ы в I ЭИ щ

Вирусы гриппа

Пассирование с химиопрепаратом (2 пассажа

Пассирование без химиопрепарата

А/Прага/1/84(Н1 М1)

А/Хабаровск/74/77 (Н1М1)

4/1-Хабаровск (Н1М1)

А/Виктория/35/72 (Н3%2)

5/П вЂ” Виктория (НЗМ2)

А/Филиппины/2/82 (НЗМ2)

В/Ленинград/17/86

5/1-В/Ленинград/17/86

6,23+4,45

5,23+ 0,48

4,00 + 0,45

6,00М,36

5,77й0,36

8,00 + 0,49 р<0.О2

p<0,001 р<0,001 р<0,02 р<0,02

7,77+0,49

8,00 +0,45

7,33+0,48

7,33 М,48

5,50+0,41

4,77М,45

5,33 +0,45

p<0,ОО1

p<0,0О1 р<0.001

7,50М,32

7,00 +0,48

7,00Ю,36

Составитель Т, Рыбакова

Техред М.Моргентал Корректор А, Обручар

Редактор

Заказ .965 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород. ул.Гагарина, 101 ванных без добавления химиопрепаратов.

Средние данные, полученные после 3 опытов представлены s таблице. Кроме эталонных вирусов, исследовались экспериментально полученные варианты с различной иммуногенной активностью (4/I-Хабаровск, 5/11-Виктория, 5/I-В/Ленинград), После 2 пассажей в присутствии химиопрепаратов (ремантадина или адапромина) инфекционные титры всех изученных вирусов типа А (НИ+1 и НЗМ2) и типа В возрастают от 1,5 до 4,0 Ig ЭИД о.

П р и м. е р 2. Полученными и осле 2 пассажей в присутствии химиопрепаратов вирусами. а также исходными штаммами проводят внутрибрюшинную иммунизацию белых мышей. Животных иммунизируют под эфирным наркозом по 0,3 мл вирусами с одинаковым гемагглютинирующим титром 1:64, 20

Титры антигемагглютининов в сыворотках крови животных исследуют через 21 день после иммунизации, У вирусов, прошедших 2 пассажа в присутствии химиопрепаратов, иммуногенная активность превышает иммуногенность исходных штаммов в 1,89-3,12 раза, Формула изобретения .

Способ повышения биологической активности вирусов гриппа, включающий введение противовирусного препарата в биологический материал, заражения его вирусом, инкубирование с последующим пассированием в присутствии противовирусного препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения инфекционности и иммуногенной активности вирусов, в качестве биологического материала используют куриные эмбрионы, а в качестве противовирусного препарата использую. ремантадин в дозе 2 мг на эмбрион для вируса гриппа А или адапромин в дозе 5 и на эмбрион для вируса гриппа В, при этом пассирование осуществляют 2-3 раза.