Питательная среда для выделения pseudomonas aeruginosa

Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, калий сернокислый, магний сернокислый 7-водный, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, фенозан-кислоту, бутилгидрокситолуол, N-цетилпиридиний хлористый 1 водный (ЦГГХ), натрий углекислый, агар бактериологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет получать объективные результаты бактериологического контроля, сократить время культивирования бактерий рода Pseudomonas. 3 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии и может быть использовано для обнаружения бактерий рода Pseudomonas при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды с целью выделения бактерий рода Pseudomonas - возбудителей инфекционных заболеваний человека.

Синегнойная палочка способна вызывать различные заболевания, картина заболевания и симптоматика зависят от локализации инфекции. Характерной особенностью всех заболеваний, вызванных Pseudomonas aeruginosa, является длительное течение при хронической форме и острая форма, которая лечится так же трудно, как и хроническая, поскольку бактерия обладает высокой резистентностью к антимикробным препаратам. Так, она может стать возбудителем энцефалита, цистита, пневмонии или остеомиелита. Она способна размножаться в кишечнике, среднем ухе, абсцессах и ранах.

Лабораторная диагностика синегнойной палочки не представляет трудностей, поскольку синегнойная палочка хорошо растет на различных питательных средах.

Выделение на питательной среде чистых культур микроорганизмов с характерными для псевдомонад культуральными, морфологическими и тинкториальными свойствами требует постановки целого ряда подтверждающих тестов, а, следовательно, значительного времени и материальных затрат.

Быстрота получения результатов при микробиологических исследованиях в значительной степени влияет на диагностику, проведение терапевтических и противоэпидемических мероприятий.

Алгоритм бактериологического исследования инфекций синегнойной палочки соответствует той же схеме, что и при заболеваниях, вызванных энтеробактериями. При нецеленаправленном исследовании выявления псевдомонад посев производят на любую из общепринятых питательных сред: 1,5% питательный агар, 5% кровяной агар, агар Эндо, и инкубируют посевы при температуре 37°С в течение 18-24 часов.

Известны питательные среды для дифференциации псевдомонад, принцип действия которых основан на способности P. aeruginosa синтезировать феназиновый пигменты - пиоцианин, флуоресцеин или пиовердин, а также другие пигменты (пиорубин, пиомеланин, аоксифеназин), но, не обладающие выраженным ингибирующим эффектом в отношении микробов ассоциантов, и, следовательно, не могут быть использованы для одноэтапного выделения псевдомонад.

В частности, среда Кинг А используется для дифференциации синегнойной палочки и усиления способности продуцировать сине-зеленый пигмент пиоцианин и образования некоторыми штаммами синегнойной палочки другого пигмента - пиорубина, дающий красное окрашивание [Методические рекомендации «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», Методические рекомендации «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)»].

Среда Хью-Лейфсена с глюкозой применяется для определения способности псевдомонад окислять глюкозу до глюконовой кислоты только в аэробных условиях. При положительной реакции происходит порозовение среды в столбике среды в аэробных условиях, при отсутствии роста и изменения цвета среды в анаэробных условиях [Методические рекомендации «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала»,Методические рекомендации «Обнаружение и идентификация Pseudomonasaeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)»].

Среда с ацетамидом так же является дифференциальной средой для синегнойной палочки, основанный на ее способности использовать ацетамид в качестве единственного источника азота и углерода [Методические рекомендации «Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала», Методические рекомендации «Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)»].

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является питательная среда для выделения синегнойной палочки (ЦДХ агар) производства «Микроген» на основе пептона, с сульфатами калия и магния, углекислым натрием, фенозан-кислотой, цетилпиридинием хлористым и агаром, обеспечивающая рост псевдомонад и продуцирование пиоцианина (феназиновый пигмент, окрашивающий питательную среду в сине-зеленый цвет), а также ингибицию ряда сопутствующих грамположительных и грамотри цательных микроорганизмов. [ПРИКАЗ от 22 апреля 1985 года N 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений», ГФ XIV т. 1 (ОФС. 1.2.4.0002.18].

Биохимические характеристики коммерческой сухой питательной среды (производства «Микроген») для выделения синегнойной палочки представлены в таблице 2.

