Способ лигандообменного хроматографического разделения и анализа смеси энантиомеров аминокислот и способ получения алкилпроизводных оптических изомеров аминокислоты

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗО6РЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 1004S76 (61) Дополнительное к авт. свил-ву

\ (22) Заявлено 01. 12.81 (21 } 335600 1/23-25 (51)M. Кл.

<; 01М 31ГО8 с присоединением заявки №

Гееудвретеееные кемктет (23) Приоритет (53) УДК 5 13.54:.1 (088.8 ) Опубликовано 15.03.83. Бюллетень № 10 ве делам кэебретенкй к еткрыткй

Дата опубликования описания 15.03.83

В, A. !1аванков и A. С. Бочков 4 г,, I i, :-:"-.

f еь!

Ордена Ленина институт элементоорганических сое неник:"-, им. A. 11. Несмеянова (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (5 1 ) СПОСОБ ЛИГА11ДООБМН! НОГО Х1:- ОМАТОГРАФИЧЕС КОГО

РАВД!..:ЛН1ИЯ 11 АНАЛИЗА СМЕСИ Э!!А11ТИОМЕРОВ

АМИНОКИСЛОТ II СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

АЛКИЛП1--ОИЗБОЛНЫХ ОПТИЧЕСКИХ

ИЗОМ ЕЕ"ОВ о -АМ ИНОКИСЛОТЫ вЂ” СН -СН СН -,11 нос!

Изобретенце относится к хроматографии и может быть использовано для разделения смесей веществ, вступающих в реакции комплексообразования.

В связи с развитием биохимии, биологии, микробиологии, а также связанных r. ними отраслей,промышленности в том числе пищевой, возникает необходимость проведения многочисленных рутинных анализов аминокиспотного и энантиомерного состава различных практически важных смесей, в том после .и при определении. загрязнения окружаюшей среды. Современный аминокислотный анализ относительно дорог и предполагает использование дорогого и уэко специфического оборудования, на котором энантиомерного анализа до сих пор не проводят ввиду отсутствия соответс гвуюших методик. Перспективным направлением этой области анализа является создание дешевого и экспрессного метода энантиомерного анализа, реализуемого на стандартном и общедосгупном хроматографическом оборудовании.

Известен способ разделения энантиомеров аминокислот 11), включающий перемещение смеси энантиомеров в фосфатном буфере через слой селективного сорбента, состоящего из гранул силикагеля, на поверхность которого привиты функцио.нальные группы =- Ь пролина

К недостаткам способа — относятся .ложность получения сорбента, относитель но сложный состав элюента, приводящий . к .коррозии оборудования, необходимость приготовления высокоэффективных хрома,тографических колонн в условиях лабора- щ торин, а также детерминированная селек;явность,сорбента.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ лигандообменно

1004

3 го хроматографического разделения и анализа смеси эчантиомеров»х. -аминокислот, включаюший ввод и перемешение анализируемой пробы через слой сорбируюшей насадки в потоке элюент4», содержашего ионы металла-комплексообразователя, Согласно способу в элюент добавляют оптически активное вешество в качестве добавки 1, 2).

Однако добавление в элюент опти- gp чески активной добавки резко удорожает проведение анализа и затрудняет широкое внедрение метода в аналитическую практику в том числе для препаративного выделения вешеств ..Сравнительно узкие пре- f5 делы изменения полярности элюента и его элюируюшей силы не позволяют широко варьировать селективность разделения.

11елью изобретения является удешевление, упрошение и расширение аналитичес- р ких возможностей способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу лигандообменного хроматографического разделения и анализа, включающему ввод и перемещение ана-25 лизируемой пробы через слой сорбируюшей негладки в потоке элюента, содержаШего ионы металла-комплексообразователя, сорбируюшая насадка составлена из обрашенно-фазового сорбента с введением в состав углеводородного слоя алкилпроизводного оптического изомера +-аминокислоты, а элюирование проводят системой растворителей с полярностью 5,0-10,2 при,, рН 2-7,5.

