Способ получения противовирусного биополимера
Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для регуляции биохимических процессов живой клетки. Цель изобретения - повышение активности препарата за счет того, что в качестве полимера используют казеин, протамин, стрептомицин, которые нагревают дополнительно на кипящей водяной бане при значениях рН 1,0 - 2,0, а затем при рН 8,0 - 9,0. По предлагаемому способу получаемые полимеры способны до 6 lg ингибировать вирусы гриппа и вирус венесуэльского энцефаломиелита лошади, в то время как препарат, полученный по известному способу, вообще не способен ингибировать эти вирусы.
Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для регуляции биохимических процессов живой клети. Цель изобретения повышение активности препарата за счет того, что в качестве полимера используют казеин, протамин, стрептомицин, которые нагревают дополнительно на кипящей водяной бане при значениях рН 1,0-2,0, а затем при рН 8,0-9,0. Способ осуществляется следующим образом. При использовании в качестве полимера казеина. В 1%-ный раствор казеина добавляют муравьиную кислоту до конечной концентрации 0,1% При этом рН раствора составляет 1-2. Далее раствор нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Затем раствор доводят до щелочных значений рН 8-9 с помощью 1 н. NaOН и опять нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. После этого для удаления непрореагировавшей муравьиной кислоты образец диализуют в течение 4 ч против 0,05 М фосфатного буфера рН 8 и используют для вирусологических исследований. При использовании в качестве полимера протамина. К 0,1%-ному раствору протамина добавляют глиоксилевую кислоту до конечной концентрации 0,1% Все последующие процедуры осуществляют аналогично указанным, когда в качестве полимера используют казеин. При использовании в качестве полимера стрептомицина. Смешивают равные объемы 0,02 М раствора стрептомицина с 0,02 М раствором пиридоксальфосфата (коферментная форма витамина В6). В полученном растворе казеина растворяют глюкозу с конечной концентрацией 5% Всю последующую обработку полимера ведут аналогично обработке казеина и протамина. П р и м е р 1. 1%-ный раствор казеина доводят до рН 1,0 концентрированной муравьиной кислотой. Далее раствор нагревают на кипящей водяной бане 16 мин и после его остывания оттитровывают 1 н. раствором NaОН до рН 8,0 и вновь нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. Непрореагировавшую муравьиную кислоту удаляют посредством диализа образца в течение 4 ч против 0,05 М фосфатного буфера рН 8 и образец используют для вирусологических исследований. Клетки фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) инфицировали вирусом венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ-230), множественностью 0,00005 ТЦД50 клетка. Одновременно с вирусом был внесен препарат в дозе 2 мг/мл. Контролем служили флаконы с вирусом, но без препарата. После выдерживания клеток в термостате при 36оС в течение 48 ч был определен инфекционный титр накопившегося вируса по оценке его цитопатического действия (ЦПД) на клетки ФЭК. Для клеток, не содержащих препарата, титр составил 7,5 lg ТЦД50/мл, а для клеток, его содержащих, 1,5 lg ТЦД50/мл. Таким образом, подавление вируса составило 6,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 2. Ход работы осуществлялся аналогично примеру 1, за исключением того, что образцы были нагреты при рН 1,5 и 8,5. В этом случае подавление вируса ВЭЛ также составило 6,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 3. Ход работы осуществлялся аналогично примеру 1, за исключением того, что образцы нагревались при рН 2,0 и 9,0. В этом случае подавление вируса ВЭЛ также составило 6,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 4. К 0,1%-ному раствору протамина добавляли глиоксилевую кислоту до конечной концентрации 0,1% Далее раствор был доведен до рН 2,0 с помощью 1 н НСl. Все последующие операции осуществлялись аналогично примеру 1. В этом случае подавление вируса ВЭЛ составило 5 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 5. В 1%-ном растворе казеина растворяют глюкозу до конечной концентрации 5% Раствор доводят до рН 1,0 с помощью 1 н. НСl и нагревают на кипящем водяной бане 10 мин. Затем раствор охлаждают и оттитровывают 1 н. NaOН до рН 8,0, после чего опять нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. Все последующие процедуры выполняют аналогично примеру 1, за исключением того, что не проводят диализа вследствие нетоксичности глюкозы. Кроме того, вместо вируса ВЭЛ берут вирус гриппа А/FPV/R osтоск, множественностью 0,001 ТЦД50/клетка. Подавление вируса в этом случае составляет 2,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 6. Ход работы выполнялся аналогично примеру 5, за исключением того, что образцы последовательно нагревались при рН 1,5 и рН 8,5. В этом случае подавление вируса гриппа также составило 2,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 7. Ход работы выполнялся аналогично примеру 5, за исключением того, что образцы последовательно нагревались при рН 2,0 и 8,0. В этом случае подавление вируса гриппа составило 2,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 8. Смешивали равные объемы 0,02 М раствора стрептомицина и 0,02 М раствора фруктозо-1,6-дифосфата. Все последующие процедуры выполнялись аналогично примеру 5. Подавление вируса гриппа в этом случае составило 4,0 lg ТЦД50/мл. П р и м е р 9. Смешивали равные объемы 0,02 М раствора стрептомицина и 0,02 М раствора пиродоксальфосфата (коферментная форма витамина В6). Все последующие операции выполнялись аналогично примеру 5. В этом случае подавление вируса гриппа составило 5,0 ТЦД50/мл. Таким образом, предлагаемый способ позволяет достичь поставленную цель. Способ гораздо эффективнее известного, поскольку получаемые в нем полимеры способны до 6 lg ингибировать вирусы гриппа и ВЭЛ. Препарат, полученный по известному способу, вообще не способен ингибировать вирусы гриппа и ВЭЛ. Кроме того, способ прост и доступен, тогда как известный для своей реализации нуждается в предварительном получении диальдегиддекстрана. Реализация предлагаемого способа требует по крайней мере в 5-6 раз меньше времени по сравнению с известным.
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНОГО БИОПОЛИМЕРА путем воздействия на полимер альдегидо- или кетосоединений, отличающийся тем, что, с целью повышения активности препарата, в качестве полимера используют казеин, протамин или стрептомицин, смесь дополнительно нагревают на кипящей водяной бане при при значениях pH 1,0 - 2,0, а затем при pH 8,0 - 9,0.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 8-2000
Извещение опубликовано: 20.03.2000
