Гуманизированная анти-fas антителоподобная молекула (варианты), днк (варианты), вектор (варианты), полипептид, способ получения, использование антитела

 

Изобретение относится к иммунобиотехнологии и касается гуманизированной анти-Fas антителоподобной молекулы, способной в клетках, имеющих нарушения в системе Fas/Fas-лиганд, индуцировать или предотвращать апоптоз. Антитело содержит по крайней мере одну легкую и одну тяжелую цепи, имеющие аминокислотные последовательности, приведенные в тексте описания. Антитело предназначено для профилактики и/или лечения состояний, связанных с указанным нарушением. Антителоподобная молекула кодируется ДНК, которая встроена в вектор для трансформации Е.coli для продуцирования анти-Fas антителоподобной молекулы. Изобретение раскрывает полипептид, образующий Fas-специфическую антителоподобную молекулу, ДНК, которая его кодирует, и вектор, содержащий указанную ДНК. Анти-Fas антитела являются перекрестно реактивными с машинным и человеческим Fas, что позволяет использовать их для лечения состояний, связанных с нарушениями в системе Fas/Fas-лиганд. 14 с. и 35 з.п. ф-лы, 2 табл., 76 ил.

Текст описания в факсимильном виде (см. графический материал)а

Формула изобретения

1. Гуманизированная анти-Fas антитело-подобная молекула, способная в клетках, имеющих нарушения в системе Fas/Fas-лиганд, a) индуцировать апоптоз путем связывания Fas на клеточной поверхности, и клетках, не имеющих такого нарушения, b) предотвращать апоптоз, индуцируемый связыванием Fas-лиганда с Fas-антигеном, причем указанная молекула содержит одну или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из: аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 143, аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 145, аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.:147, и аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 157 из списка последовательностей, и указанная молекула имеет одну или несколько субъединиц легкой цепи, по существу, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из: аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 107, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 127, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.:129, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 131 из списка последовательностей.

2. Антитело-подобная молекула по п.1, в которой тяжелая цепь, по существу, состоит из аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 157 из списка последовательностей.

3. Антитело-подобная молекула по п.1 или 2, в которой легкая цепь, по существу, состоит из аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 107 из списка последовательностей.

4. Антитело-подобная молекула по п.1, состоящая из двух тяжелых и двух легких цепей, причем каждая тяжелая цепь, по существу, состоит из аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 157 из списка последовательностей, а каждая легкая цепь, по существу, состоит из аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 107 из списка последовательностей.

5. Антитело-подобная молекула, обладающая свойством антитела по п.1, которая содержит одну или несколько субъединиц тяжелых цепей, по существу, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из: аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 143, аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 145, аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 147, и аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 157 из списка последовательностей.

6. Антитело-подобная молекула по п.5, которая дополнительно содержит одну или несколько субъединиц легких цепей, по существу, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из: аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 107, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 127, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 129, и аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 131 из списка последовательностей.

7. Антитело-подобная молекула по п.5 или 6, в которой тяжелая цепь, по существу, имеет аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 157 из списка последовательностей.

8. Антитело-подобная молекула по п.6, в которой легкая цепь, по существу, имеет аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 107 из списка последовательностей.

9. Антитело-подобная молекула по п.5, которая содержит две тяжелые цепи и дополнительно две легкие цепи, причем каждая тяжелая цепь содержит, по существу, аминокислотную последовательность 1-451 SEQ ID No.: 157 из списка последовательностей, а каждая легкая цепь, по существу, содержит аминокислотную последовательность 1-218 SEQ ID No.: 107 из списка последовательностей.

10. Антитело-подобная молекула, обладающая свойством антитела по п.1, в которой одна или несколько субъединиц легкой цепи, по существу, имеет аминокислотную последовательность, выбранную из: аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.:127, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 129, аминокислотной последовательности 1-218 из SEQ ID No.: 131 из списка последовательностей, и одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеет аминокислотную последовательность, выбранную из: аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 143, аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.: 145, аминокислотной последовательности 1-451 из SEQ ID No.:147, из списка последовательностей.

11. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 127, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 143.

12. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 127, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 145.

13. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 127, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.:147.

14. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 129, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 143.

15. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 129, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.:145.

16. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 129, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 147.

17. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 131, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 143.

18. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 131, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 145.

19. Антитело-подобная молекула по п.10, в которой субъединицы легкой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-218 из SEQ ID No.: 131, а одна или несколько субъединиц тяжелой цепи, по существу, имеют аминокислотную последовательность 1-451 из SEQ ID No.: 147.

20. Антитело-подобная молекула по любому из пп.1-19 связывает пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID No.: l из списка последовательностей.

21. Антитело-подобная молекула по любому из предшествующих пунктов, которая состоит из двух тяжелых и двух легких цепей.

22. Антитело-подобная молекула по любому из предшествующих пунктов, предназначенная для производства медикамента для лечения состояния с вовлечением нарушений в системе Fas/Fas-лиганд.

23. Антитело-подобная молекула по п.22, где медикамент предназначен для использования человеком.

24. Средство для профилактики и/или лечения состояний с нарушениями в системе Fas/Fas-лиганд, включающее антитело по любому из предшествующих пунктов.

25. Средство по п.24, где заболевание выбрано из аутоиммунных заболеваний, включая системную красную волчанку, болезнь Хашимото, ревматоидный артрит, реакцию “трансплантат против хозяина”, синдром Шегрена, пернициозную анемию, болезнь Аддисона, аутоиммунную гемолитическую анемию, стерильность, myasthenia gravis, рассеянный склероз, бозедову болезнь, тромбопеническую пурпуру и инсулинзависимый сахарный диабет, аллергию, ревматоидный артрит, артериосклероз, миокардит, кардиопатию, гломерулонефрит, гипопластическую анемию, гепатит, выбранный из фульминатного гепатита, хронического гепатита, вирусного гепатита, в свою очередь, выбранного из гепатита С, гепатита В, гепатита D, алкогольного синдрома, отторжение после трансплантации органов.

26. ДНК, кодирующая антитело-подобную молекулу по любому из пп.1-4.

27. ДНК, кодирующая антитело-подобную молекулу по любому из пп.5-9.

28. ДНК, кодирующая антитело-подобную молекулу по любому из пп.10-19.

29. Рекомбинантный ДНК-вектор, содержащий ДНК по п.26.

30. Рекомбинантный ДНК-вектор, содержащий ДНК по п.27.

31. Рекомбинантный ДНК-вектор, содержащий ДНК по п.28.

32. Способ получения клетки-хозяина, продуцирующей анти-Fas антитело-подобную молекулу по пп.1-23, предусматривающий культивирование E.coli в качестве клетки-хозяина и ее трансформацию вектором по любому из пп. 29, 30 или 31.

33. Способ по п.32, отличающийся тем, что получают трансформированный штамм E.coli, выбранный из PERM BR-6512, PERM BR-6511, PERM BR-6513, PERM BR-6515, PERM BR-6514, PERM BR-6516, PERM BR-6510.

34. Способ получения анти-Fas антитело-подобной молекулы, предусматривающий культивирование клетки-хозяина, полученной способом по любому из п.32 или 33.

35. Полипептид, образующий Fas-специфичную антитело-подобную молекулу по любому из пп.1-23, и представляющий собой а) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотной последовательности 1-218 SEQ ID No.:127, из аминокислотной последовательности 1-218 SEQ ID No.:129, из аминокислотной последовательности 1-218 SEQ ID No.: 131 из списка последовательностей; и b) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, содержащей аминокислотную последовательность 1-451 SEQ ID No.: 143, аминокислотную последовательность 1-451 SEQ ID No.: 145 и аминокислотную последовательность 1-451 SEQ ID No.: 147 из списка последовательностей.

36. ДНК, кодирующая полипептид по п.35, причем указанная ДНК представляет собой ДНК, содержащую нуклеотидную последовательность 99-752 из SEQ ID No.: 126, 99-752 из SEQ ID No.: 128, 99-752 из SEQ ID No.: 130, 80-2038 из SEQ ID No.: 142, 80-2038 из SEQ ID No.: 144, 80-2038 из SEQ ID No.: 146.

