Способ получения производных дигидропиридазинона

 

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производных дигйдропиридазинона формулы I: BNHR, -y- l-кгг-хг /- -д jsCN где В -о- : -fVimg -jN н R,- водород или метил; Rj- водород или С,-С -алкил, которые могут найти применение в медицине. Цель - разработка способа получения новых соединений указанного класса, обладающих инотропной активностью. Получение соединений I ведут из соединения формулы BL, где R,- как указано; L - удаляемая группа, выбранная из группы, состоящей из С,-С -алкилтиогруппы, С ,-С -алкоксигруппы или феноксигруппы и амина , где как указано. Новые прбизводные соединения I не проявляют признаков токсичности при дозировках, достигающих стократной предполагаемой терапевтической дозы, при оральном введении . 3 табл. а «о со с со со О5 со о: со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К IlATEHTY

R.ЖМ

ЖНС— где В - 0—

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3958649/23-04 (86) PCT/GB 85/00014 (11.01.85) (22) 12.09.85 (31) 8400863 (32) 13.01.84 (33) GB (46) 15.05.88. Бюл. У 18 (71) Смит Клайн энд Фрзнч Лабораториз Лимитед (СВ) (72) Роберт Энтони Слэтер (GB) (53) 547.852,2,07 (56) Заявка EP Р 84250, кл. С 07 D 237/04, опублик. 1983. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ДИГИДРОПИРИДАЗИНОНА (57) Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производных дигидропиридаэинона формулы I: BNHR, „„SU „„1396963 (50 4 С 07 П 237/04, С 07 С 129/14 //

А 61 К 31/50

R водород или метил; R — водород или С,-С -алкил, которые могут найти применение в медицине. Цель разработка способа получения новых соединений укаэанного класса, обладающих инотропной активностью. Получение соединений I ведут из соединения формулы BE,, где R, — как указа" но; L — удаляемая группа, выбранная из группы, состоящей из С,-С -алкилтиогруппы, С,-С -алкоксигруппы или феноксигруппы и амина NH R, где R <— как указано. Новые прбизводные соединения I не проявляют признаков токсичности при дозировках, достигающих стократной предполагаемой терапевтической дозы, при оральном введении. 3 табл.

139696

Изобретение относится к способу получения новых биологически активных химических соединений, конкретно к способу получения новьж производных дигидропиридазинона, проявляющих инотропную, сосудорасширяющую и бронхорасширяющую активность и обладающих способностью ингибировать агрегацию тромбоцитов, Указанные свойства предполагают возможность применения этих соединений в медицине.

Целью изобретения является получение новых производньж дигидропиридазинона, обладающих новым видом для ряда производных пиридазинона биологической активности — инотропной.

Пример 1. 6-(4-(N -метилN -цианогуанидино)-фенил3-5-метил4,5-дигидро-3(2Н)-пиридаэинон, А. Раствор 6-(4-аминофенил)5-ме тил-4,5-дигидро-3-(2Н)-пиридазинона (2,0 г, 0,0098 моль) и дифенилцианоиминокарбоната (2,4 г,0,01 моль) в 25 безводном диметилформамиде (15 мл) перемешивают при 115-120 С в течение

6 ч. Затем добавляют дополнительное количество дифенилцианоиминокарбоната (0,6 г, 0,0025 моль) и раствор на- 30 гревают в течение еще 2 ч.

Отгонка растворителя при пониженном давлении дает коричневый остаток, 1 который промывают кипящим этанолом, а затем перекристаллизовывают из вод- 35 ного диметилформамида с получением

6-(4-(N -цианофеноксиформамидино)фенил3-5-метил-4,5-дигидро 3(2Н)-пиридазинона, 1,5 г, т.пл. 164-165 С.

Соединение м ет быть также перекрис- 4р таллизовано иэ ацетонитрила.

Б. Смесь указанного формамидина (1,5 r, 0,0043 моль) и раствора метиламина (33 . в этаноле, 50 мл) перемешивают и нагревают при кипении с 45 обратным холодильником в течение

3,5 ч. Раствор упаривают до небольшого объема при пониженном давлении и остаток растворяют в горячем этаноле. После обработки древесным углем раствор обрабатывают водой и оставляют охлаждаться с получением це" левого соединения (1,0 r) т.пл. 264265 С.

Пример 2. 6-(4-(N Ìåòèë 55

N2 -цианогуанидино) фенил 1-5-метил4,5-дигидро-3(2)-пиридазинон.

А. К б-(4-аминофенл) -5-метил-4,5дигидро-3(2Н)-пиридаэинону (4 r) в

3 2 безводном пиридине (25 мл) добавляlot диметилцианодитиоиминокарбонат (5,75 r) и смесь перемешивают при кипении с обратным холодипьником в течение 3 ч. Реакционную смесь упаривают при пониженном давлении приблизительно до половины объема, разбавляют этанолом и оставляют с получением твердого вещества (3,85 r).

После отстаивания и растирания фильтрат дает дополнительное количество твердого вещества (1,4? r). Твердое вещество комбинируют и растворяют в кипящем пиридине (60 мл), содержащем немного воды. Раствор фильтруют и уменьшают в объеме с получением суспензии, которую разбавляют ацетоном и оставляют. Это дает кристаллы 6(4-(N-циано-S-метилизотиоуреидо)-фенил-5-метил-4,5-дигидро-3(2H)-пиридазинона (4,02 r), т.пл. 231-232 С (разл ° ).

Б, 6-(4-(N-Циано-S-метилизотиоуреидо)фенил3-5-метил-4,5-дигидро-3(2Н) пиридазинон (48 г) добавляют к раствору метиламина (33 в этаноле, 600 мл) при перемешивании и смесь нагревают при кипении с обратным хоI лодильником в течение 2 ч. Затем реакционную смесь оставляют охлаждаться и фильтруют с получением целевого соединения (32 r), которое после перекристаллизации из водного диметилформамида дает целевое соединение, т.пл.

270-272 С, идентичное по данным тоно кослойной хроматографии и ЯМР-спектроскопии, продукту примера 1.

Пример 3. 6-L4-(N -Этил-N2— цианогуанидино) фенил 1-5-метил-4, 5-дигидро-3(2Н)-пиридазинон.

6-(4-(N2 -Цианофеноксиформамидино)фенил3-5-метил-4,5-дигидро-3(2Н)-пиридазинон (2,0 г) и раствор этиламина (33 в этаноле, 75 мл) перемешивают и нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Добавляют дополнительное количество этиламина (33% в этаноле, 75 мл) и перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение еще 3 ч.

Смесь упаривают при пониженном давлении с получением коричневого масла.

его растирают под хлороформом с получением кремового твердого вещества (1, 15 r) которое подвергают хроматографии в колонке на силикагеле (элюент-хлороформ) с получением це1396963

3 левого соединения (0,40 r), т.пл.

208-209 С.

Пример 4. 6-(4-(N -Изопропил-N -цианогуанидино) фенил 3-5-метил-4,5-дигидро-3(2Н)-пиридазинон.

Изопропиламин (7,4 мл) добавляют к 6-(4-(N -циано) феноксиформамидино) фенил7-5-метил-4,5-дигидро-З(2Н)пиридазинону (1,5 r) в этаноле

1О (100 мл) и смесь перемешивают 4 ч при кипении с обратным холодильником (дополнительное количество изопропиламина 3 мл, добавляют по прошествии

2 ч). Смесь упаривают при пониженном давлении с получением бледно-зеленого твердого вещества. Растиранеие под зтанолом дает кремовое твердое вещество (0,94 г), которое подвергают флаш-хроматографии в колонке на силикагеле (градиент от хлороформа до хлороформ: метанола 40:1) с получением целевого соединения в виде твердого вещества (0,65 r), т.пл. 255 С.

Пример 5 ° 6-(4-(N3-Бутил- 25

N -цианогуанидино) фенил 3-5-метил-4, 5дигидро-3-(2Н) -пиридазинон.

Смесь н-бутиламина (0,7 г) и 6t4-(N -цианофеноксиформамидино)фенил) 5-метил-4,5-дигидро-З(2Н)-пиридази - 30 нона (2,0 г) в этаноле (100 мл) перемешивают 4 ч при кипении с обратным холодильником. Смесь упаривают при пониженном давлении с получением бледно-желтого масла, которое при

35 растирании с диэтиловым эфиром дает не совсем белое твердое вещество.

Его подвергают флаш-хроматографии в колонке на силикагеле (элюирование градиентом от хлороформа до хлороформ..4< метанола 40:1) с получением целевого соединения в виде белого твердого вещества (0,75 r), т.пл. 184-186 С.

Пример 6. 6-(4-(N -Цианогуанидино)фенил)-5-метил-4,5-дигидро3(2Н)пиридазинон.

6-(4-(N -Цианофеноксиформамидино)фенилJ-5-метил-4,5-дигидро-3(2Н)-пиридазинон (2,0 г) в этаноле (100 мл) перемешивают 3 ч при кипении с обратным холодильником в процессе пробулькивания газообразного аммиака через раствор. Реакционную смесь оставляют на ночь,а затем упаривают при пониженном давлении с получением липкого твердого вещества, которое обрабатывают кипящим этанолом, с получением белого твердого вещества (1, 1 r) . Перекристаллизация из мета нола дает целевое соединение (0,8 r), т.пл. 258-260 С (раэл.) .

Пример 7. 6-(4-(ЬР-МетилN -цианогуанидино)фенил -4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинон.

А. 6-(4-Аминофенил)-4,5-дигидро3(2H) -пиридазинон (5,0 г) и дифенилцианоиминокарбонат (0,9 г) перемешивают в безводном диметилформамиде (20 мл) в течение 4 ч при 120 С. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют и упаривают при пониженном давлении с получением масла. Это масло экстрагируют в кипящий этанол (1 л), который уменьшают по объему (до 30 мл) и фильтруют с получением 6-(4-(N цианофеноксиформамидино)фенил)-4,5дигидро-3(2Н)-пиридазинона (3,5 г).

Дальнейшая экстракция масла кипящим этанолом дает дополнительный продукт (2,2 г).

Б. Смесь указанного формамидина (3,2 г) и раствора метиламина (ЗЗХ в этаноле, 100 мл) перемешивают и нагревают 3 ч при кипении с обратным холодильником. Смесь фильтруют в горячем состоянии и твердое вещество промывают этанолом и диэтиловым ффиром. Примеси экстрагируют из этого твердого вещества в ходе перемешивания в кипящем этаноле. Затем твердое вещество растворяют в горячем диметилформамиде, обрабатывают древесным углем, фильтруют через диатомит и фильтрат упаривают.до небольшого объема (около 5 мл) . Затем его растирают с горячим этанолом (100 мл) и фильтруют с получением целевого соединения (1, 1 г),т.пл. 267 С (разл.).

Пример 8. 6-(4 (N -Циано)этоксиформамидино)фенил -5-метил4,5-дигидро-З(2Н)-пиридазинон.

6-(4-Аминофенил)-5-метил-4,5-дигидро-3(H)-пиридазинон и диэтилцианоиминокарбонат в диметилформамиде нагревают с получением целевого соединения. Это соединение вводят в реакцию с метиламином, получая соединение примера 1.

Новые производные дигидропиридазинола подвергают биологическим испытаниям по следующим активностям.

Кардиостимулирующая активность.

Соединения и их фармацевтически допустимые соли испытывают с целью определения кардиостимулирующей активности.

1396963

Морских свинок (500-700 r) обоих полов убивают, быстро удаляют сердца и переносят в анатомическую кюветку, содержащую оксигенированную среду.