Недостатками ЦПХ агара (производства «Микроген»)являются:

- отсутствие отечественного производства фенозана и его производных, и высокая стоимость импортного препарата;

- слабые селективные свойства в отношении сопутствующей микрофлоры (сальмонелл, протея и клебсиелл)

- сниженная чувствительность среды в отношении псевдомонад, ввиду высокой концентрации N-цетилпиридиния хлористого.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание отечественной сухой питательной среды для выделения псевдомонад, обладающей высокой чувствительностью, стабильностью результатов по ростовым, дифференцирующим и ингибирующим свойствам с целью обеспечения доступности и получения объективных результатов бактериологического контроля, сокращающих время и материальные затраты при лабораторных исследованиях.

Технический результат достигается тем, что предложена питательная среда, содержащая в качестве источника азотистого питания панкреатический гидролизат рыбной муки, сульфаты калия и магния, фосфаты калия и натрий углекислый в качестве стабилизатора рН, N-цетилпиридиний хлористый в качестве ингибитора, комплекс антиоксидантов - фенозан кислота и бутилгидрокситолуол, агар бактериологический при следующем содержании компонентов:

- Панкреатический гидролизат рыбной муки 20,0±3,0 г
- Калий сернокислый 7,6±0,76 г
- Магний сернокислый 7-водный 2,4±0,24 г
- Калий фосфорнокислый однозамещенный 1,0±0,1 г
- Калий фосфорнокислый двузамещенный 1,0±0,1 г
- Фенозан-кислота 0,025±0,0025 г
- Бутилгидрокситолуол 0,075±0,0075 г
- N-цетилпиридиний хлористый 1 водн (ЦПХ) 0,2±0,05 г
- Агар бактериологический 9,0±2,0 г
- Натрий углекислый 0,2±0,05 г
- Дистиллированная вода 1000 мл

Питательная среда для выделения синегнойной палочки представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л.

Совокупность компонентов, входящих в состав среды обеспечивает питательные потребности для роста псевдомонад с образованием пигментов. N-цетилпиридиний хлористый в предложенной концентрации 0,2 г/л (в среде прототипе 0,3 г/л) подавляет рост возможных бактерий ассоциантов и при этом не влияет на чувствительность среды и способность псевдомонад к пигментообразованию. Комплекс антиоксидантов (фенозан кислота и бутилгидрокситолуол) предотвращает окисление жирорастворимых витаминов А и Е, помогает вырабатывать больше необходимой клеткам энергии, способствует накоплению биомассы. При изучении селективных свойств среды без добавления N-цетилпиридиния хлористого и мягкой стерилизации кипячением было отмечено, что на среде с комплексом антиоксидантов в отличие от одного фенозана, полностью подавляется возможный поверхностный и глубинный пророст микрофлоры, присутствующей в сырье. Среда стерилизуется кипячением до полного расплавления агара.

Проведены исследования по определению оптимума рН среды, влиянию на выделение псевдомонад фенозан-кислоты и бутилгидрокситолуола, влиянию магния сернокислого, калия сернокислого на пигментообразование, влиянию различных концентраций N-цетилпиридиния хлористого совместно с комплексом антиоксидантов на ростовые и ингибирующие свойства предлагаемой питательной среды.

По результатам работ составлена пропись питательной среды для выделения синегнойной палочки и установлено количественное содержание компонентов в г.

Отличием предлагаемой среды от прототипа является использование комплекса антиоксидантов и фосфатов калия, уменьшенная концентрация N-цетилпиридиния хлористого. Технический результат достигается также сбалансированностью компонентного состава среды в экспериментально установленных концентрациях. Доказана возможность использования панкреатического гидролизата рыбной муки (ПГРМ), в качестве белковой питательной основы. Количественное соотношение компонентов питательной среды, рН, обеспечивают сохранение хороших ростовых и ингибирующих свойств. Готовая среда сохраняет стерильность не менее 10 суток.

Пример 1. Способ получения питательной среды.

Для приготовления среды берут навески следующих ингредиентов, г/л:

- Панкреатический гидролизат рыбной муки 17,0
- Калий сернокислый......... 6,84
- Магний сернокислый 7-водный......... 2,16
- Калий фосфорнокислый однозамещенный...... 0,9
- Калий фосфорнокислый двузамещенный...... 0,9
- Фенозан-кислота...... 0,0225
- Бутилгидрокситолуол... 0,0675
- N-цетилпиридиний хлористый 1 водн.... 0,15
- Агар бактериологический......... 7,0
- Натрий углекислый...... 0,15
- Вода дистиллированная 1000 мл

Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, стерилизуют кипячением в течение 2 мин. до полного расплавления агара.

Используемые для контроля среды тест-штаммы микроорганизмов получены из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКГГМ-Оболенск» ФБУН ГНЦ ПМБ.

