Способ получения средства антипротеиназного действия
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА АНТИПРОТЕИНA3НОГр ДЕЙСТВИЯ путем фракционирования плазмы крови этанолом , вьшеления фракции III по Кону, добавления полиэтиленгликоля, переосазвдения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стерилизации целевого продукта, о т л и чающийся тем, что, с целью придания Средству поливалентного действия, добавляют к фракции III по Кону 14-18%-ный раствор полиэтиленгликоля при рН 7,5-8,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 50-56% этанола , затем удаляют осадок и к надосадочной жидкости добавляют соляную Чсислоту до рН 5,9-6,3. (П
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (19) (И) К 37/04
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21). 3217655/28-13 (22) 27.11.80 (46) 07.06.83. Бюл. В 21 (72) О.К. Гаврилов, В.М. Русанов, В.П. Мерзлов, T.A. Белова, В.Б.Хватов и Л.Н. Сарафанова (71) Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переЛивания крови и Ордена Ленина и ордена Трудового
Красного Знамени научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского (53) .615.361,018.51/55(088.8) (56) 1. Фром A.A ° и др. Белки плазмы и их фракционирование в производстве препаратов крови. М., "Медицина", 1974, с. 12, 81. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА
AHTHIIPOTEHHA3HOI О ДЕЙСТВИЯ путем фракционирования плазмы крови этано лом, выделения фракции I I I по Кону, добавления полиэ тилен гликоля, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стерилизации целевого продукта, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью придания средству поливалентного действия, добавляют к фракции 1I1 по Кону 14-18%-ный раствор полиэтиленгликоля при рН 7,5-8,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 50-56% этанола,затем удаляют осадок и к надосадочной жидкости добавляют соляную g кислоту до рН 5,9-6,3.
938447
Изобретение относится к области медицины, а именно гематологии и касается получения лечебного средства ингибитора протеиназ.
Известен способ получения средства антипротеиназного действия путем фракционирования плазмы крови этанолом, выделения фракции III no
Кону, добавления полиэтиленгликоля, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стерилизации целевого продукта (1 j.
Однако средство полученное известным способом обладает узким спектром антипротеиназного действия, то есть способно подавлять активность лишь одной или двух протеиназ.
Целью изобретения является придание средству поливалентного действия.
Это достигается тем, что при осуществлении способа получения средства антипротеиназного действия пу- $0 тем .фракционирования плазмы крови этанолом, выделения фракции III no
Кону, добавления полизтиленгликоля, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стери 25 лизации целевого продукта отличительной особенностью является то, что добавляют к фракции III по Кону 14-18Ъ-ный раствор полиэтиленглико ля прМ рН 7,5 — 8,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 50-56Ъ этанола, затем удаляют осадок и к надосадочной жидкости добавляют соляную кислоту до рН 5,9-6,3.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
Плазму крови человека фракционируют с помощью этанола, выделенный осадок III Кона замораживают и сохраняют при температуре -10 40
20 C .. При фракционировании осадо ка III Кона его суспендируют в воде . для экстракции с(2 — макроглобулина и балластные белки отделяют центрифугированием при комнатной темпера- 45 туре. К полученному центрифугату при рН 8,7 добавляют равный объем
14Ъ раствора полиэтиленгликоля с мол.мас. 6000 и оставляют на 2-4 ч при 4-6 С. Образовавшийся осадок о липопротеидов и других балластных белков отделяют центрифугированием а к центрифугату при температуре 0 С добавляют охлажденный до -10 C этиловый спирт до конечной концентрации
26 об.Ъ и оставляют смесь на 10-16 ч при (-6 )- (-9) C.. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при -б С, в центрифугате устанавли- вают рН 6,1 и оставляют на 12-16 ч.
Осадок отделяют центрифугированием 60 о при -б С и растворяют в физиологическом растворе. Полученный раствор представляет собой концентрат с(, -макроглобулина, содержание которого составляет 60-80Ъ от общего белка.
