Патент ссср 283950
ю, I
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
283950
Ones Соввтвкит
Сввивлиотичвокик
Рвооублкк
К ПАТЕНТУ
Зависимый от патента №
Кл. 53е, 6/01
6а, 22/04
МПК А 23с 9/12
С 12g 13/10
Заявлено 02.XI1.1966 (Ж 1115336/28-13) Приоритет 02.XII.1965, № 51270/65.
Великобритания
Моттитвт во долам
«зобрвтвннй II открытий при Совете Министров
СССР
УДК 637.333.1:576.8.093.1 (088.8) Опубликовано 06.X.1970. Бюллетень № 31
Дата опубликования описания 23.XII.1970
Автор изобретения
Иностранец
Кнуд Аунструп (Дания) Иностранная фирма
«Ново Терапеутиск Лабораториум А/С» (Дания) Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО HPEHAPATA ДЛЯ
КОАГУЛЯЦИИ БЕЛКОВ МОЛОКА ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ СЫРА
Для коагуляции белков молока при производстве сыра обычно применяют сычужные ферменты, добываемые из телячьих желудков, Эти ферменты отвечают предъявляемым к ним требованиям, обеспечивают достаточный выход сыра и хорошее качество его. Однако возрастающий спрос на них опережает возможности. Это заставляет изыскивать микрооргани змы, продуцирующие ферментные препараты, коагулирующие белки молока.
Такие микроорганизмы, например Bacillus
subtilis u Aspergillus saitoi, известны.
Известен также способ получения ферментного препарата, коагулирующего белки молока, путем выращивания указанных выше микроорганизмов глубинным или поверхностным способом на питательной среде, содержащей источники углерода с добавлением необходимых минеральных солей и стимуляторов роста.
Для получения ферментного препарата, обеспечивающего более качественное проведение процесса коагуляции и изготовление сыра с высокими органолептическими и биохимическими свойствами в качестве продуцирующих ферментов используют штаммы группы
Nucor miehei Кунея и Эмерсона, из которых предпочтительным является штамм Mucor mieЫ Кунея и Эмерсона СВ$370.65. Этот штамм был выделен из компоста, собранного в Копенгагене в сентябре 1965 r., идентифицирован
Центральным бюро в Баарне (Голландия) как входящий в группу Mucor miehei Кунея и
Эмерсона и зарегистрирован под номером
370.65.
Штамм характеризуется следующими морфологическими признаками. Turf короткий (высота 2 — 3 лл), вначале белый, а затем—
I0 от светлого мышино-серого до темного мышино-серого цвета. Sporangiophores, диаметр
6 — 10 ллк. Sporangia сферичекие, диаметр
25 — 60 ллк. Соlшпеll ае от полукруглых до овальных, диаметр 20 — 40 ллк. Sporangiospo15 тез бесцветные от полушаровидных до эллиптически.; (размеры 3 — 5 ;4 — 6 ммк) . Zygospores многочисленные, полушаровидные, бородавчатые от желтоватого до красноватого цвета в молодом возрасте, черноватые в зре20 лом возрасте (диаметр 30 — 45 ллк). Azygospores имеются. Gemmae не известны. Рост происходит,при температуре 30 — 55 С и очень быстрый — при 40 С.
Пример 1. Применяют питательную сре25 ду следующего состава (в г/л): крахмал,картофельный 40, соевая мука 30, ячменная мука
100 и углекислый кальций 5. Соевое масло добавляют в количестве 0,5 лл/л, Активность фермента после выращивания в течение
Состав среды, г/л рН после выращивания в течение
PJo
Ю о
К о а,ы
o, 0_#_ О (У
6" ъ о и
f»
Р и
Ф
col o» щ о È ойдо
= о
Р, и с
М а х Ъ Сф
М о o
;, а
crt
С4
О Б
&3 4 среФ д сб о о, их о» х дней
7 дней
8 дней
6 дней
8 дней
7 дней ды
6,9
7,1
6,8
6,5
6,7
6,8
6,0
6,4
6,3
7,0
7,2
7,5
6,9
6,8
6,9
6,7
6,2
6,3
6,1
6,1
7,0
6,1
6,0
6,2
6,1
6,2
5,9
15,4
10,7
11,9
19,2
17,8
13,2
13,3
14,8
14,0
17,2
14,6
13,8
21,2
18,2
14,6
12,9
16,7
15,4
13,5
9,7
11,5
13,6
13,6
12,0
2,6
7,1
4,9
97
26
62
63
100
100
50
10
В три колбы Эрленмейера, емкостью при
500 мл каждая, вносят,по 100 мл этой питательной среды и инокулируют суспензией спор
Mucor mehei. Колбы выдерживают на качающемся столе 7 дней при температуре 30 С.
Мицелий отфильтровывают и определяют активность методом Кунитца, Активность фермента (в единицах Кунитца на 1 л среды) составляет: в первой колбе
15800, во второй — 17700, третьей — 15700.