Готовят стандартную взвесь культуры каждого тест-штамма, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П, с использованием стерильного 0,9% раствора натрия хлористого. Полученные взвеси культур десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида с 0,5 мл микробной взвеси) доводили до необходимых разведений: 10-6, 10-3 и 10-1 и использовали для контроля среды.

Посевы инкубировали при температуре (37±1)°С в течение 24-48 ч.

Предлагаемая среда, обеспечивает рост следующих тест-штаммов при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10-6 Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Pseudomonas aeruginosa 453, Pseudomonas aeruginosa 27/99, ингибицию при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого из тест-штаммов: Escherichia coli 3912/41 (055:К59), Proteus vulgaris ИХ 19 222 из разведения 10-3, Staphylococcus aureus Wood-46 из разведения 10-1 через 48 часов инкубации посевов при температуре (37±1)°С

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3.

Пример 2. Среду готовят в соответствии с примером 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки... 20,0
- Калий сернокислый...... 7,6
- Магний сернокислый 7-водный...... 2,4
- Калий фосфорнокислый однозамещенный...... 1,0
- Калий фосфорнокислый двузамещенный...... 1,0
- Фенозан-кислота... 0,025
- Бутилгидрокситолуол................................. 0,075
- N-цетилпиридиний хлористый 1 водн.... 0,2
- Агар бактериологический... 9,0
- Натрий углекислый............. 0,2
- Вода дистиллированная 1000 мл

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.

Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки... 23,0
- Калий сернокислый......... 8,36
- Магний сернокислый 7-водный...... 2,64
- Калий фосфорнокислый однозамещенный... 1,1
- Калий фосфорнокислый двузамещенный... 1,1
- Фенозан-кислота...... 0,0275
- Бутилгидрокситолуол............... 0,0825
- N-цетилпиридиний хлористый 1 водн.... 0,25
- Агар бактериологический...... 11,0
- Натрий углекислый............ 0,25
- Вода дистиллированная 1000 мл

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.

Пример 4. Среду готовят в соответствии с примером 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки... 14,0
- Калий сернокислый............... 6,08
- Магний сернокислый 7-водный...... 1,92
- Калий фосфорнокислый однозамещенный... 0,8
- Калий фосфорнокислый двузамещенный...... 0,8
- Фенозан-кислота............... 0,02
- Бутилгидрокситолуол............... 0,06
- N-цетилпиридиний хлористый 1 водн. 0,1
- Агар бактериологический............ 5,0
- Натрий углекислый.... 0,1
- Вода дистиллированная 1000 мл

Нарушение количественного соотношения ингредиентов среды ведет к ухудшению ростовых свойств в отношении псевдомонад и ингибирующих свойств к микробам ассоциантам.

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3.

Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 1.

- Панкреатический гидролизат рыбной муки...... 26,0
- Калий сернокислый............... 9,12
- Магний сернокислый 7-водный......... 2,88
- Калий фосфорнокислый однозамещенный... 1,2
- Калий фосфорнокислый двузамещенный...... 1,2
- Фенозан-кислота............ 0,03
- Бутилгидрокситолуол............ 0,09
- N-цетилпиридиний хлористый 1 водн.... 0,3
- Агар бактериологический......... 13,0
- Натрий углекислый............ 0,3
- Вода дистиллированная 1000 мл

Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и показывают ухудшение ростовых свойств среды для выделения псевдомонад.

Из таблиц видно, что предлагаемая питательная среда в соответствии с примерами 1, 2, 3 обладает высокой чувствительностью, стабильностью ростовых свойств и пигментообразования в отношении псевдомонад, подавляет рост сопутствующих микроорганизмов. Изменение количественного соотношения компонентов среды ведет к нарушению биологических показателей качества предлагаемой селективной среды для выделения псевдомонад.

Так, в случае приготовления среды в соответствии с примером 4 наблюдается увеличение диаметра колоний контрольных тест-штаммов псевдомонад, колонии приобретают R -форму, а также наблюдается роение протея. В случае приготовления среды в соответствии с примером 5 - снижается чувствительность среды в отношении штамма Pseudomonasa eruginosa АТСС 9027 (NCTC 12924), уменьшается размер колоний.