При нахождении в ваннообразующей среде правый желудочек разрезают на две полосы. Каждую полосу подвешивают в ванне на 50 ют, содержащей раствор Кребса-Хензелайта при 37 С 1р и ванну пробулькивают 95% кислорода и 5% углекислого газа. Желудочковые полосы подвергают электрической стимуляции частотой 1 0 Гц при удвоенном пороговом напряжении. На полосах 1б создают напряжение покоя величиной

1,0 r и напряжение поддерживают постоянным с помощью повторной регулировки на протяжении периода уравновешивания (60 мин). Ваннообразующую сре- 20 ду часто .меняют в течение этого периода. После достижения стационарной опорной линии в ваннообразующую среду добавляют испытываемое соединение и вычерчивают кривую ответной реак- 25 ции для кумулятивной концентрации.

Использованные согласно изобретению соединения, подвергнутые испытанию, дают 50% увеличение силы сокращения желудочковой полосы при концент- 30 рациях в ваннообразующей среде, которые меньше 10 молярной, что демонстрирует их активность в качестве

Э позитивных инотропных средств.

В приведенной методике испытаний соединения согласно примерам характеризуются следующими показателями (кардиостимулирующая активность in

vltYо) .

Соедине ние при мера

0,2

Пр одолжительный эффект тз

0,2

0,2

Средний по продолжительности эффект

0,31

0,7

Пр одолжит ельный эффект

Средний по продолжительности эффект

Короткий эффект

1,6

5,6

Амринон

Наблюдаются минимальные изменения кровяного давления или частоты сердечных сокращений.

Кардиостимулирующая активность in

vivo (собаки в нормальном состоянии).

Соединение примера 1 повышает показатель dp/dt „„, для левого.желудоч4 ка у нахОдящихся В HopMBJIbHoM состоя нии собак после внутривенного введения при дозировке ниже О, 1 мг/кг.

Введение перорально вызывает позитивную инотропную реакцию при дозировке

О, 25 мг/кг н ниже. Указанная позитивная инотропная реакция сохраняется в течение 9-12 ч без изменения кровяного давления или частоты сердечных сокращений. Поэтому это соединение особенно выгодно по признаку сила— частота сердечных сокращений. В отличие от этого соединения амринон менее активен и продолжительность его действия короче.

1,4

1,4

0,8

8,5

1,4

40% при 31.6

Амрин он

Соединение при- EC х 10 М

-6 мера

Кардиостимулирующая активность

in vivo (анестезированные кошки) .

У анестезированных кошек, предварительно обработанных ганглиоблокатором (мекамиламином или пемпидином) и пропранололом, соединения согласно примерам вызывают устойчивое увеличение показателя dp/dt для левого желудочка (который .является индексом сократимости левого желудочка) при внутривенном введении. Доза, необходимая для повышения показателя dp/dt для левого желудочка íà 50% указана

ЕЛ,, ЕД,(мкм/кг) Относительная зо длительность

1396963

Сосудорасширяющая активность.

Соединение примера 1 вызывает зависимое от дозировки расширение сосудов задней части туловища анестеэированных крыс (аутоперфузированных при постоянном кровяном давлении) в пределах дозировки 1-10 мкмоль/кг (внутривенно). Доза, необходимая для

50% увеличения кроветока в задней части туловища, составляет 4,6 мкмоль/кг

Наблюдается значительная продолжительность эффекта.

Соединения примеров 3 4 5 и 7 испытывают на задней части туловища 15 аутоперфузированных анестезированных крыс (аутоперфузия при постоянстве кроветока). Доэы, необходимые для

15% снижения перфузионного давления в задней части туловища (расширение 20 сосудов), приведены ниже.

Соединение примера

25.44 мкг/кг

82 мкг/кг

130 мкг/кг

1 мг/кг

Расширение бронхов in vivo.

Морских свинок — самцов расы Dunkin-Hortley (530 r > 6 г) анестезируют сагаталом (пентобарбитал-натрий, 90 мг/кг внутрибрюшинно). Измеряют сопротивление воздушных дыхательных путей с применением разновидности классического метода Концетта-Росслера.