В предпочтительном варианте реализа35 ции способа в качестве растворителя дпя элюента используют воду.

Суть изобретения иллюстрируют примеры изменения селективности и удержива40 ния в зависимости от изменения соотношения вода-органический компонент элюента (табл. 1 и 2), температуры (табл.З), концентрации металла-комплексообразователя (табл. 4), природы органического компонента (табл. 5 и 6).

Эксперименты показывают, что проведение процесса за указанными пределами значений параметров разделения приводит к потере селективности и ухудшению аналитических свойств хроматографической системы, На основании приведенных экспериментальных данных можно констатировать, чTo для рассмотренных сорбционHblx систем наибольшие значения удерживания характерны для сорбатов с крупными алифатическими и ароматически»»и радикалами при Й-углеродном атоме, таким образом, 876, 4 дпя этих аминокислот гидрофобное взаимодействие с поверхностью сорбента вносит сушественный вклад в удерживание. Об этом свидетельствует и снижение удерживания гидрофобных аминокислот с ростом концентрации, органического компонента элк ента. lIJIR гидрофильных кислот эти закономерности не соблюдаются и в ряде случаев заменяются на обратные, поскольку у таких аминокислот удерживание в значительной степени определяется координационными взаимодействиями. Роль этих взаимодействий отчетливо прослеж»»вается при изменении концентрации меди в элюенте. Таким образом, на предложенных стационарных фазах для лигандообменной хроматографии удерживание обусловлено образованием сорбционных тройных комплексов на поверхности сорбента, состояших из фиксированного лиганда (молекулы стационарной фазы), иона MPTB»LTIQкомплексообразователя и молекулы хроматографируемой аминокислоты. Гидрофобное взаимодействие бокового радикала в молекуле аминокпслоты с поверхностью сорбента приводит к существенной стабилизации сорбционных комплексов. Образование сорбционных комплексов — единственный процесс, обеспечиваюший хиральное распознавание энантиомеров. Энантиселективность у различных алкилпроизводных оптических изомеров -аминокислот различна, например, у гистидионового комп— лекса нимсе, чем у оксипропиленового фиксированного лиганда. Это можно объяснит специфическим прос транственным расположением гистидинового лиганда на поверх— ности сорбента и неоднозначностью структуры сорбционного комплекса. Если в комплексе меди с h1 -алкильными производны- ми оксипропилеиа конфигурация атома азота однозначна, то в первичной а»..иногруппе гистидина алкильный радикал может замешать любой из двух атомов водорода, приводя к двум различным конфигурациям атома азота, которые способны превращаться друг в друга даже после образования комппекса с медью. Одной из этих конфигураций соответствует глициновый тип координации гистидина медью, т.е. расположение карбоксильной группы и альфааминной группы в основной координационной плоскости атома металла-комплексообразователя и имидаэольного донора в аксиальной .позиции. В этом случае сорбционный комплекс расположен параллельно поверхности сорбента и подвижный лиганд

13 -конфигурации получает возможность вступить в дополнительные гидрофоб»

76 6

3,0 г едкого натриа (0,075 М), и реакцию ведут в тех же условиях при интенсивном перемешивании еше 5 ч. Затем реакционную смесь охлаждают, .нейтрализуют серной кислотой до рН 7 и разбавляют водой (1,5 л). Выпавший осадок от фильтровывают промывают водой и пере- кристаллиэовывают иэ 150 мл горячего эталоне. Выход 12,1 r (41%).

Пример 2. Способ получения Я-гексил- L -оксипролина. Условия, аналогичные примеру 1. В качестве оптического изомера о(.-аминокислоты используют

L -оксипролин в количестве 13,1 г а в - качестве. алкилгеллоида С Н CC в количестве 13,5 r.

