Способ определения иммуносупрессивного действия ксенобиотиков

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в ксенобиохимии и иммунотоксикологии. Изобретение позволяет оценивать иммунотоксичность метаболитов микросомального окисления ксенобиотиков путем подсчета антителообразующих клеток в селезенке сингенных мышей. Целью изобретения является повышение чувствительности способа и его упрощение. Цель достигается тем, что проводится инкубация клеток селезенки мышей непосредственно в инкубационной смеси, состоящей из 0,2 М Трис HCL буфера, 150 мМ HCL, 10 мМ MGCL 2, 3 мМ НАДФН, 2 мг/мл инкубационной среды микросом печени мышей и осаждение клеток селезенки после остановки реакции при 1500 об/мин. Разработанный режим позволяет с высокой точностью оценивать иммунотоксичность метаболитов микросомального окисления ксенобиотиков.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 0 01 1! 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 .(21 ) 4354562/30-14 (22) 16. 11. 87 (46 ) 23.08.90. Бюл. № 31 (71 ) Красноярский государственный медицинский институт (72 ) Ю, В. Котловский, Б, Ф. Жир нов, Л.Ю. Теле гин и Л, А. Пев ницкий (53) 6 !5. 375 (088. 8) (56 ) Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 198!, ¹ 7, с. 57-60. (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОСУПРЕССИВНОГО ДЕЙСТВИЯ КСЕНОБИОТИКОВ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в ксенобиохимии и иммунотоксикологии. Изобретение позволяет оценивать иммунотоксичность метаболитов микросомального

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для проведения первичного скрининга веществ на иммуномодулирующую активность.

Предлагаемый способ позволяет оценивать иммуномодулирующее влияние продуктов метаболизма ксенобиотиков.

Цель изобретения вЂ” упрощение и повышение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Микросомы печени мышей линии БА1В/с или РВА/2 инкубируют н присутствии ксенобиотика (в опытах использонан . акриламид). В 1 мл инкубационной смеси содержится 2-3 мг белка микросом;

0,2 M трис-НС1 буфера (рН 7,2), О, 5 мМ ЭДТА; 150 мМ КС1; 10 мМ MgC1, 9 мМ акриламида (А); 125 млн. клеток селезенки мьппей СВА, Общий объем инкубационной сМеси 2,4 мл. Pеакцию ини„„SU„„1587446 А 1

2 окисления ксенобиотиков путем подсчета антителообразующих клеток в селезенке сингенных мышей, Целью изобретения является повышение чувствительности способа и его упрощение. Цель достигается тем, что проводится инкубация клеток селезенки мышей непосредственно в инкубационной смеси, состоящей из 0,2 M трис-HCl буфера, 150 мМ НС1,.

10 мМ МцС1, 3 MM НАДФН, 2 Mr/ìë инкубационной среды микросом печени мышей, и осаждение клеток селезенки после остановки реакции при 1500 об/мин.

Разработанный режим позволяет с высокой точностью оценивать иммунотоксичность метаболитов микросомального окисления ксенобиотикон.

1 циируют добавлением 3 мМ НАДФН, через

30 мин реакцию останавлинают добавлением большого объема охлажденной до

4 С среды 199 с антибиотиками. Затем фф и о спл е ноциты ос ажд ают центрифугиров анием при 1500 об/ьин (4 вЂ” 5000g) в те- (, О чение 7-10 ьын, Далее клетки дважды отмывают средой 199 центрифугировани- р ем н том же режиме и вводят н объеме

1 мл вместе с 4.х10 эритроцитон барана внутривенно сингенным мышам-pe- . ципиентам. Для определения иммуностимулирующей актинности используют дозу эритроцитов, равную (0,5-1) л 107 клеток. Мьппи-реципиенты за 3-4 ч до клеточного переноса получают внутрибрк шинно 200 мг/кг циклофосфамида для подавления собственной иммунореактинности. Через 5 дней определяют уровень иммунпoro ответа по числу антителообразующих клеток метоцом Ерне, 1587446

Формул а из о бр ет ения

Составитель П,Бонарцев

Техред М.Дидик .