37. ДНК по п.36, кодирующая полипептид по п.35, содержащая нуклеотидную последовательность 99-752 из SEQ ID No.: 126 из списка последовательностей.

38. ДНК по п.36, кодирующая полипептид по п.35, содержащая нуклеотидную последовательность 99-752 из SEQ ID No.: 128 из списка последовательностей.

39. ДНК по п.36, кодирующая полипептид по п.35, содержащая нуклеотидную последовательность 99-752 из SEQ ID No.: 130 из списка последовательностей.

40. ДНК по п.36, кодирующая полипептид по п.35, содержащая нуклеотидную последовательность 80-2038 из SEQ ID No.: 142 из списка последовательностей.

41. ДНК по п.36, кодирующая полипептид по п.35, содержащая нуклеотидную последовательность 80-2038 из SEQ ID No.: 144 из списка последовательностей.

42. ДНК по п.36, кодирующая полипептид по п.35, содержащая нуклеотидную последовательность 80-2038 из SEQ ID No.: 146 из списка последовательностей.

43. Рекомбинантный ДНК-вектор, содержащий ДНК по любому из пп.36-42.

44. Рекомбинантный ДНК-вектор по п.43, содержащий ДНК по любому из пп.37-39.

45. Рекомбинантный ДНК-вектор по п.43, содержащий ДНК по любому из пп.40-42.

46. Способ получения клетки-хозяина, трансформированной рекомбинантным ДНК-вектором по п.43, предусматривающий культивирование клетки-хозяина и ее трансформацию указанным вектором.

47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что он предусматривает культивирование клетки-хозяина с рекомбинантным ДНК-вектором, охарактеризованным в п.44 или 45, или их комбинацией, и ее трансформацию указанным вектором.

48. Способ по п.46, отличающийся тем, что он предусматривает культивирование клетки-хозяина с рекомбинантным ДНК-вектором, охарактеризованным в п.44 или 45, и ее трансформацию указанным вектором.

49. Способ по любому из п.46 - 48, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин является клеткой млекопитающего.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157, Рисунок 158, Рисунок 159, Рисунок 160, Рисунок 161, Рисунок 162, Рисунок 163, Рисунок 164, Рисунок 165, Рисунок 166, Рисунок 167, Рисунок 168, Рисунок 169, Рисунок 170, Рисунок 171, Рисунок 172, Рисунок 173, Рисунок 174, Рисунок 175, Рисунок 176, Рисунок 177, Рисунок 178, Рисунок 179, Рисунок 180, Рисунок 181, Рисунок 182, Рисунок 183, Рисунок 184, Рисунок 185, Рисунок 186, Рисунок 187, Рисунок 188, Рисунок 189, Рисунок 190, Рисунок 191, Рисунок 192, Рисунок 193, Рисунок 194, Рисунок 195, Рисунок 196, Рисунок 197, Рисунок 198, Рисунок 199, Рисунок 200, Рисунок 201, Рисунок 202, Рисунок 203, Рисунок 204, Рисунок 205, Рисунок 206, Рисунок 207, Рисунок 208, Рисунок 209, Рисунок 210, Рисунок 211, Рисунок 212, Рисунок 213, Рисунок 214, Рисунок 215, Рисунок 216, Рисунок 217, Рисунок 218, Рисунок 219, Рисунок 220, Рисунок 221, Рисунок 222, Рисунок 223, Рисунок 224, Рисунок 225, Рисунок 226, Рисунок 227, Рисунок 228, Рисунок 229, Рисунок 230, Рисунок 231, Рисунок 232, Рисунок 233, Рисунок 234, Рисунок 235, Рисунок 236, Рисунок 237, Рисунок 238, Рисунок 239, Рисунок 240, Рисунок 241, Рисунок 242, Рисунок 243, Рисунок 244, Рисунок 245, Рисунок 246, Рисунок 247, Рисунок 248, Рисунок 249, Рисунок 250, Рисунок 251, Рисунок 252, Рисунок 253, Рисунок 254, Рисунок 255, Рисунок 256, Рисунок 257, Рисунок 258, Рисунок 259, Рисунок 260, Рисунок 261, Рисунок 262, Рисунок 263, Рисунок 264, Рисунок 265, Рисунок 266, Рисунок 267, Рисунок 268, Рисунок 269, Рисунок 270, Рисунок 271, Рисунок 272, Рисунок 273, Рисунок 274, Рисунок 275, Рисунок 276, Рисунок 277, Рисунок 278, Рисунок 279, Рисунок 280, Рисунок 281, Рисунок 282, Рисунок 283, Рисунок 284, Рисунок 285, Рисунок 286, Рисунок 287, Рисунок 288, Рисунок 289, Рисунок 290, Рисунок 291, Рисунок 292, Рисунок 293, Рисунок 294, Рисунок 295, Рисунок 296, Рисунок 297, Рисунок 298, Рисунок 299, Рисунок 300, Рисунок 301, Рисунок 302, Рисунок 303, Рисунок 304, Рисунок 305, Рисунок 306, Рисунок 307, Рисунок 308, Рисунок 309, Рисунок 310, Рисунок 311, Рисунок 312, Рисунок 313, Рисунок 314, Рисунок 315, Рисунок 316, Рисунок 317, Рисунок 318, Рисунок 319, Рисунок 320, Рисунок 321, Рисунок 322, Рисунок 323, Рисунок 324, Рисунок 325, Рисунок 326, Рисунок 327, Рисунок 328, Рисунок 329, Рисунок 330, Рисунок 331, Рисунок 332, Рисунок 333, Рисунок 334, Рисунок 335, Рисунок 336, Рисунок 337, Рисунок 338, Рисунок 339, Рисунок 340, Рисунок 341, Рисунок 342, Рисунок 343, Рисунок 344, Рисунок 345, Рисунок 346, Рисунок 347, Рисунок 348, Рисунок 349, Рисунок 350, Рисунок 351, Рисунок 352, Рисунок 353, Рисунок 354, Рисунок 355, Рисунок 356, Рисунок 357, Рисунок 358, Рисунок 359, Рисунок 360, Рисунок 361, Рисунок 362, Рисунок 363, Рисунок 364, Рисунок 365, Рисунок 366, Рисунок 367, Рисунок 368, Рисунок 369, Рисунок 370, Рисунок 371, Рисунок 372, Рисунок 373, Рисунок 374, Рисунок 375, Рисунок 376, Рисунок 377, Рисунок 378, Рисунок 379, Рисунок 380, Рисунок 381, Рисунок 382, Рисунок 383, Рисунок 384, Рисунок 385, Рисунок 386, Рисунок 387, Рисунок 388, Рисунок 389, Рисунок 390, Рисунок 391, Рисунок 392, Рисунок 393, Рисунок 394, Рисунок 395, Рисунок 396, Рисунок 397, Рисунок 398, Рисунок 399, Рисунок 400, Рисунок 401, Рисунок 402, Рисунок 403, Рисунок 404, Рисунок 405, Рисунок 406, Рисунок 407, Рисунок 408, Рисунок 409, Рисунок 410, Рисунок 411, Рисунок 412, Рисунок 413, Рисунок 414, Рисунок 415, Рисунок 416, Рисунок 417, Рисунок 418, Рисунок 419, Рисунок 420, Рисунок 421, Рисунок 422, Рисунок 423, Рисунок 424, Рисунок 425, Рисунок 426, Рисунок 427, Рисунок 428, Рисунок 429, Рисунок 430, Рисунок 431, Рисунок 432, Рисунок 433, Рисунок 434, Рисунок 435, Рисунок 436, Рисунок 437, Рисунок 438, Рисунок 439, Рисунок 440, Рисунок 441, Рисунок 442, Рисунок 443, Рисунок 444, Рисунок 445, Рисунок 446, Рисунок 447, Рисунок 448, Рисунок 449, Рисунок 450, Рисунок 451, Рисунок 452, Рисунок 453, Рисунок 454, Рисунок 455, Рисунок 456, Рисунок 457, Рисунок 458, Рисунок 459, Рисунок 460, Рисунок 461, Рисунок 462, Рисунок 463, Рисунок 464, Рисунок 465, Рисунок 466, Рисунок 467, Рисунок 468