Штамм еnтеrоvirus suis для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней. Целью изобретения является штамм энтеровируса свиней, обладающий репродуктивной активностью, в культуре клеток почки поросенка, безвредный и ареактогенный для лабораторных животных. Штамм К-9 Enterovi- rus suis XI вызывает сероконверсию у кроликов, в гипериммунных кроличьих сыворотках вируснейтрализующие антитела образуются в титре 1:256-. 1:512. Штамм не вызывает отклонений от физиологической нормы у интравенозно и интрамускулярно инокулированных кроликов. О S (Л со N5 00 00 vj ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3894239/30-13 (22) 06;05.85 (46) 07.08,87 ° Бюл. 9 29 (71) Украинский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) В, Ф. Романенко, О, Г. Прусс, Н. В. Бабич и Л. В. Купневская .(53) 576,8.094.29:576,858(088,8) (56) Труды Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов, M. 1975, т, XXII с ° 93-96.

Alexander Т, I °, Betts А, О, Further studies on porcine entегоviruses isolated at Cambridge 11.

Sегоlogical grouping ° — Research

in Veterinary Science, 1967, v, 8, 11 3, р. 333-337 °

„„SU„„1328375 (5D 4 С 12 N 7/00 А 61 К 39/225 (54) ШТАК 1 ENTегоVIRUS SUIS ., ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЭНТЕРОВИРУСНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА СВИНЕЙ (57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней ° Целью изобретения является штамм энтеровируса свиней, обладающий репродуктивной активностью в культуре клеток почки поросенка, безвредный и ареактогенный для лабораторных животных, Штамм К-9 Entегоvirus suis XI вызывает сероконверсию у кроликов, в гипериммунных кроличьих сыворотках вируснейтрализующие антитела образуются в титре 1:2561:512, Штамм не вызывает отклонений от физиологической нормы у интравенозно и интрамускулярно инокулированных кроликов, 1328375

55

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэнтери5 та свиней.

Цель изобретения — штамм энтеровируса свиней, обладающий репродуктивной активностью в культуре клеток почки поросенка, безвредный и ареактогенный для лабораторных животных.

Штамм депонирован в коллекции

ВГНКИ ветпрепаратов MCX СССР под

У 287/5, назван К-9 Entегоvir us suis- 15

XI и имеет следующие признаки, Морфология, Сферическая форма, типичная для энтеровирусов, имеет икосаэдральную симметрию, размер вириона

26-28 нм.

Антигенная структура. В реакции перекрестной нейтрализации штамм серологически отличается от референтных штаммов известных серотипов энтеровирусов свиней °

Биологические свойства. Штамм К-9

Entегоvirus suis-XI обладает.репродуктивной активностью в культуре первичнотрипсинизированных клеток почек эмбриона свиньи и перевиваемых клеток линии СПЭВ и накапливается в них до 10 ТЦД, /мл в течение 48 ч при

37 + 0,5 С, Обладает бляшкообразующими свойствами на первично-трипсинизированных клетках почек эмбриона свиньи и перевиваемых клетках линии

СПЭВ, Образует однородные бляшки размером 1-1,5 мм.

Физико-химические свойства, Является РНК-содержащим репродукция виt

40 руса в культуре клеток не подавляется присутствием в поддерживающей среде 100 мкг/мл 5-бром-2-дезоксиуридина и 0,1-1,0 мкг/мл актиномицина Д, устойчив к воздействию хлороформа, 45 эфира и трипсина, а также сред со значениями рН 2,0-11,0. Понижает титры на 2-31g ТЦД после прогревания о Уо при 50 С в течение 60 мин в присутствии 1 М МяС1 .

Иммуногенность, Вызывает сероконверсию у кроликов; в гипериммунных кроличьих сыворотках вируснейтралиэующие антитела образуются в титре

1:256-,1:512 °

Безвредность. Не вызывает отклонений от физиологической нормы у интравеноэно и интфамускулярно инокулированных кроликов.