Редактор О.Юрковецкая

Корректор М,Пожо

Заказ 2417 Тираж 511 Подписное

В11ИИПИ Государ твениого комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", r Ужгород, ул. Гагарина, 101

П р и. м е р 1. Первона чально изучали иммунодепрессивное действие А по известному способу. 9 мМ А инкуби-. ровапи с 0,2 М трис-НС1 буфера (рН

7,2), микросомами печени мышей BALB/ñ или ОБА/2 в количестве 2-3 мг белка, 150 MN KCl,. ЧО мМ ifgCly, 0,6 мМ ЭДТА, Объем инкубационной смеси 1 мп. Реакцию инициировали добавлением 3 мМ

НЛДФН и через 15 мин останавливали помещением проб в ледяную баню и добавлением 2 wz холодной инкубационной среды. Далее микросомы осаждали центрифугированием при 105000g и 4 С в течение 1 ч. Полученный супернантант замораживали при -20 С и на следующий день определяли его иммунодепрессивную активность, Размороженный супернат ант фип ьтр о вали чер ез милли по" ровый фильтр (диаметр пор 0,45 мкм) и инкубировали в течение 1 ч с нормальными клетками селезенки мышей СВА, Инкубационная смесь содержала 1 мп супернатанта и 300 мпн,тест-клеток в

1,4 мл среды 199. Затем клетки трижды отмывали центрифугированием и в адоп тивном сингенном переносе опр еделяли их иммунореактивность, как описано. Уровень иммунного ответа выражали в про- 3п центах к контролю (инкубация клеток в среде 199 ), Достоверность различий при Р.60,05 определяли с помощью критерия Стьюдента, Данные свиде тел ьствуют об от сут ствии достоверных различий между опытными и контрольной группами, Таким образом, при использовании известного способа не обнаружили иммунодепресси в но го де и ст вия А.

Пример 2, Иммунодепрессивное действие А исследовали согласно предложенному способу.

B .öàíí0é постановке опыта было выявлено иммунодеприссивное действие А, которое обусловлено влиянием нестабильных метаболитов. При сравнении схем опытов и результатов, приведенных в примерах 1 и 2, подтверждается преимущество предлагаемого способа.

Способ определения иммуносупрессивного действия ксенобиотиКов, включающий инкубацию ксенобиотиков с микросомами клеток печени мышей с последующей оценкой действия образующихся метаболитов на тест-клети селезенки мппей в системе адоптивного сингенного переноса с подсчетом антителообра" зующих клеток, о тли ч ающийс я тем, что, с целью упрощения и повьппения чувствительности способа, тест-клетки селезенки инкубируют одновременно с ксенобиотиками и ьикросомами печени,

Изобретение относится к биологии, в частности к иммунохимии

Способ диагностики инфаркта миокарда // 1582131

Изобретение относится к медицине, а именно к области диагностики инфаркта миокарда

Способ определения иммунокомпетентных клеток // 1582130

Инкубационная среда для иммунорадиометрического определения пролактина в сыворотке крови // 1578659

Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний

Способ индукции супрессорных клеток в периферической крови людей // 1578658

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки иммунного статуса

Способ оценки резистентности организма // 1578657

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования течения заболевания и выбора тактики лечения неспецифических заболеваний различной этиологии

Способ дифференциальной диагностики функциональных и органических поражений желчевыводящих путей // 1578656

Изобретение относится к медицине, а именно к способам лабораторной диагностики поражений желчевыводящих путей

Способ удаления т-лимфоцитов из суспензии мононуклеарных клеток человека // 1577520

Изобретение относится к иммунологии

Способ выделения вируса гепатита а в культуре клеток // 1577519

Способ оценки клеточных иммунных реакций in vitro // 1575711

Изобретение относится к медицине, а именно к способам оценки функций эффекторов клеточного иммунитета , и может быть использовано в исследованиях патогенеза, механизмов иммунокоррекции и диагностике иммунопатологических процессов, Цель изобретения - повышение точности оценки, а также упрощение способа за счет оценки миграционной и адгезивной способности клеток с использованием U-образной формы лунки планшета и двух доз митогена или антигена

Способ диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных детей // 2101707

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных

Способ выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам // 2102080

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам

Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi // 2102081

Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих

Устройства для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере одного биологического вещества из множества биологических образцов, способ и реактив для применения указанных устройств // 2102758

Изобретение относится к устройству для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере, одного биологического вещества из множества биологических образцов, а также к способу и реактивам для использования указанного прибора

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Способ определения биологически активных веществ в жидкостях и устройство для его осуществления // 2102760

Изобретение относится к области медицины, медицинской техники, ветеринарии, экологии и может быть использовано для определения биологически активных веществ в любых биологических жидкостях, окружающей среде, пищевых продуктах, в частности в диагностике вирусных, бактериальных, паразитарных и соматических заболеваний, а также для контроля эффективности лечения

Способ диагностики спаечной болезни брюшины у детей // 2103689

Изобретение относится к медицине, а именно к детской хирургии и клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики спаечной болезни брюшины у детей, оперированных по поводу острого аппендицита

Способ определения функциональной активности лейкоцитов при беременности // 2103690

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины

Способ диагностики хронического простатита // 2103691

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита