Способ оценки состояния симпатоадреналовой системы человека

 

Изобретение относится к биохимии , касается медицинских исследований для уточнения механизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением обмена катехоламинов, например адреналина (А), норадреналина (НА), и повышения эффективности лечения. Цель изобретения - повышение точности и специфичности способаа Для этого из пробы крови пациента отделяют эритроциты. трехкратно их отмьгеают в охлажденном, физиологическом растворе, добавляют 8-10 мг ЭДТА к 1-2 мл эритроцитарной взвеси и экстрагируют катехоламины (А и НА) в 0,4 н.надхлорной кислоте при 3Q мин. После отделения белого хлопьевидного осадка путем центрифугирования сливают полученный супернатант доводят рН до 8,5. Проводят адсорбционную колоночную хроматогра- , в качестве сорбента используя окись алюминия. Проводят элюцию катехоламинов, двукратно добавляя 3,5 мл 0,25 Иоуксусной кислоты для получения уксусно-кислого элюата и дальнейшегое окисления катехоламинов. Элюат окисляют ферроцианидом калия в фосфатном буфере рН 4,2-6,2 для получения продуктов окисления А и НА. Измеряют флюоресценцию А и .НА, регистрируют разницу опытных и контрольных проб и по их значениям судят о тяжести заболевания . 1 табл. (Л ю СП 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИМ

РЕСПУБЛИН (51) 4 G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2l) 4044945/28 14 (22} 27 ° 03 ° 86 (46) 07 ° 09 ° 88, Бюл. Р 33 (7l) Харьковский научно исследовательский институт терапии

{72) Л.К.Бахова и П.А,Калиман (53) 612.015 (088.8) (56) Методы клинической биохимии гормонов и медиаторов ° /Под ред

В.В.Меньшикова. - И.; 1969, с. 160е (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ СИИПАТО»

АДРЕНАЛОВОИ CHCTRMM ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к биохимии, касается медицинских исследований для уточнения механизмов развя» тия сердечно сосудистых заболеваний, связанных с нарушением обмена кате холамииов, например адреиалина (А), норадреналина (НА), и повышения эф

Фективности лечения. Цель изобрете ния - повышение точности и специфичности способа, Для этого из пробы крови пациента отделяют эритроциты, Ъ

„„SU„,; 1422158 А1 трехкратно их отмывают в охлажденном. физиологическом растворе, добавляют

8 10 мг ЭДТА к l 2 er эритроцитарной взвеси и экстрагируют катехоламины (А и НА) в 0,4 н.надхлорной кислоте при 0 С 3g мин. После отделения белого хлопьевидного осадка путем центриФугирования сливают полученный супер» натант, доводят рН до 8,5. Проводят адсорбционную колоночную хроматографию, в качестве сорбента используя окись алюминия, Проводят элюцию кате» холаминов, двукратно добавляя 3,5 мп

0,25 н.уксусной кислоты для получения уксусно-кислого элюата и дальнейшего, окисления катехоламинов. Элюат окис ляют Ферроцианидом калия в Фосфатном буфере рН 4,2»6,2 для получения про дуктов окисления А и НА. Измеряют флюоресценцию А и НА, регистрируют разницу опытных и контрольных проб и по их значениям судят о тяжести saболевания. 1 табл.!

422)58

Изобретение относится к биохимии ч может быть использовано в медицинских исследованиях для уточнения механизмов развития сердеччо-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением

5 обмена катехоламинов, например адреналина (А), норадреналина (НА),,и повышения эффективности лечения.

Цель изобретения повышение точности и специфичности способа.

Способ осуществляют следующим образом, Берут 3 -- 5 мл крови из вены в предварительно охлажденные пробирки, содержащие 4-6 капель 6Х-ного раствора этиленпиаминтетраацетата натрия (ЗДТА). Отделявт плазму от эритроцитов путем центрифугирования (при количестве оборотов, равных 1000 щ, об/мин в течение 5 мин ). Проводят трехкратную промывку зритроцитов охлажденным Физиологическим раствором.

Дсбавлявт 8-10 мг ЭДТА к 1-2 мл зритроцитарной взвеси и эксирагирувт кате.25 холамины (А и НА) из мембраны эритроцитов в 13-14 мл 0,4 н.надхлорной кис=» лоте при 0 С в течение 30 мин. Фильт" рувт полученный раствор„ добавляют при постоянном перемешивании охлажденный 5 н.раствор углекислого калия до значения рН среды 3-4.