Таким образом, по сравнению со средой прототипом предлагаемая питательная среда является отечественной, конкурентоспособной средой для селективного выделения и дифференциации псевдомонад, обладает высокой чувствительностью и пигментообразованием, обеспечивает ингибицию сопутствующей микрофлоры

Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa, содержащая питательную основу, сернокислые магний и калий, N-цетилпиридиний хлористый, фенозан-кислоту, натрий углекислый и агар бактериологический, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, дополнительно содержит бутилгидрокситолуол для повышения селективности и усиления чувствительности среды в отношении псевдомонад, в качестве стабилизаторов рН среды - калий фосфорнокислый однозамещенный и калий фосфорнокислый двузамещенный при следующем содержании компонентов:

панкреатический гидролизат рыбной муки 20,0±3,0 г
калий сернокислый 7,6±0,76 г
магний сернокислый 7-водный 2,4±0,24 г

калий фосфорнокислый однозамещенный 1,0±0,1 г

калий фосфорнокислый двузамещенный 1,0±0,1 г

фенозан-кислота 0,025±0,0025 г
бутилгидрокситолуол 0,075±0,0075 г

N-цетилпиридиний хлористый 1 водный 0,2±0,05 г

агар бактериологический 9,0±2,0 г
Натрий углекислый 0,2±0,05 г
вода дистиллированная 1000 мл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, экологии, охране окружающей среды. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений в водной среде при температуре от +20 до -2,5°С и солености 30±10 г/л.

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано при выращивании цыплят-бройлеров. Способ сохранения продуктивных качеств и жизнеспособности цыплят-бройлеров предусматривает введение в состав рациона птицы комплекса СибМОС ПРО в дозе 1,5 кг/т корма и введение фитобиотика Концентрат витаминный хвойный в воду в дозе 1 мл/л воды.
Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования Yersinia pestis EV, содержащая пермеат из ретентанта ферментативного гидролизата кукурузной патоки жидкой, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12%, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для моделирования дормантного статуса М. tuberculosis в условиях in vitro.

Изобретение относится к биотехнологии. Предлагается штамм микроводорослей Chlorella vulgaris, депонированный в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт физиологии растений им.
Изобретение относится к микробиологии, в частности к бактериологии. Штамм Escherichia coli O144:Н45, характеризующийся отсутствием генов, кодирующих факторы патогенности, специфичных для Shigella spp.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения уровня заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium возбудителей питиозной, фузариозной и обыкновенной корневых и прикорневых гнилей сельскохозяйственных культур.

Генотерапевтический днк-вектор на основе генотерапевтического днк-вектора vtvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов col1a1, col1a2, bmp2, bmp7, для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и применения, штамм escherichia coli scs110-af/vtvaf17- col1a1 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17- col1a2 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17- bmp2 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17- bmp7, несущий генотерапевтический днк-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического днк-вектора // 2707537
Изобретение относится к генной инженерии. Описан генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7, для повышения уровня экспрессии этого целевого гена в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-COL1A1, или VTvaf17- COL1A2, или VTvaf17- ВМР2, или VTvaf17-ВМР7 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2 или SEQ ID №3 или SEQ ID №4 соответственно.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Rhodococcus ruber ИЭГМ 346, обладающий способностью полностью деструктировать диклофенак натрия, депонирован в Национальном биоресурсном центре - Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (НБЦ ВКПМ) ФГБУ ГосНИИгенетика НИЦ «Курчатовский институт» под регистрационным номером ВКПМ Ас-2106.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой вакцину против чумы, парвовирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза.

Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, экологии, охране окружающей среды. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений в водной среде при температуре от +20 до -2,5°С и солености 30±10 г/л.

Изобретение относится к медицине и биотехнологии. Предложен способ получения бруцелезного антигена.
Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования Yersinia pestis EV, содержащая пермеат из ретентанта ферментативного гидролизата кукурузной патоки жидкой, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12%, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для моделирования дормантного статуса М. tuberculosis в условиях in vitro.
Изобретение относится к микробиологии, в частности к бактериологии. Штамм Escherichia coli O144:Н45, характеризующийся отсутствием генов, кодирующих факторы патогенности, специфичных для Shigella spp.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к штамму бактерий Leptospira interrogans серогруппы Canicola серовара canicola для детекции антител к L. canocola.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Rhodococcus ruber ИЭГМ 346, обладающий способностью полностью деструктировать диклофенак натрия, депонирован в Национальном биоресурсном центре - Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (НБЦ ВКПМ) ФГБУ ГосНИИгенетика НИЦ «Курчатовский институт» под регистрационным номером ВКПМ Ас-2106.

Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, калий сернокислый, магний сернокислый 7-водный, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, фенозан-кислоту, бутилгидрокситолуол, N-цетилпиридиний хлористый 1 водный, натрий углекислый, агар бактериологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет получать объективные результаты бактериологического контроля, сократить время культивирования бактерий рода Pseudomonas. 3 табл., 5 пр.

Наверх