Пример 3. Способ получения

Я -гексадецил- . -оксипролина. Условия, аналогичные примеру 2. В качестве галоидпроизводного предельного углеводорода используют 1-гексадецилбромид в количестве 30,3 г.

Пример 4. В случае получения стационарной подвижной фазы для лигандообменной хроматографии на основе аспарагиновой кислоты температура реакционной смеси не должна превышать 45-

50 С ввиду возможной рацемизации. о

Пример 5. B результате использования предложенного метода можно получить значительное количество стационарных фаз с разными функциональными группами и разной длиной алкильного за-. местителя. На йримере трех производных 4 -оксипролина (табл. 7) можно убедиться, что оптимальнрй длиной цепи алкиль. ного заместителя применительно к большинству распространенных обрашенно-фазовых сорбентов является десять атомов углерода (деди).

Пример 6. Одним из требований к аналитической сорбируюшей насадки является получение таких значений селективности разделения, когда на эффективных колоннах пики компонентов разделяемой смеси полностью разрешены и расположены сравнительно близко друг от друга.

Это условие реализуется например, когда синтезированное вещество К -децил- Ь-гистидин

CH = С -СН -CH-CQ N

/ у

НН, н МН

1 „оН „

5 100!R .взаимодействия с углеводородной поверхностью сорбента.. По-видимому именно в этой структуре происходит дискриминация энантиомеров подвижного лигенда, причем меньшие времена удерживания характерны для 4 --энантиомеров. Единственным исключением из этой закономерности является аспарагияовая кислота, поскольку карбоксильная группа 4 -аспарагиновой кислоты образует водородную связь с имидазоль- Ip ной группой фиксированного лиганда,что . энергетически значительно более выгодно, чем гидрофобное взаимодействие. бокового радикала 9 аспарагиновой кислоты с поверхностью сорбента. Значительная доля фиксированных на сорбенте гистидиновых группировок, вероятно, координирует ион меди по диеминовому типу с расположе- . .нием карбоксильного донора в аксиальной позиции. Такой хелат, несомненно, также щ участвует в связывании подвижного лиганда в сорбционный тройной комплекс, .однако трудно предположить возмог;ность хирального распознавания подвижного лиганда в этом комплексе. 25

Предложенному способу разделения и анализа соответствует ранее неописанный способ получения нового класса соедине-! . ний, алкилпроиэводных оптических изоме.ров eL -аминокислот. 30

Способ получения алкилпроизводных оптических изомеров -аминокисл оты заключается в том, что на.растворенный в водно-органическом рес твори тало с из— бытком органического компонента опти35 ческий изомер Ц.-аминокислоты воздействуют щелочью и переводят в соль щелочного металла, затем при нагревании до температуры ниже начала рацемиэации на полученную соль воздействуют алкилгал 0 лоидом в щелочной среде, после этого осуществляют нейтрализацию .реакционной системы - сильнодиссоцируюшей кислотой и проводят осаждение целевого продукта.

Следует отметить, что в качестве опти45 ческого изомера -аминокислоты можно использовать как L так и Э -изомеры (конфигурация функциональной группы влияет на. порядок выхода разделяемых энантиомеров, но не на их селективность раэ50 дел ения ) .

Пример 1. Способ получения

Й вЂ”.децил-L-гистидина. В смеси 100 мл этанола .и 40 мл воды растворяют 4,0 г едкого aarpa (0,1 М) и 15,5 г Ь -гистидина (0,1 М). К раствору добавляют

22,1 г 1-бромдекана и повышают температуру реакционной смеси до 70ОС. Через 5 ч нагревания к раствору добавляют используют в качестве стационарной,-фазы для лигандообменной хроматографии комплексообразуюших соединений.

4876 8 графин позволяет пспучить простым, быстрьщ и общедоступным методом набор фаз с широким спектром изменения селективностей по отношению к анализируемому объекту. В частности полученный таким образом Й -лепил-4 -гистидин позволяет разделить значительное количество энантиомеров. Кроме того, предложенный способ дешев, обладает широкими ана 10 литическими воэможностями по сравнению с известными. Способ можно

4 использовать как аналитический метод, в том числе в анализе окружающей среды и контроле ее загрязнений, как препаративный. Метод реализуется практически на всех обращенно-фазовых сорбентах и готовых упакованных колоннах. Анализ можно проводить на стандартном хроматографическом оборудовании, Следует от20 метить, что йредложенный способ сушественно расширяет возможности аминокислотного анализа, переводя его на уровень . энантиомерного анализа.

Способ реализуется на стандартном хроматографическом оборудовании. Отпадает необходимость использовать аорогостоящие аминокислотные анализаторы, це4 на которых достигает 40000 руб. за один прибор. Бена отечественных прибо30 ров колеблется от 10000 до 20000 руб.

Способ не связан с расходом дорогостоящих реактивов. Экономия при внедрении предложения при ограничении или прекращении покупки анализаторов 40000

35 1 2 00 00 О ру б в год. Сокращается время (30-40 мин анализ), электроэнергия, экономятся реактивы и трудозатраты.

7 1ОО

Хроматографические свойства этого соединения неочевидны и не могут быть предсказанм теоретически, исходя из струк туры и известных .свойств гистидина.

Полученнбе соединение характеризуется следующим составом, %: С 66,42; ,К 5,17; Н 10,70; 0 17,71 (расчетное значение, экспериментальные значения элементного анализа соответствуют расчетным с точностью, принятой в элементном анализе).

Полученное вещество представляет из себя кристаллы белого цвета, Мол. вес, определенный по методу Роста, 295, что соответствует приведенной формуле. Температура плавления дважды перекристаллизованного вещества 204 С, ИК-спектр полученного соединения характеризуется интенсивной полосой в области 1700-1750 см " (характерной для карбоксильной группы) и одиночным пиком средней интенсивности в области

3300-3500 см (группа -4 — Н).

В ходе практического испытания определено, что описанная стационарная фаза относится к числу фаз с наиболее равномерным распределением селективности по отношению к энантиомерам о -аминокислот. Если в задачу исследования входит разделение небольшого числа энантиомеров или даже пары оптических антиподов, а также и препаративное разделение, то можно использовать и другие фазы, полу чаемые описанным способом.

Предложенный способ получения алкилпроизводных оптических изомеров О -аминокислот для лигандообменной хроматоТаблица 1

2,21

2,37

2,14

l,00

1,00

1,00

Asn

2,14

2,21

2,37

1,89 1,0

1,62 1,00

1,62

2,68 1,00

1,69 1,00

1,69

1,91 1,00

1,89

1Ьг

2,86 1,00

Удерживание и селективность разделения рацематов аминокислот (ZorboX ОЭСэлюен, вода- этанол, 10 4М ацетата меди, 35 С, расход элюента 2 млlмин, фаза С1о Ь Н 6

1004876

Соотношение элюента

Вещество

30: 70

2,68

2,86

I,1 6

1,21

1,02

2,13

2,83

2,35

1,16

1,14. 1,00

3;22

2,73

2,13

2,63, 3,02

2,58

1,00

1,0,0

1,00

2,58

2,63

2,21

1,71

1,00

1,00

1,00

1,71

2,21

3,26, 2,57

2,51

2,58

1;36

1,32

1,00

3,50

2,57

3 31

3,61 1,00

2,61 1,34

1,95

3,61

3,80 монсе

2,97

4>29

1,ОО

1,00

2,97.

3,80

2,37

2,71

5,78

1,00

1,00

1,00

5,78

2,77

2,71

2,26

2,43

3,52

1,00

1,00

1,00

3,52

2,26

2,43

А bu

4,29 4,92

5,67

1,00

1,00

1,00

4,92

4,29

: 5,67

at;-омутно, адининовы

1,00

4,29

Пройопжение табл, 1.