Пример 1, Использование штамма К-9 энтеровируса свиней в качестве антигена для обнаружения и идентификации антител в сыворотках крови . больных и пер еб олевших жив о тных.

Обнаружение и идентификацию антител проводят в реакции нейтрализации (PH) на культуре клеток, Для постановки PH готовят двукратные разведения сывороток в объеме 0,5 мл и к каждому разведению cblBоротки добавляют по 0,5 мл антигена с содержанием вируса в 0,1 мл 100 ТЦД,. Ви" рус-сывороточную смесь выдерживают один час.в термостате при 37 С, после чего смесь каждого разведения по 0,2 мл вносят в 2-4 пробирки с монослоем культуры клеток, в которых предварительно ростовая среда заменена на 0,8 мл поддерживающей. Учет результатов титрования антител проводят на 4 и 7 сут, Титром антител считают наибольшее разведение сыворотки, которое нейтрализует 100 ТЦЦ . вируса в 50 инокулированных вируссывороточной смесью в пробирках.

Результат считается положительным при нарастании титра антител в парных сыворотках в четыре и более раз или при обнаружении титров антител 1:32 и выше в 50 и более про центах сывороток крови однократно. обследованных животных.

Пример 2. Обнаружение анти гена (вируса)в мазках-отпечатках иэ патологического материала методом прямой иммунофлуоресценции (ИФ). Дпя исследования методом иммунофлуоресценции на обезжиренных предметных стеклах готовят мазки-отпечатки из свежезамороженного материала, Препараты высушивают, фиксируют в ацетоне, наносят на них флуоресцирующий .иммуноглобулин, помещают во влажную камеру, затем промывают фосфатно-буферным раствором, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Приготовленные препараты исследуют люминесцентным микроскопом. Положительным результатом исследования считают специфическое ярко-зеленое свечение цитоплазмы клеток на фоне мозговой ткани, которая светится серовато-зеленоватым цветом, Пример 3. Идентификация выделенного вируса в культуре клеток, Типирование вируса проводят в реакции нейтрализации на культуре кле1328375

Составитель И, Тареева

Редактор С, Патрушева Техред А.Кравчук

КорректорВ..Гирняк

Заказ 3453/29. Тираж 499

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 ток с помощью иммунной сыворотки к вирусу штамма К-9, входящего в состав набора диагностикумов, Иммунная сыворотка используется в дозе 20 нейтрализующих доз. Вирус для типирова5 ния используют в дозе 1000 ТЦЦ,, Для типирования 0,5 мл вируса с содержанием еro в 0,1 мл 1000 ТЦД „ смешивают с 0,5 мл иммучной сыворотки с содержанием в О,1 мл ее 20 нейтрализующих доз.. После выдерживания вирус,сывороточной смеси в течение 1,5 ч при 37 С по 0,2 мл ее вносят в четыре пробирки с культурой клеток, ро- )g стовая среда в которых предварительно заменена на 0,8 мл поддерживающей и ставят в термостат на инкубацию при 37 С, Учет результатов прово" дят на 4 и 7 сут.

Результат типирования считают положительным, если в 507. инокулированных вирус-сывороточной смесью пробирок сыворотка нейтрализовала вирус (ЦПД не отмечено).

Пример 4, Идентификация вируса в культуре клеток методом иммунофлуоресценции.

Выращенную на покровных стеклах культуру клеток заражают выделенным вирусом и инкубируют в термостате до появления ЦПД. После наступления ЦПД стекла извлекают, промывают фосфатно-буферным раствором, подсушивают и фиксируют ацетоном, Затем на препараты наносят фулоресцирующий иммуноглобулин к штамму К-9, выдерживают 30 мин при 37 С, обильно промывают фосфатно-буферным раствором, ополаскивают дистиллированной водой и подсушивают, Микроскопию проводят на люминесцентном микроскопе, Положительным результатом считают специфическое ярко-зеленое свечение цитоплазмы клеток в виде фокусов иэ 3-4 пораженных клеток, Формула и э о б р е т е н и я

Штамм Entегоvirus suis 287/5 (ВГНКИ) для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней,