Устройство для получения сухого обезжиренного вещества фрагментов ткани и клеток

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОЬЕИтЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ i11644498

Сове Соввтских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 23.08.76 (21) 2399166/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.01.79. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 30.01.79 (51) М. Кл.

В 010 11/02

G 01N 1/28

Государственный комитет (53) УДК 611.018 (088.8) ло делам изобретений и открытий

1

3 (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО

ОБЕЗЖИРЕННОГО ВЕЩЕСТВА ФРАГМЕНТОВ ТКАНИ

И КЛЕТОК

Изобретение относится к медицине, а именно, к области количественного цитохимического и гистохимического анализа и может быть использовано в количественной цитохимии и гистохимии ферментов.

Известно устройство для получения сухого обезжиренного вещества фрагментов ткани и клеток, содержащее вакуумную камеру, экстрактор внутри вакуумной камеры, состоящий из корпуса с ячейками и 1р крышки (1, 2).

Недостаток устройства состоит в том, что его конструкция не позволяет после экстракции липидов удалять растворитель, находящийся в жидком состоянии, из всех 15 ячеек экстрактора одновременно; для обеспечения одновременности удаления растворителя из всех ячеек необходимо испарять растворитель в вакууме, в связи с чем первоначально растворенные в органиче- 2р ском растворителе липиды, экстрагированные из вещества клетки; остаются после испарения растворителя на внутренней поверхности ячеек экстрактора.

Недостаток конструкции известного уст- 25 ройства вынуждает: 1) во время осуществления процесса получения обезжиренного сухого вещества дважды (после первого и второго цикла операций) переносить фрагменты клеток из ячеек, содержащих экс- Зр

2 трагированные липиды, в чистые ячейки для выполнения операций следующего цикла, значительно увеличивая тем самым трудоемкость известного способа и снижая степень его надежности в результате возникновения риска потери фрагментов клеток во время процедуры их переноса;

2) после завершения процесса получения обезжиренного сухого вещества — удалять экстрагированные липиды из ячеек экстрактора для предотвращения их накопления, ведущего при дальнейшем использовании устройства к неполной экстракции липидов из клетки и к адгезии вещества клетки к поверхности ячейки после испарения растворителя в вакууме.

Целью изобретения является ускорение процесса получения сухого вещества и устранение его потерь.

Поставленная цель достигается тем, что корпус экстрактора снабжен вкладышем с отверстиями, в которые вставлены ячейки с пористым дном, причем стенки ячеек расположены ниже уровня их дна.

На фиг. 1 изображено устройство для получения сухого обезжиренного вещества фрагментов ткани и клеток; на фиг. 2— экстрактор с частичным разрезом.

Устройство состоит из вакуумной камеры и находящегося внутри нее экстракто6

3 ра. Вакуумная камера (фиг. 1) имеет корпус 1 с краном 2 и крышкой 3, снабженной наружным штуцером 4 с краном 5 и внутренним штуцером 6. К внутреннему штуцеру 6 крышки 3 с помощью вакуумной трубки 7 подсоединен своим штуцером 8 экстрактор 9. Посредством наружного штуцсра 4 крышки 3 вакуумная камера соединена с системой вакуумирования. Экстрактор

9 (фиг. 2) состоит из снабженного штуцером 8 корпуса 10 и вкладыша 11, выполненных из прочного некоррозионного материала, и прозрачной крышки 12. Вкладыш

11 разделяет экстрактор 9 на верхний 13 и нижний отдел 14 (жиросборник) и имеет отверстия, в которые вставлены изготовленные, например из стекла, ячейки 15. Дно 16 каждой ячейки 15 изготовлено из пористой пластинки, например стеклянной, имеющей поры диаметром, например 5 — 10 мк. Стенки ячеек 15 выступают за уровень дна 16 и входят в нижний отдел экстрактора 9— жир осборник, сообщающийся с каналом штуцера 9. Прозрачная крышка 12, которая закрывает экстрактор 9, прижимается к верхней поверхности вкладыша 11 и может быть сдвинута в горизонтальной плоскости в сторону штуцера 8, открывая доступ к ячейкам 15. После присоединения вакуумной камеры с помощью наружного штуцера 4 крышки 3 к системе вакуумирования с последней через наружный штуцер

4 и внутренний штуцер 6 крышки 3, штуцер

8, жиросборник, поры дна 16 ячеек 15 и верхний отдел 13 экстрактора 9 сообщается внутреннее пространство вакуумной камеры. 1 аким образом, находящийся в вакуумной камере экстрактор 9 так соединен с системой вакуумирования, что откачка воздуха из внутреннего пространства вакуумной камеры осуществляется только через верхний отдел I3 экстрактора 9 и поры дна 16 ячеек 15 экстрактора 9 и только по окончании фильтрования растворителя из ячеек 15.