15: 85 92,5: 7,5

1,91

3,02.3,26

1,98 1,18

1,68

1004876

13,64

11,71

7,29

1,25

1,.17

1,00

16,04

7,29

14,63

6,82

9,36

5,36

1,ОО

1,00

1,00

6,82

S,36

8>53

iVaf

6,57

1,ОО

1,00

1,Î0

6,57

8,53

9,21

6,86

Yof

1,24

1,27

1,ОО

6,86

9,71

1,00

1,ОО

9,71

27,33

Ме1

8 14

1,00

1,00

1,00

8,14

27,33

17,91

К1

Таблица 2

Зависимость удерживания от состояния вода:этанол. Условие эксперимента: Хо Ьс>> Ся, 10 М ацетата меди, 35 С, расход элюента

2 мл/мин, фаза С,Ь HjS

1,57

1,23

1,57

Sev

11,69

11,08

11,08

17,91

К

9,36

10,26

10,26

13,72

17,01

15,00

1,О0

15,00 к, к

1004876

Вещество

70: 30! 100 : 0

1,57

1,57

1,54

1,54

0,86

0,63

1,00

1,00

0,86

0,63

2,39

1,50

1,50

2,39

1,00

1,00

1,,50

2,39

0,75

0,73

1,69

1,69

1,03

1,03. 1,14

1,29

1,14

1,29

1,33

1,33

1,92

2,29

3,31

1,21

1,00 й, 9

4,00

2,00

C1t

1,29

1,00

1,00

1,29

2,00

4,66

1>71

1,7 11,44 ).,29

OVO

2,21

6,70

0,86

1,71

l 71

0,86

1.,33

1,37

l,33

1,37

0,68

1,29

hsy

1,29

0,63

1,67

1,67

0,50

0,50

l,00

Н1 HCt

1,00

1,00

1,00

1,67

0>50

0,50

1,67

5,46

1,47 щ Ц } 1,92

Соотнтшение элюента

14

Продолжение табл. 2

1004876

Соотношение эл1оента

Во нество

I00:0

70 30

1,18

1,47

6,43

2,48

АРа

1,86

1,86

1,00

1,35

1,00

1,35. 1,86

1,86

2,79

2,79

1,61

1,00

1,61

1,00

2,79

1,39

1,15

139

115

5,57

5,57

3,07

3,07

1,00

1,00

1,00

1,00

3,07

3>29

3,07

1,71 ье

1,24

1,00

1,71

3,23

19,33

1, .5

1,25

1,83

1,83

35,33

3 5,33

4,29

4,29

4,77

5,73

5>73

4,77 1,00

1,00

1,00

1,00

5,73

5,73

4,77

4,77

4,00

34,00

1,06

1,26

4,24

43,00

43,00

2,79

4,86

ЧоВ 3,43

К 44

0(.

К

2,48

3,35

7,20

11,60

31,78

44Д2

3,29

Продолжение табл. 2

3,35

7,20

1 1,60

31,78

44,22

3,29

3,29

19,57

24,33 19,33

К к

1004876

О О

o o

О O O O

О O O O л л

CD CD

СО с)

o o с» cU cO т) CD

- o т-т

О о

Я

0) CD Л nl и

С0 с ) Г= сГ CD

С . О - - O

О > О m O O

СО O a В со

О С с ) О О„О

° т 1 т Л

О О О О О Q

О О О Q О . Q

СО О

О л л

О Л

СО л1 . л л сО сО сO

О O с ) л (Q с

СЧ Я

cU cO со с0

1-(Я

О о (Q

СО

О О О

О л

o o

o .o л ., О о сО

О

СО

0) c l iD Г»

o„ г- m

Ñ 3 С ) Л сО

Р CD cO

o o

Л ао Л сО С- О cu . . О cO cO О . СП В О Г= со Е СО сО си Ю ж

O O СО -l < СО -» сч СО Л сН m. с Э CD сО Л СО

l СО р

6

Q ют о

IQ

Ф

fQ и с

0(Р с »

0- > + ч О (p X Щ g Ih)

0 N G x ) 0 и

CQ

A <ц а с

m, < а

ы e

s o о о,, с и О ф х à вЯ о н

5 .

