Способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты
Союз Советских
Социалистиче@кик
Республик
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт, свид-ву(22) заявлено 030478 (21) 2598247/23-04 (51)IVY. Кл.
G 01 N 33/15 с присоединением заявки Ио (23) Приоритет
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано 2 3,1 2.8ЦБкзллетень Ио 4 7
Дата опубликования описания 23. 12. 80 (5З) УДК 543.432 (088.8) А.А.Хабаров, С.И.Вайстух и Л.И. поваляева т: .-:; >
Ф
/:"
i." !
/ „. . :,:
Читинский государственный медицй Ч кий, институт
) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
2,3-ДИОКСИБЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ
Изобретение относится к аналигической химии, а именно к способам зпределения 2,3-диоксибензойной кислоты в лекарственных формах и биоло гических жидкостях при фармацевтичес- З ких, биохимических и токсикохимических исследованиях.
Известен способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты, заключающийся в титровании 1Î анализируемой пробы едким натром в присутствии фенофлталеина $1(.
Недостатками данного способа является низкая чувствительность и неспецифичность определения.
Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты, заключающийся в 2О обработке пробы анализируемого вещества хлоридом железа в кислой среде с последующим колометрированием полученного соединения (2).
Недостатки этого способа состоят 25 в невысокой чувствительности
6 00 мг/мл) и неселективности.
Цель изобретения — повышение чувствительности и специфичности способа определения. 30
Поставленная цель достигается тем, что в способе количественного определения 2,3-диоксибензойной кис лоты в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия и обработку ведут в присутствии этилового спирта с последующим измерением флуоресценции полученного при этом раствора °
Способ осуществляется следующим образом.
Пример 1. 0,1 г (точная навеска) мелкоизмельченных таблеток переносят в мерную колбу емкостью
100 мл, прибавляют 50-60 мл этилового спирта и энергично встряхивают
3-5 мин. Затем заливают спиртом до метки и тщательно перемешивают. К 1
1 мл полученного раствора прибавляют
1 мл 1%-ного раствора хлорида алюминия и 2 капли 2 н. раствора соляной . кислоты, замеривают интенсивность флуоресценции. Содержание 2,3-диоксибензойной кислоты рассчитывают по калибровочному графику, для чего отмеривают 0,1; 0,5; 1,0, 1,5, 2,0 мл стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мг/мл, добавляют по
789750
1 мп 1%-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты и доводят объем всех растворов до 10 мп этиловым спиртом.
Флуориметрируют одновременно с раствором исследуемых образцов. По резульТаблица 1
Навеска, г
Количество 2-3-диоксибензойной кислоты
Метроологические характеристики
Х = О. 4997
О = + 0,0143
Д о = 0,0102 а = 0,49971+ 0,0102
Пример 2. Определение 2,3диоксибензойной кислоты в крови.
К 0,1 мл крови добавляют 0,9 мп этилового спирта, хорошо перемешива- yg ют и центрифугируют 3-4 мин. К 1 мп центифугата добавляют 1 мл 1 %-ного раствора хлорида алюминия, 8 мл этилового спирта, 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, перемешивают.
Флуориметрируют со стандартными образцами, которые готовят следующим образом: в ряд пробирок отмеривают
0,1; 0,5; 1,0; 1,5,и 2,0 м стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содер- 4$ жанием 100 мкг/мп, добавляют по 1 мп, 1 %-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, доводят объем каждой пробирки до 10 мл, перемешивают и флуо- $0 риметрируют одновременно с исследуемыми растворами.
Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислоты прфцставлены в табл. 2. 55
Пример 3. Определение 2,3диоксибензойной кислоты в моче.
1 мп мочи разбавляют до 10 мл этиловым спиртом, хорошо перемешивают, центрифугируют 3-4 мин при 40
3000.об/мин. К 1 мп полуЧенного раст вора прибавляют 1 мл 1%-ного,раствора хлорида алюминия, 8 мл этилового спирта и 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, измеряют интенсив
Т а б л и ц а 2
Время нахождения, ч в моче, Г в крови, мкг/мл
0,485 (всего)
4,2
0,5
16,2
10,0
0,0442
0,0414
0,0415
0,0414
0,0426
0,0397
0,0419
0,415
0,430
0,0426
0,5260
0,4928
0,4940
0,4928
0,5071
0,4726
0,4988
0,4940
0,5119
0,5071 татам этих измерений строят калибровочный график.
Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислоты в таблетках по 0,5 г представлены в табл. 1. ность флуорисценции. Содержание
2,3-диоксибензойной кислоты рассчитывают по калибровочному графику, для чего в ряд пробирок отмеривают
0,1", 0,5, 1,0," 1,5, 2, 0 мл стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мп, добавляют го 1 мп
1 %-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, добавляют объем каждой пробирки до 10 мп, перемешивают, флуориметрируют одновременно с исследуемыми растворами.
Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислоты в крови и моче при назначении по 0,5 г в виде таблеток представлены в табл. 2.