Устройство работает следующим образом.

Пример получения обезжиренного сухого вещества отдельных фрагментов ткани например, слоев коры мозжечка крысы,— выделенных из лиофилизированных, толщиной 8 мк срезов мозжечка, и имеющих сухой вес 100 †3 нг. Экстрактор 9 извлекают из вакуумной камеры, помещают под микроскоп типа МБС-2, сдвигают крышку

12 экстрактора 9, открывая доступ к ячейкам-15, и каждый из фрагментов ткани помещают, контролируя процесс с помощью микроскопа, на дно 16 отдельной ячейки 15 экстрактора. Для экстракции липидов из тканевых фрагментов ячейки 15 заполняют органическим растворителем в количестве

25 микролитров, крышку 12 экстрактора, закрывая ячейки 15, задвигают до упора и проводят экстракцию в течение 5 мин при

65 комнатной температуре. Во время экстракции липидов крышку 3 вакуумной камеры посредством наружного штуцера 4 соединяют с системой вакуумирования и при открытом кране 5 крышки 3 и нормальном атмосферном давлении в системе вакуумирования к внутреннему штуцеру 6 крышки

3 с помощью вакуумной трубки 7 присосдиняют экстрактор 9. Затем на экстрактор

9 и крышку 3 надвигают корпус 1 вакуумной камеры, оставляя открытым кран 2 корпуса 1, до плотного соединения крышки

3 и корпуса 1, Кран 2 корпуса 1 закрывают и по истечении времени зкстргкции в системе вакуу мирования создают уменьшенное давление, под действием которого в жиросборник из ячеек 15 через поры их дна 16 фильтруется содержащий экстрагированные липиды растворитель. Обезжиренное вещество ткани остается на дне 16 ячеек 15 экстрактора. Б жиросборнике растворитель испаряется, а его пары удаляют из экстрактора при дальнейшем вакуумировании.

По окончании фильтрования растворителя, продолжая вакуумирование под контролем вакуумметра типа ВИТ-1Л, через поры дна 16 ячеек 15 отсасывают воздух из внутреннего пространства вакуумной камеры и в вакууме — условиях, исключающих абсорбцию влаги воздуха, — проводят сушку обезжиренного вещества тканевых фрагментов до достижения вакуума, равного 0,05 мм рт. ст. После чего кран 5 крышки 3 закрывают, вакуумную камеру отсоединяют от системы вакуумирования, открывают кран 2 корпуса 1, из корпуса 1 вакуумной камеры вынимают крышку 3 с зкстрактором 9 и экстрактор 9 отсоединяют от внутреннего штуцера 6 крышки 3. Экстрактор 9 помещают под микроскоп типа

МБС-2, крышку 12 экстрактора 9 сдвигают, открывая доступ к ячейкам 15, и ячейки вновь заполняют, контролируя процесс с помощью микроскопа, органическим растворителем, затем крышку 12 экстрактора задвигают, закрывая ячейки 15, и вновь проводят цикл операций. По окончании третьего цикла операций фрагменты ткани извлекают из ячеек зкстрактора.

Устройство позволяет удалять из всех ячеек экстрактора одновременно экстрагированные липиды вместе с растворителем в процессе получения обезжиренного сухого вещества, а нс после его завершения, что дает возможность избежать после первого и второго цикла операций необходимости переноса фрагментов клеток и ткани из ячеек, содержащих экстрагированные липиды, в чистые ячейки экстрактора и тем снизить трудоемкость способа и повысить его надежность в результате отсутствия риска потери фрагментов клеток и ткани во время процедуры их переноса, а также устранить необходимость удаления экстрагированных липидов из ячеек экстрак644498

12 гз 15 ур

Составитель Л. Стебелева

Техред С. Антипенко

Корректоры: Л. Тарасова и А. Галахова

Редактор Н. Грязнова

Заказ 2466/9 Изд. № 832 Тираж 876 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 тора после завершения процесса получения обезжиренного сухого вещества, обеспечив этим возможность многократного использования устройства, что особенно важно при проведении количественного цито- и гистохимического анализа большого числа клеток и фрагментов ткани.

Формула изобретения

Устройство для получения сухого обезжиренного вещества фрагментов ткани и клеток, содержащее вакуумную камеру, экстрактор внутри вакуумной камеры, состоящий из корпуса с ячейками и крышки, отличающееся тем, что с целью ускорения процесса получения сухого обезжиренного вещества и устранения его потерь, экстрактор снабжен вкладышем с отвер5 стиями, в которые вставлены ячейки с пористым дном, причем стенки ячеек выступают за уровень дна.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1о 1. Шиммельт Г., Методика электронной микроскопии, «Мир», М., 1972, с. 162.

2. Краснов И. Б. Экстракция липидов из отдельных изолированных нервных клеток, Цитология, 1974, т, 15, № 12, с. 1535,