Сорбент для выделения и очистки тромбопластина и способ его получения

 

Изобретение относится к химически модифицированным кремнеземным сорбентам для хроматографии биополимеров и может быть использовано для выделения и очистки тромбопластина. Получают сорбент на основе макропористого кремнезема с диаметром пор 45-75 нм, содержащий на поверхности группы формулы -(СН2)зОСН2Х хСН(ОН)СН20СН2СН(ОН)СН2ОН при их поверхностной концентрации 1,2-2,6 групп на 1 нм. Способ получения сорбента заключается в последовательной обработке кремнезема с диаметром пор 45-75 нм 7-глицидооксипропилтриэтоксисиланом и глицерином в среде диоксаца в присутствии эфирата трехфтористого бора. При использовании сорбента, получаемого по предлагаемому способу, достигается выход тромбопластина 91-94% при очистке 5,6- 6,1 раз, что превышает характеристики известных сорбентов, предназначенных для аналогичной цели. 2 с.п. ф-лы, 1 табл. с S (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1428464 А1 (50 4 0 01 Ы 30/48, В 01 D 15/08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A8TOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ ld ОТНРЫТИЙ (21) 4205981/31-26 (22) 06.03.87 (46) 07.10.88. Бюл. № 37 (71) МГУ им. М. В; Ломоносова и Львовский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (72) С. М. Староверов, И. В. Фадеева, Г. В. Лисичкин, Ю. В. Магеровский, В. А. Монастырский и А. В. Гайда (53) 661.183 (088.8) (56) Мчедлишвили Б. В., Староверов С. М., Лисичкин Г. В. Разделение смесей высокомолекулярных соединений хроматографией на кремнеземе с привитыми гликолевыми группами. — Высокомолекулярные соединения, 1983, т. 25, № 8, с. 1780 †17.

Авторское свидетельство СССР № 10!0063, кл. С 07 F 7/18, 1981. (54) СОРБЕНТ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И

ОЧИСТКИ ТРОМБОПЛАСТИНА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ (57) Изобретение относится к химически модифицированным кремнеземным сорбентам для хроматографии биополимеров и может быть использовано для выделения и очистки тромбопластина. Получают сорбент на основе макропористого кремнезема с диаметром пор 45 — 75 нм, содержащий на поверхности группы формулы — (СН ) зОСН2х

> CH(OH)CHgOCH CH(OH)CHgOH при их поверхностной концентрации 1,2 — 2,6 групп на 1 нм . Способ получения сорбента заключается в последовательной обработке кремнезема с диаметром пор 45 — 75 нм у-глицидооксипропилтриэтоксисиланом и глицерином в среде диоксаиа в присутствии эфирата трехфтористого бора. При использовании сорбента, получаемого по предлагаемому способу, достигается выход тромбопластина 91 — 94% при очистке 5,6—

6,1 раз, что превышает характеристики известных сорбентов, предназначенных для аналогичной цели. 2 с.п. ф-лы, 1 табл.!

428464

Изобретение относится к химически модифицированным кремнеземным сорбентам для хроматографии биополимеров и может быть использовано для выделения и очистки тромбопластина.

Тканевый тромбопластин (фактор I I I свертывания крови) представляет собой высокомолекулярный липопротеидный комплекс с мол. м. 300000. Он является инициатором внешнего пути свертывания крови, активируя совместно с факторм VIIa тром- !О бокиназу, которая активирует протромбин, превращая его в активный тромбин.

Целью изобретения является повышение выхода и степени очистки тромбопластина и создание способа получения сорбента, обеспечивающего возможность его использования при хроматографическом выделении тромбопластина.