Содержание 2,3-диоксибензойной кислоты
789750
Продолжение табл. 2
Продолжение табл, 2
О, 180
О, 140
0,091
0,042
0,014
0,007
0,002
24
15
Таблица 3
Относительная интенсивность флуресценции, Ъ
1 2 3 4 2, 3
78
50 0 3
60,0 5
70,0 8
11,0 11
0,01 0 1 1,0 10,0
0,03 0,3 3,0 20,0
42
96
0,05 0,5 5,0 30,0
91
77
80,0
0,07 7,0 40,0
91
17
15,0
0,1 1,0 10,0 50,0
90,0
100,0
Продолжение табл. 4
0,01
80
0,02
0,03
0,04
Таблица 4
Относительная интенсивность 55 флуоресценции,Ъ
Концентрация хлорида алюминия, г/мл
0,001
0,005
61
Концентрация 2, 3-диоксибензойной кислоты, мкг/мл
При изучении оптимальных условий 35 проведения флуоресцентной реакции на 2,3-диоксибензойную кислоту установлено, что прямая зависимость интен сивности флуоресценции от концентрации 2,3-диоксибензойной кислоты наблюдается при концентрации последней
0,01-50 мкг/мп.
Чувствительность реакции достаточно высокая, что позволяет проводить определения препарата в лекарственных формах и биологических жидкостях без отделения. сопутствующих компонентов. Определения проводят на электронном флуориметре ЭФ-ÇMA.
Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации хлорида алю- 0 миния представлена в табл. 4.
Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации 2,3-диоксибензойной кислоты представлена в табл. 3.
Концентрация раствора хлористого алюминия, используемого для обработки анализируемой пробы, составляет
0,000001-0,1 г/мл, оптимальная концентрация - 0,01 — 0,03 г/мл.
Интенсивность флуоресценции зависит также от концентрации соляной кислоты, количества соляной кислоты, времени и ультрафиолетового света.
Данные зависимости представлены, соответственно, в табл. 5,6,7 и 8.
789750
Таблица 5
0,5
73
1,0
80
2,0
77
38
Таблица 6
Продолжение
Количество 2 н. соляной кислоты, капли
Относительная интенсивность флуоресценции, Ъ
75
70
120
75
Таблица 8.82
Относительная интенсивность флуоресценции, Ъ
Продолжитель— ность действия ультрафиолетового света, мин
85
70
Сразу
86
Т аблица 7
10
15
20
30
70 разу
40
0,5
50
63
75
78
77
76
Концентрация соляной кислоты, н.
Относительная интенсивность флуоресценции, %
Исследуют состав полученного внутрикомплексного соединения методом изомолярных серий и методом отношения наклонов, изучают спектральные характеристики.
Состав внутрикомплексного соединения 2,3-диоксибензойной кислоты с хлоридом алюминия методом иэомолярных серий представл ен в табл „9.
789750
10 таблица 9
Состав соединения, мл
Относительная интенсивность флуоресценции, Ъ
Хлорид алюминия при концентрации при концентрации при концентрации
10-4
1 ° 104 0 5 ° 10
1 ° 10
5, 10-4
5,0
1,0
0,5
9,0
4,5
2,0
1,0
8,0
4,0
25
3,0
1,5
7,0
3i5
33
6,0
4,0
2,0
3,0
73
2,5
5 0
5,0
2,5
50
6,0
3,0
4,0
2,0
55
7,0
3 5
3,0
1,5
62
8,0
2,0
4,0
1,0
4,5
1,0
9,0
0,5
73
5,0
10,0 концентрации 1 10 методом отношения наклона представлен в табл.10.
Состав внутрикомплексного соединения 2,3 - диоксибензойной кислоты с хлоридом алюминия при
Таблиц а 10
Состав соединения,мл хлорид алюминия хлорид алюминия
1 2 3
27 5,0
1,0
5,0
1,0
2,0
5,0
2,0
5 0
3,0
5 0
4,0
3,0
5,0
4,0
4,0
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
0,5
0,5
2,5
2,5
58
2,5
2 5
1,0
1,0
2,5
1 5
1,5
3,5
2,5
2,0
2,5
2,0
2,5
2,5
2,5
2,5
2,3-диоксибенэойная кислота
Состав соединения, мл
2,3-диоксибензойная кислота
От носитель ая инте н ивность
Флуоресенции, Ъ
2,3-диоксибенэойная кислота
От носительная интенсивность флуоресценции,Ъ
789750
Формула изобретения
Составитель С.Хованская
Редактор И.Михеева Техред М.Кузьма Корректор И.Макаренко
9025/38 Тираж 1019 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035,Москва,Ж-35,Раушская наб;,д.4/5
Заказ
Филиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4
Способ количественного определеления 2,3-диоксибензойной кислоты путем обработки пробы анализируемого вещества неорганическим реагентом в кислой среде, отличающий с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия, обработку ведут в присутствии этилового спирта с последующим измерением флуоресценции полученного раствора.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1, Временная фармакопейная статья
42/-469-75.
2. Коренман И.М. Фотометрический анализ. N., 1975, с. 264-276 (прототип) .