Пример. Плазму донорской крови подвергают фракционированию с помощью этанола, полученный осадок фракции 1II Кона замораживают при (— 10 ) — (-20 C ). 1 кг замороженного осадка фракции I I I Кона растворяют в 5 л дистиллированной воды и оеадок отделяют центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре. В надосадочной жидкости (4200-4500 мл ) с помошью 0,5 н. раствора ЙаОН устанавливают рН 7,5-8,9 (предпочтительно
8,6-8,7 )и, перемешивая, постепенно добавляют равный объем (4200-4500 мл)
14Ъ-ного раствора полиэтиленгликоля с с мол.мас. 6000, приготовленный на
0,85Ъ ИаСВ. Смесь оставляют на 2-4 ч при температуре 4-6 С. Осадок отдео ляют центрифугированием при 25003000 об/мин в течение 20 мин при
4-6 С и отбрасывают. Надосадочную о жидкость (7500-7800 мл ) охлаждают до 0 — (-5еC ) и постепенно при этой температуре добавляют при перемешивании равный объем (7500-7800 мл ) предварительно охлажденного до -10 С
53Ъ вЂ” этанола. Смесь перемешивают и постепенно в течение 2-3 ч снижают температуру до (-б ) — (-9 С ) и оставляют на 10-16 ч прй этой температуре; Полученный осадок отделяют центрифугированием, а в центрифугате посредством 0,1 и раствора НС3 до-. водят рН до 5,9-6,3 (предпочтительно
6,1-6,3 и оставляют на 12-16 ч при температуре (-б ) — (-9 С ). Осадок отделяют центрифугированием при
4000-6000 об/мин в течение 25-30 мин при температуре (-б ) — (-9ОС). Полученный осадок растворяют в 0,85Ъ
NaСS, подвергают стерилизующей фильтрации.
Конечный продукт представляет собой прозрачный раствор белков, обогащенный в 7-15 раз 0 2-макроглобулином крови человека. Концентрация с(2 -макроглобулина в конечном стерильном растворе составляет 12002500 мг.Ъ.
Выход препарата составляет 1-2Ъ от общего белка плазмы крови человека. Средство обладает выраженным антипротеиназным поливалентным действием. Концентрат о 2 -макроглобули" на подавляет активность многих протеолитических ферментов животного происхождения: трипсина (4 мЕД/мг ), фибринолизина (15 мЕД/мг ), плазмина (10 мЕД/мг ), химотрипсина (7 мЕД/мг ) калликреина — 1 мЕД препарата эквивалейта 5 калликреинингибиторным единицам тразиллола, растительного происхождения: папаина (3 мЕД/мг ) и других1 бактериального происхождения (Subtilopeptiefase А, тип VIII).
Препарат хорошо растворим в физиологическом растворе до концентра938447
Составитель С. Малютина
Редактор Л. Письман Техред С.Мигунова Корректор В. Бутяга
Заказ 6323/1 Тираж 713 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР . по делам изобретений и открытий
113035, Москва, X-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ции 70-90 мг/NI не теряет активности в течение 1-1,5 лет при хранении в растворе при температуре 4-8 С.
Данный способ позволяет на уже имеющихся производственных мощностях, в едином технологическом процес 5 се, без дополнительных затрат получать лечебное средство, обладающее поливалентным антипротеиназным действием.
Результаты биологического изучения и исследования in vitro позволяют ожидать положительный эффект в лечебном действии предлагаемого антипротеинаэного средства, обусловленного его поливалентными свойст" вами. При введении больным с деструктивными заболеваниями (панкреатит, ожоговая травма, зкзогенные отравления ) средство коррегирует нарушения в системе гомеостаза, что будет усиливать и ускорять лечебный эффект. Кроме того, предлагаемое антипротеиназное средство способно подавлять активность многих бакте-. : риальных протеолитических ферментов, что обусловит его эффективность при лечении перитонита, сепсиса и других воспалительных заболеваний в комплексе общей антимикроб= ной терапии.