При м ер 2. В чане для посева готовятпитательную среду, состоящую из 2 кг,картофельного крахмала, 1,5 кг соевой муки, 5 кг ячменной муки, 5 г вактераильной амилазы
«Novo 5000 SKB», 500 г углекислого кальция и около 40 л воды.
Смесь нагревают до 70 С и выдерживают при этой температуре 30 мин. Затем ее кипятят острым паром в течение 90 мин при 120 С.
Охлаждают до 34 С, инокулируют спорами .из колбы Фернбаха.
Для выращивания спор в колбу предварительно помещают среду, состоящую из 4 г дрожжевого экстракта, 1 г К IPO4, 0,5 г
MgSO4 ° 7Í20, 15 г растворимого крахмала, 20 г агара и 100 мл воды. Среду инокулируют лиофилизированной культурой Mucor miehei и выращивают при 40 С до образования спор.
После выращивания эту среду перемешивают со скоростью 240 об/мин и аэрируют со скоростью 60 л/мин. Длительность ферментации 48 час.
Содержимое чана переносят в основной ферментационный чан, в котором находится пиП,р и м е р 4. Коагулирующне молоко ферменты при применении Mucor pusillus получены в .количестве около 300 единиц Кунитца на
1 л среды 95 см, а при применении Mucor miehei CBS 370.65 количество полученных энзимов составило примерно 10000 единиц Кунитца на 1 л среды или значительно больше.
При,применении среды, состоящей из 10% снятого молока, 1% глюкозы, 0,1% дрояяевого экстракта и 0,005 М хлористого кальция, получены следующие результаты. Активность
Mucor pusillus составляет 900 единиц Кунитца на 1 л среды, а активность Mucor miehei тательная среда, состоящая из 8 кг картофельного,крахмала, 6 кг соевой муки, 20 кг ячменной муки, 25 г бактериальной амилазы
«Novo 5000 $КВ» и 2 кг углекислого кальция.
Среду разливают в бутылки и стерилизуют так яе, как среду в чане для инокуляции.
Конечный объем среды составляет 200 л.
После,инокуляции среду перемешивают со скоростью 400 об/мин и аэрируют со ско)0 ростью 0,2 ма/мин. Для предотвращения вспенивания вносят соевое масло. Во время ферментации величина рН не меняется и равна
6,5.
Активность, полученного фермента 2580 еди15 ниц Кунитца на 1 л среды.
Пример 3. В колбе Эрленмейера, емкостью по 500 мл каждая, вносят по 100 мл питательной среды (состав приведен в таблице) и инокулируют ее суспензией спор, полу20 ченных,при культивировании Mucor miehei на среде, состоящей из 4 г дрожжевого экстракта, 1 г К2НРО4, 0,5 г MgSO4.7Н О, 15 г растворимого крахмала, 20 г агара и 1000 мл воды, в течение 2 — 3 дней при температуре
40 С.
Инокулированную среду выращивают при
30 С на вращающемся со скоростью
240 об/мин столе (продолжительность выращивания 6,7 и 8 дней).
Активность коагулирующих молоко ферментов определяют по Кунитцу.
Из всех примененных сред только крахмал разложился при воздействии бактериальной амилазы до стерилизации (см. таблицу).
СВ$37065 — 5500 единиц Кунитца на 1 л cÐeды, 55 Пример 5. Поверхностное культивирование.
В колбах Эрленмейера емкостью 500 мл сте* рилизуют 25 г смеси пшеничных отрубей и воды (1:1) при нагревании да 120 С в тече60 ние 45 мин. После охлаждения содержимое инокулируют спорами Мпсог miehei CBS
370.65. Выращивают 3 дня лри температуре
40 С. После этого отруби экстрагируют 200 мл воды. Активность экстракта составляет 4500
65 единиц Кунитца на 1 л среды, 283950
Предмет изобретения
Составитель M. Андреева
Корректор Т. А. Уманец
Редактор Н. Вирко
Заказ 3651/14 Тираж 480 Подписное
Ц1-1ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, K-35, Раушская наб., д. 4(5
Типография, пр. Сапунова, 2
Способ получения ферментного препарата я коатуляции белков молока при производее сыра путем выращивания продуцирую х этот препарат. микроорганизмов глубин м или поверхностным спосо бом на питательй среде, содержащей источники углерода с бавлением необходимых минеральных солей стимуляторов роста, отличающийся тем, что, целью получения ферментного препарата, 6 обеспечивающего более качественное проведе- ние процесса коагуляции и изготовление сыра ,с высокими органолептическими и биохими:ческими свойствами, в .качестве продуцирую5 щих ферменты микроорганизмов используют штаммы группы Nucor miehei Кунея и Эмерсона.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, из группы Mucor miehei Кунея и Эмерсона ис1Q пользуют предпочтительно штамм Mucor miehei Кунея и Эмерсона СВ$ 370.65.