Пример !. В трехгорлую колбу на

500 мл с термометром, мешалкой и обратным холодильником помещают 20 г сило- 20 хрома С-80 (средний размер пор 50 нм) и заливают ацетатным буферным раствором рН 5,6 в количестве 100 мл. Суспензию нагревают на водяной бане до 90 С и добавляют 5 г модификатора — у-глицидооксипропилтриэтоксисилана. Реакционную

25 смесь нагревают в течение 1 ч при перемешивании. Полученный модифицированный носитель промывают на фильтре водой, ацетоном, эфиром и далее абсолютированным диоксаном по 100 мл. Промытый сорбент помещают в трехгорлую колбу на 500 мл, добавляют 100 мл абсолютного диоксана, 5 мл эфирата трехфтористого бора, 25 мл глицерина и перемешивают суспензию. После перемешивания суспензию выдерживают

5 мин при комнатной температуре, затем

30 мин нагревают на водяной бане, фильтруют, промывают диоксаном, водой, 5Я-ной уксусной кислотой, водой, ацетоном, эфиром и высушивают на воздухе. Содержание углеро1а в полученном сорбенте 2,5Я, что соответствует 1,2 привитых групп на 1 нм поверхнос- 40 ти носителя. B ИК-спектрах сорбента обнаружены полосы поглощения в области, см

3600 †34; 2965 †29; 2815 †28.

Полученный сорбент используют для очистки тромбопластина. Экстракт липопротеид ного комплекса тромбопластина готовят следующим образом.

5 г лиофильно высушенного кадаверного мозга человека гомогенизируют в фарфоровой ступке с 50 мл 0 15 М хлористого натрия и центрифугируют при

6000 об/мин в течение 20 мин. Осадок отбрасывают, а полученный супернатант подвергают хроматографической очистке.

Колонки размером 20Х0,8 см наполняют сорбентом и уравновешивают раствором, в котором проводили экстракцию тромбопластина. Через колонку со скоростью 0,08—

0,4 мл/см мин пропускают экстракт тромбопластина, собирая фракции по 0,85 мл.

Во всех фракциях определяют мутность (поглощения света при 540 нм и длине оптического пути 1 см), содержание белка при помощи кумасси 6-250, а также специфическую активность.

При использовании предложенного сорбента выход составляет 91Я при очистке в

5,8 раз.

Пример 2. В условиях примера 1 варьируют диаметр пор исходного кремнезема, снимают ИК-спектры получаемых сорбентов, из данных анализа на углерод и удельной поверхности определяют содержание групп на 1 нм поверхности, полученные сорбенты используют для выделения и очистки тромбопластина.

В таблице приведены результаты очистки тромбопластина на предложенном сорбенте с различным диаметром пор, и на известном сорбенте.

Анализ данных, представленных в таблице, показывает, что эффект достигается при использовании сорбента предложенной структуры при диаметре пор исходного носителя 45 — 75 нм и количестве привитых групп 1,2 — 2,6 групп на 1 нм- .

Формула изобретения

1. Сорбент для выделения и очистки тромбопластина на основе макропористого кремнезема с диаметрами пор 45 — 75 нм с химически привитыми к его поверхности гликолевыми группами, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и степени очистки тромбопластина, он содержит гликолевые группы формулы — (СН ) зОСН СН (ОН) СН ОСН СН (ОН) )()(СН )ОН при их поверхностной концентрации 1,2—

2,6 групп/нм-.

2. Способ получения сорбента, включающий модифицирование макропористого кремнезема у-глицидооксипропилтриэтоксисиланом с последующей обработкой гидроксилсодержащим органическим соединением в среде диоксана в присутствии эфирата трехфтористого бора, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности его использования и ри хроматографическим выделении тромбопластина с высоким выходом и высокой степенью чистоты, в качестве гидроксилсодержащего соединения используют глицерин.

1428464

d пор, нм

8д м2 /г

Сорберт

Степень очистки

Количество привитых групп, групп на

1 нм

Предложенный

СХ-2

54 110

3,3

5,9

125

6,1

116

5,8

140

5 6

170

2,5

270

1,2

490

1,0

125

1,2

Известный

СХ-3

125

5,4 80

5,4 83

С-80

116

Сставитель Т. Чиликина

Редактор Г. Волкова Техред И. Верее Корректор В. Романенко

Заказ 5072/13 Тираж 847 Подпис иое

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

СХ-750

СХ-3

С-80

С-120

КСК-1

КСК-2

КСС-3

СХ-3

79 1 45 1,5

92 2,30 1,6

94 5,80 2,6

91 2,50 1,2

93 330 13

80 4,30 1,4

85 6,80 1,4

78 9 80 1,1

50 2 25 1,0