Способ определения эффективности противоопухолевой терапии

 

Используется в онкологии при лечении злокачественных опухолей. Целью изобретения является ускорение и упрощение контроля за эффективностью лечения. Сущность изобретения: в определении в лимфоцитах периферической крови пациентов коэффициента отношения активности супероксиддисмутазы к суммарной пероксидазной активности. При снижении его по сравнению с исходным значением констатируют эффект лечения. Увеличение коэффициента свидетельствует об отсутствии эффекта. Положительный эффект: позволяет индивидуализировать лечение для каждого больного, избежать действия малоэффективных препаратов, проводить контроль эффективности лечения на его этапах и вносить коррективы. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в лечении больных раком шейки матки.

Известен способ выявления эффективности химиолучевого лечения плоскоклеточного рака легкого по изменению уровня 17-кетостероидов, андостерона и кортизола в моче.

Однако известный способ не обеспечивает возможности выявления эффективности лечения для различных гистологических форм опухоли, длителен и сложен.

Известен способ оценки эффективности лечения онкологических больных по уровню экскреции полиаминов с мочой. Принцип метода заключается в экстракции полиаминов из мочи н-бутанолом, последующим их фракционировании при помощи электрофореза на бумаге и количественном определении колориметрическим методом. Для осуществления способа мочу больного собирают в течение 24 ч. Затем 20 мл мочи выдерживают при 4 ^оС в течение 18-24 ч. В ампулы наливают 3-5 мл мочи и равный объем 6н HCl, запаивают и помещают на 14-16 ч в термостат с температурой 120^оС. После окончания гидролиза проводят экстракцию н-бутанолом. Доводят рН мочи сначала до 9,0 с помощью универсальной индикаторной бумаги, а затем - до 9,5-10,0, контролируя рН по рН-метру. В течение 2 ч н-бутаноловую фракцию встряхивают на шутель-аппарате, а затем выпаривают на кипящей водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н HCl и в количестве 20 мкл наносят на полосу хроматографической бумаги, помещенную в прибор для электрофореза, и в течение 40 мин проводят электрофорез. Электрофореграммы высушивают в термостате при 70^оС в течение 20 мин, затем обрызгивают из распылителя нингидриновым красителем, и снова помещают в термостат при 70^оС на 20 мин для проявления окраски. Окрашенные пятна, соответствующие индивидуальным полиаминам, вырезают, помещают в химические пробирки, заливают элюирующим раствором и помещают на 25 мин в темное место. Измеряют величину поглощения растворов на спектрофотометре при длине волны 505 нм. Количество полиаминов определяют по калибровочной кривой, построенное по стандартным полиаминам.

Однако применение известного способа ограничивают и затрудняют такие его недостатки, как длительность проведения исследования которое затягивается на 4-5 сут. По этой же причине он не может быть использован для коррекции применяемой специфической терапии. Кроме того, применение указанного метода требует большого количества оборудования, реактивов, что влечет значительные затраты.

Целью изобретения является ускорение и упрощение контроля эффективности лечения.

Поставленная цель достигается тем, что в лимфоцитах периферической крови больных определяют коэффициент, представляющий собой отношение активности супероксиддисмутазы (СОД) к суммарной пароксидазной активности (СПА), объективно отражающей состояние антиоксидантной защиты организма.

Способ осуществляется следующим образом. Плазму крови больного в количестве 5 мл наслаивают на последовательно налитые в пробирку градиенты плотности фикол-верографин 1126 и 1077. Пробирку центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. Отбирают верхнее кольцо, содержащее лимфоциты в другую пробирку, и отмывают клетки физиологическим раствором с последующим центрифугированием. Затем в клетках определяют активность СОД по R.Fried (1975) и суммарную пероксидазную активность по Покровскому А.А. (1969) в модификации Внукова В.В. (1979).

Для определения СОД 5 мкг феназинметасульфата, 80 мкг тетразолия нитросинего, 0,5 мг НАДН₂, 2,82 мл фосфатного буфера рН 7,8 и 0,1 мл лизированных лимфоцитов перемешивают, устанавливают начальную экстинцию при длине волны 540 нм и через 10 мин измеряют нарастание оптической плотности раствора. Расчет производят в условных единицах активности фермента на 1 мг белка клеток. За 1 усл. ед. принимают 50%-ное подавление ферментом восстановления тетразолия нитросинего в окрашенный формазан.