3 я

Ф о с.

Щ

& <у

Я о K ф о Е

3 î а " х

1-

&ю

8- CQ

30 СО д о

5 . о и. о

57

Б (Ц Ж д (d с»

0)

a.,., 6 о о

Щ со И (СО сО 1 Я Ф сО сО сО" сО Л СО CO Я

О О

О О л - О О

-» О О сО СО О О л» 1-1 л» т-1

cO O O

СО» CO„CO„ В О

Я - - Я .» c4 -Ф сц а О

t СO с» СО CD сО t»

cU с ) 03 -«сО N <ц"

» o», р

03 СО Dl A СО сО с 4 Л с» сЧ Л СО сЧ сц О О В - Î. O.

О О л и О О с->

Л(1-» т-(т-1 т-) т» Л

Л О а O - СО а сО с 4 сО сО СО СО Я

СЧ сО с4 сО D3 С сО сц

1004876

zo о о сч

O O

O». O

Р„

«Ф

I о

° «

СЦ

Я CD 4 со

O O

cU CD

O O

O O о о (о со (О Я о л с ) 1-(с

lQ С 4 Щ сО -: CD О

1-1

Щ Щ (О (О о лO O о о» л

03

СО

И ) Е

1 о

lQ. о ((О л1 о) л

nl CD < ж co to

CD cO CD cO л« о о с ) 1-1

1-1

Щ Со (Q со

Я (Cl ((О (Q л л о

C о а

О О 1 O О О о q л о о.о л л < я со î о

Ь

СО Щ (О e). N (О

CD ri (О l сО CD (O л Dl CD (O O O (O n (0 O (О (О г г- e (o r- со ж

О и О O t О О О

О с О О с О < ) О

1 л с4 Щ Л СО CD Ч (Q 1-4

Е (О сО к д со O CD (О Щ л O л 1-) л1 1-«

Gl с 3 Щ 1-1

CD l . cO о а„ с л (О 1-1

1 л (О (О O O ср3 О O O

О л О О с О О О ч, л а л Л (О л л O

O m а л e (- O сО CD Щ (3 СО си 4 л« л . л л(я ц Р 3 л ч;) с». о

Оо (4 ф

Зр о О и МЩ

Ж Я д

Ф с»

Щ

m o а

Ц Ф о и В

Л а

И l

oN u

& (О Q

g (Cl O

Щ т-1 а „О аа д е Я.»

gyo

Ф (Ф. а 1р

Ф1

2 ИФ д М

O с(Ф C ..

М д (»

C э »(Ф )

И

:Ф с ( а о ъ а

g Ж

8 ф

И

Ф

Л О

1004876

21

О с} (О О О О О» О О»О О

Q c (} Q Q О Q (Ч О О Я О

-» «»»» «» (О

Ч (О

} CD CD (О л cu } Л

}. д Q (д р} с } (9» (}

О

О

»О

1-»

Ч (} О

О

Т-» (0 -» Л О } О О» О с0 с9 5) с 3 О (О l О (О } (О

И с } с } Л Ч О»О t }; О} с} Ч О O О О (О Q Q t O

О) л с0 О О О О (Ч О О Л О

1-» л(1-» . 1-» 1-» 1-» л1»» л т-» (О О с») с }.