Для внутривенного введения выбрана доза 2-пиридилэтиламина, которая да- 4> ет приблизительно 100% увеличения сопротивления воздушных путей. Болюсные дозы соединения примера 1 вводят-(внутривенно) за 1 мин до введения

2-пиридилэтиламина.

Соединение примера 1 снижает индуцированный 2-пиридилэтиламином бронхоспазм. Пороговая доза для этого соединения 3, 16 .10 моль/кг. Доза соединения примера 1, которая снижает 2-пиридилэтиламиновый бронхоспазм на 50% (ЕД >>), составляет 3,9 !

10 моль/кг,что демонстрирует анти,бронхоспазматическую активность.

Ингибирование агрегации тромбоцитов in vitro.

Плазму подготавливают следующим образом. Кровь от 6 нормальных здоровых добровольцев смешивают с

3,8 мас.% (об,) тринатрийцчтрата (9 ч. крови: 1 ч. цитрата). Образцы центрифугируют при 150 g в течение

10 мин и отделяют надосадочную обогащенную тромбоцитами плазму (НОТП).

Концентрацию тромбоцитов в НОТП доводят до 300+50x10 /л тромбоцитов добавлением аутологической обедненной томбоцитами плазмы, Аликвотные пробы по 25 мкл раствора 40 мкг/мл соединения примера 1 инкубируют с аликвотными пробами по

225 мкл НОТП в приборе "Пейтон Агрегометер" в течение 3 мин; Изучают также контрольные растворы, один из которых аналогичен испытуемому раствору по рН раствора и его тоничности, а другой является раствором 0,9 мас.X (об) NaC1, По прошествии 3 мин к каждому раствору добавляют аликвотные пробы по 25 - кл раствора аденозиндифосфата при концентрации 20 мкмоль.

Записывают данные реакции агрегирования до ее завершения с максимум

3 мин. Процедуру повторяют, используя разные агрегирующие средства:

100 мкг коллагена; 100 мкмоль адреналина или 5 мл/мл арахидоновой кислоты вместо аденозин-дифосфата.

Реакции агрегирования, индуцированные различными агрегирующими средствами, измеряют для тромбоцитов от каждого донора. Результаты оценивают визуальным наблюдением индикации агрегирования, выдаваемой агре-. гометром "Пейтон", и полуколичественно определяют измерением светопропускания спустя 3 мин после добавления индуцирующего средства.

Соединение примера 1 при конечной концентрации 5 мкг/мл ингибирует агрегацию тромбоцитов, индуцированную растворами аденозиндифосфата, арахидоновой кислоты, коллагена или адреналина. Последовательные разбавления этого соединения должны быть приготовлены и испытаны на ингибирование агрегации,. индуцированной аденоэин-дифосфатом. Вторая волна агрегации полностью ингибировалась соединением примера 1 при 0,5 мкг/мл и более.

1396963

10 где К, — водород или метил;

R < — aogopop или С, -С -алкил, отличающийся тем, что соединение общей формулы

Производные дигидропиридазинона проявляют новый вид биологической активности для данного ряда соединений, так как ближайшие соединения аналогичной структуры диалкилгуанидинофенилпиридазиконы не проявляют инотропной активности.

Новые производные дигидропиридазинона не проявляют признаков токсичности при дозировках, достигающих стократной предполагаемой терапевтической дозы, при оральном введении собакам в нормальном состоянии.

Формула изобретения 1ñ

Способ получения производных дипИдропиридазинона общей формулы

ЖК

Н н-с-ma> МСМ

NH- С

„МН

0 где R, имеет указанные значения

L — удаляемая группа, выбранная иэ группы, состоящей из С,-С алкилтиогруппы, С -С -апкоксигруппы или феноксигруппы, подвергают взаимодействию с амином

25 общей ИН К, где К имеет укаэанные значения.

R1

Составитель H.Êàïèòàíîâà Редактор,О.Спесивых Техред Л.Сердюкова Корректор А.Обручар

Заказ 2508 /59 Тираж 370 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4