Для определения СПА 400 мг уксуснокислого натрия, 25 мг трилона Б, 10 мг бензидина солянокислого, 2,5 мкг Н₂О₂ и 0,1 мл лизированных лимфоцитов перемешивают, через 10 мин измеряют нарастание оптической плотности раствора при длине волны 602 нм. Расчет производится в усл.ед. пероксидазной активности на 1 мг белка клеток. Затем вычисляют величину коэф- фициента: K = , где А_СОД - величина активности СОД; А_СПА - величина суммарной пероксидазной активности.

Предлагаемым способом было проведено исследование 35 больных раком шейки матки в динамике традиционного лучевого и химиотерапевтического лечения, а также 20 здоровых доноров.

Данные исследования представлены в таблице.

Как видно из таблицы, показатель К при эффективном лечении приближается к таковому у доноров, тогда как при отсутствии клинического эффекта он значительно возрастает по сравнению с исходными данными, что подтверждается состоянием больных.

П р и м е р 1. Больная К., 1948 г.рожд., ист. болезни N 1604/я, поступила в радиологическое отделение Ростовского научно-исследовательского онкологического института 4.02.91 г. с диагнозом: рак шейки матки Т_зN_хМ_о гр.II, эндофитная форма, кратер, вагинально-параметриально-маточный вариант. Гистологический анализ N 10245 от 28.12.90 г. - аденокарцинома. Проведено сочетаное лучевое лечение с традиционным чередованием доз от внутриполостного и наружного облучения.

При поступлении (до начала лечения) коэффициент отношения супероксиддисмутазы к суммарной пероксидазной активности К составлял 14,2 (6.02.91 г. ). 22.02.91 г. после дозы дистанционной гамматерапии равной 20 Гр К равнялся 9,5. После завершения полного курса лучевой терапии, при выписке с выздоровлением (III клиническая группа) коэффициент К = 4,0.

П р и м е р 2. Больная А., 1941 г. рожд., история болезни N 5413/я, поступила в радиологическое отделение РНИОИ 17.05.91 г. с диагнозом: рак шейки матки, Т_зN_хМ_о, гр.II, эндофитная форма, кратер, вагинально-параметрально-маточный вариант. Гистоанализ N 1628-29 от 16.01.91 г. плоскоклеточный рак без ороговения. Проведено сочетанно-лучевое лечение по общепринятой методике.

При поступлении коэффициент был равен 11,0, после дозы наружного облучения 10 Гр - 12,0; после дозы 20 Гр коэффициент составлял 20,6. Клинически при этом отмечалась замедленная резорбция опухоли первичного очага. После полного курса лучевой терапии, дозы вт А 80 Гр и вт В 70 Гр, на шейке матки определялись остатки опухоли. Коэффициент достоверно возрос до 42,0. Лечение без эффекта (II клиническая группа).

П р и м е р 3. Больная Ш., 1951 года рождения, история болезни N 906/я, поступила в радиологическое отделение РНИОИ 25.01.91 г.с диагнозом: рак шейки матки Т_зN_хМ_о, гр.II, смешанная форма, вагинально-параметрально-маточный вариант. В силу распространенности процесса и молодого возраста больной проводилась предлучевая подготовка в виде эндолимфатической полихимиотерапии с введением смеси 50 мг метотрексата и 200 мг тио-ТЭФа в лимфатические пути нижних конечностей. До начала лечения коэффициент составлял 112,1 (28.01.91 г. ). После эндолимфатической полихимиотерапии отмечалась значительная резорбция опухоли шейки матки, при этом (15.02.91 г.) коэффициент снизился до 8,0. В дальнейшем проведен второй этап лечения - сочетанная лучевая терапия. После дозы облучения 20 Гр коэффициент равнялся 7,3. В целом химиолучевое лечение завершено с первичным клиническим извлечением (с эффектом) - III клиническая группа. Коэффициент при выписке составлял 6,7.

Таким образом, данные клинического наблюдения на этапах лечения вполне коррелируют с показателями коэффициента , который может служить показателем эффективности проводимой терапии.

Использование предлагаемого способа по сравнению с известными позволяет: индивидуализировать для каждого больного специфическое лечение и вносить необходимые коррективы на его этапах; избавить больного от токсического действия малоэффективных для него препаратов; в процессе лечения объективизировать результаты специфической терапии; значительно их ускорить и упростить проведение анализа.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ путем биохимического исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что исследования проводят в лимфоцитах периферической крови, определяют уровень активности супероксиддисмутазы, а также суммарную пероксиразную активность до и в процессе лечения, вычисляют отношение первого показателя к второму и при снижении отношения в сравнении с исходным определяют эффективное лечение, а при повышении - отсутствие такого эффекта.

РИСУНКИ

Рисунок 1