CD (О„} rt 0)

Л CU 3

„4 03 CD ð (О (О (D (О (ч) (О (О . О

1-1 1-» с) " " (О cU (ч} р} Я Я сг} сц (0 (О с } л р} (О (О Я с } г (О с} (О (0 (}» Dl » с } (} (Ч с } cU

О 1-» (О t } с4

1 л» с4 с3. .(О (О (О (О

О) О О. CD O О О О t O О» О . О О с > (Ч О О О О (Ч О О (И О

»»» «»»» л л л

О О О

О О О л» (0

"Г о}

CD CD (О (- а . (О rr CD Л

О с 3»О (Ч Ж (О» (О с} с} crj Ф В cu . (O . cl m (О (О л с0 ся л»

Я О) .(4

Ф О сЧ л л1

nl cr3 w CD w (с ) O CD

CD с ) «» Л»О О с ) (О (6 сЧ с » CD И Л (9. 0} (9 Л t t CD »

0 (О» . (О О

»О A с<) iQ с ) О) гу

С Q сР 0

",Д

Ъ

О.

«}

О О О

O О л»

\П « » . Я О (О CD

» О CI

O O

О O

«-» 1» сЧ (О

Я CD (О

EU . » Я (» 0)»

С5 с )» сЧ с» rl

cl О

О л» л

О», ° с} ч

О с } с} (О О л О

1-» 1» с} 1

CD cD

1-»

О

О с} Ч

Л с4

CD (Ч }

-» Ф

Я О3

CD О

1-1

1-» 1-» (Ч сч сЧ

° » 1-»

24 о о

o o

° -т т.т ц l щ Я о т-т сц t

CQ Я о т-) о О

О O„ т-

СО о д

CQ т-1 о ж т-1 ( л

o o

o o т-) т-т

CO ц (Q

СО т-1

С 4 Ю

Я (О

1-< CQ т-1

1004876

1004876

25.Таблица 5

Удердйвание и селе ктивнос а разделения рацематов аминокислот элюент:метанол=вода (15:85), ацетат меди 1 ° 10 М, температура

35 С, расход элюента 2 млlмин, фаза C<<4 H;S

1,00

0,93 ойзр

0,82

0,82

0,93

1,00

1,00

1,12

Ger

1,00

1,12

1,23

1,23

0,61

075 . 075

1,00

0,61

1,00

0,96 0,96

1,00

1,00

0,81

0,81

Hap

l,89

1,91

ТЬ"

2,31

1,12

2,59

1,15

2,11

gTQv

3,21

1,00

2,11

1,00

1,00

1;75

1,75

1,00

3,02

4,62

6,05

3,51

1,31 .

4,86

1,38

0,81

1,66

1,50

0,83

Asp

0,51

1,21

1,13

1,98

of And

1,00

1,00

1,13, 1,98

1,83

2,37

2,37

1,00

1,83

1,00

6,31

1,00

АЬО

4,52

4,52

1,00

1,24

1,18 5,02

1,00 7,36

ЬЧЬ

1,00

10,7 1

image

17, 15

9,00

1,21

ЧаВ

8,27 10,67

16,98 .

1,22

17,81 20,48

ЕЕ4

14,54

12,33

1,18

1,15

Табл ица 6

Удерживание и селективность разделения рацематов аминокислот элюент ацетонитрил-вода (15:85), ацетат меди 1 10 M, температура 35 С, расход элюента 2 мл/мин, фаза С., ЬЖ5 о

0,71

1,00

1е33

j;,66

12,33

5,72

15,33

5,72

3,21

3,02

1,19: 14,17

1,29 .13,92

6,31

17,72

7,36

1004876

27

0,71

1,00

1,75

0,74

1,00

1,00

1,75

0,74

1ЛО

О,43

0,43

1,0(?

0,88

0,57

0,57

1,00

1,00

0,88

1,70

1,75

0,59

1,00

1,00

1,00.

1,75

0,59

0,59

0,44

1,67

1,00

0,44

1,67

0,79

2,40

1,00

0,79

2,40

1,00

3,20

1,51

1,44

4,80

1,51

0,78

0,78

1,06

1,77

1,61

1,77

0,44

0,44

0,66

0,52

2,25

0,52

3,00

0,52

2,25

0,50

0,59

0,57

>1рополжение табл. 6

1 00487 6

О,96

З,О1

0,96

1,ОО

1,ОО

a,оо

З,,О1

3,67

Abu

1,ОО

1,ОО

1,ОО

З,24

4,67

1,26

1,26

1,26

5,88

5,88

8,41

2,00

2,00

5,71

1,ОО

1,ОО

1,00

2,00

2,00

5,71

11,37

4,75

1,21 чае

1,20

5,75

5,25

Met

1,26

1,22

6,63

6,63

3,58

3,58

1,63

1,63

1,59

5,84 1

5,84

16,85

0,96

3,24

0,96

3,24

3,24

4,67

Пройолжение табл. G

3,67

6,68

13,67

13,51

16,48

1О,6О

1 004876

32

Табл,. а 7, Удерживание н анан(носаиективттость рааделення энантномсров g -аминокислот н

-иИисил(ости от ллипм аклкильного заМестителя (элюент этннол-вода, 15: 85, 2(((У конпентрания ацетата меди 10 М, 4i СЬ .обои be(I H)

13е ше

0,15 (),3 9

0,87

2,13

0,72

1,53

1,38

1,32

1,62

0,(39

1,51

1,85

3,18

3, - 1

9, (-i

° 1,83

6,55

5,98

1,40

0,45 део.1,14

1,17

1,95

1,27

1,64

0,87

1,87

1,58

0,83

1,54

1,52

2 40

2,94

2,62

1,40

2,89

2,53

5,65

2,34

Ч с(Р

7,94

3,26

7,32

6,14

4,74.

4i57

1,66

1,74

,) с)() Ту

8,25

9,47

7,58

3,55

3,92

4,47

1>59

1,63

8,64

7,27

6,24

5,96

Я l

9,30

Й Р(.() 2,63

2,56

5, 1.7

1004876

Продолжение табл„, 7

Вещество С Ь Нур

С -1 - Hyp

10.С -4 - Нур.

21,3

24,5

18,2

30,8

17,2

13,5

Р.Ье

3,86

2,19

2,34. 37,6

34,5

42,4.

52,0

34,1

34,7

2,52

1,68

1,75

58,1

60,8

85,9

К4

К1

К

Составитель В. Сизенев

Редактор М. Бандура Техред Т.Фанта, Корректор О. Билак

Заказ 1873/55 Тираж 871 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгоро д, ул. Проектная, 4

Ф ормула иэобретени я

1. Способ лигандообменного хроматографического разделения и анализа смеси энантиомеров аминокислот, включающий ввод и перемещение анализируемой пробы через слой сорбируюшей насадки в потоке элюента, содержащего ионы металлакомплексообразователя, о т л и ч а ю— ш и и с я тем, что, с целью удешевления, упрошения и расширения аналитических возможностей способа, сорбируюшая насадка составлена иэ обрашенно-фаэового сорбента с введением в состав углеводородного слоя алкилпроиэводногo оптического изомера oL -аминокислоты, а в . качестве элюента. используют систему растворителей с полярностью 5,0-10,2 при рН 2-7,5.

2. Способ получения алкилпроиэводных оптических изомеров oL -аминокислоты, К.. Кр ! . о т л и ч а ю ш и и с я тем, что на оптический изомер oL -аминокислоты, растворенный в водно-органическом раствориI теле с избытком органического компонента, воздействуют щелочью и переводят s соль щелочного металла, затем при на30 гревании до температуры ниже начала ра-. ., цемизации на полученную .соль воздействуют галлоидзамешенным, алкилом в щелочной среде, после чего осуществляют нейтрализацию реакционной системы сильнодис35 . Социируюшей кислотой и проводят осажде ние целевого продукта.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Авторское свидетельство СССР № 825532, кл. G 01 Н 31/08, 1979 (прототип).

2. Авторское свидетельство СССР по заявке № 2804942/23, кл. Ъ 01N 31/08, 1979.,