Отделяют образовавшийся белыи хпопьевидный осадок путем центрифуги: рования на холоде в течение 5 мин при

3000 об/мин. Сливают полученный супер"35 натант и доводят с помощью 1 н,раствора аммиака до рН 8 5. Проводят адсорбционную колоночную хроматографию с использованием в качестве сорбента окиси алюминия полученного супер натанта в количестве 10 мл, Проводят элвцив катехоламинов путем двукрат ного добавления 3,5 мл 0,25 н.уксус ной кислоты для получения уксусно кислого элвата и дальнейшего окисле45

- ния катехоламинов, Доводят уксуснокислый элват до рН 4,2 с помощью 1 н. раствора аммиака и окисляют Ферроци«" анидом калия в Фосфатном буфере рН

4,2 для получения продукта окисления адреналина, Доводят уксусно киспый элюат до рН 6,2 с помощьв 1 н.раствора аммиака и окислявт Ферроцианидом иалия в Фосфатном буфере рН 6,2 дпя получения продуктов окисления А и НА. 5

Измеряют фпворесценцив А на Флюориметре Specol-10 в уксусно-кислом элюате рН 4,2 при дпине волны возбуждения 436 нм и длине волны Флюоресценции 550 нм. Измеряют суммарную флворесценцив А и НА в уксусно-кислом элвате при рН 6,2. Регистрируют разницу опытных и контрольных проб. Определяют содержание A и НА по формулам а 10 7 10 -5 458

Е 1, 1000 а 10, 7 ° lo« 5 91

Е, 1. 1000 где А - содержание ядреналина, нмоль/л;

НА содержание НА норадреналина,. нмоль/л а - флворесценция адреналина н норадреналина соответственно в 1 мл измеряемой пробы (в условиях измерения показания опытной пробы отнять контрольнуи

Е-Е, - флворесценция 1 нг адреналина (Е) и норадреналина (Е ) в

1 мл пробы (в условиях из мерения выводится при калибровке прибора};

10„- количество супернатанта, по шедшее на адсорбейт;

7 - количество элвата;, 10<- количество элюата при окис ленин;

1000 - коэффициент перевода нано грамм в микрограммы;

5,458 и

5,91 - коэффициенты пересчета в NCH.

В норме средние значения А и НА в эритроцитах равны 1,53+0,23 нмоль/л и 0,74+0 16 нмоль/л соответственно.

У больных гипертонической болезнью I-й степени содержание A. в три раза больше и равно 4,58+0,38, HA в

4,5 раза больше относительно нормы и равно 3,31 0,32 нмоль/л. У больных

ИБС содержание A в эритроцитах в

4,4 раза больше относительно нормы и равно 6,68+0,77, à НА - в 15 раз больше и равно 11,35+3,09 нмоль/л.

Пример 1. Обследован практически здоровый мужчина Б,, ?1 г. направленный на профилактический осмотр в рамках эпидемиологического обследования. После исследования пред лагаемым способом катехоламинов(А и

НА) в эритроцитах получены значения

А 1,62 нмоль/л; НА 0,59 нмоль/л, а при исследовании базовым способом в

142215

Формула изобретения

Здоровые

1,61 2,59 а

2,00-3,24

70 1,30-1,76 0,58-0,90 90

Больные пограничной гипер» тони ей

l5 2 э08»3э91 3э,70 6з 05

56 1 >48 2 е22 2 ° S ç 80 76

Составитель Н.Гуляева

Редактор И.Иулла Техред А Кравчук

Корректор Н.Король

Заказ 4425/45 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 плазме - А 2,10 нмоль/л; HA 4,72 нмоль/л. Заключение: в плазме результаты показателей для НА не укладываются в границы, определяемые как

5 нормальные. В эритроцитах показатели находятся в границах, определяемых как нормальные.

Пример 2. Больной Б., 19 лет поступил в клинику с диагнозом погра- 1р яичная гипертония. После обследования больного предлагаемым способом получены значения А 1,81 ; НА

3112 нмоль/л, а при обследовании больного базовым способом А 1,72 нмоль/л, 15

НА 4,96 нмоль/л.

Заключение: в плазме результаты показателей укладываются в границы, определяемые как нормальные, увеличено лишь содержание НА, в эритроцитах 20 показатели отличаются от нормальных значений и укладываются в границы, установленные для группы больных (15 больных) с диагнозом пограничная гипертония. 25

Осуществлена сравнительная оценка базового и предлагаемого способов путем обследования 25 доноров (здороз

4 вые лица) и группы больных пограничной гипертонией (15 больных) . Результаты представлены s таблице.

Таким образом, совпадение с доверительными границами нормы и определяемой патологии предлагаемым способом по сравнению с базовым повышает точность исследования на 20Я.

Способ оценки состояния симпатоадреналовой системы человека путем отбора крови, экстракции катехоламинов хлорной кислотой, отделения белка, нейтрализации, адсорбции на окиси алюминия, элюции уксусной. кислотой с последующим окислением катехоламинов и флюориметрическим определением их содержания, о т л и ч а ю.шийся тем, что, с целью повышения точности и специфичности способа, в качестве биологического материала используют эритроциты, трехкратно отмытые физиологическим раствором, а экстракцию катехоламинов проводят

0,4 н.хлорной кислотой.